柱后衍生化法分析食品和膳食补充剂中的抗氧化剂

METHOD ABSTRACT/231CATALYST FOR SUCCESS METHOD ABSTRACT/231 柱后衍生化法分析食品和膳食补充剂中的抗氧化剂 抗氧化剂是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。植物中发现的许多酚类化合物以及一些维生素，都具有抗氧化活性。通常用比色法衡量总抗氧化能力，表示为Trolox(水溶性维生素E)当量或没食子酸当量。 目前对抗氧化剂测试方法的要求不仅是能检测样品的总抗氧化能力，还要求根据抗氧化剂的生物效益对其进行区分和量化分析。我们的方法研究表明，比色法试剂如福林酚试剂和ABTS试剂，均可以通过高效液相色谱柱后衍生化法对食品和膳食补充剂中抗氧化剂进行分析。 福林酚测试法，在碱性条件下，多酚或其他抗氧化剂可以将磷钨钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚或其他抗氧化剂含量成正比，可以用分光光度计进行测定。该试剂对酚类和非酚类抗氧化剂，包括维生素C、维生素B1和叶酸，具有很高灵敏度，对许多抗氧化剂检测限低至1 ug/mL。 ABTS试剂用于总抗氧化能力 (TEAC) 法。在抗氧化物存在时ABTS+的产生会被抑制，并可通过紫外检测器检测吸光度间接计算抗氧化能力，该检测方法可以分析40-200 ug/ml的抗氧化剂。 使用上述两种试剂可以对目标化合物进行定性和定量分析，并通过与Trolox或没食子酸标准曲线图谱比较计算样品的总抗氧化能力。 方法 样品准备： 新鲜水果：将10g新鲜水果与20mL水/甲醇(50：50)混合均匀，放置5min，然后离心用0.45微米过滤器过滤。 干果：将4克干燥果实研磨并用20毫升甲醇溶解。在机械振动筛上摇动1小时。离心用0.45微米过滤器过滤。 膳食补充剂：将100毫克的细磨样品与10毫升甲醇混合。机械振动筛上震摇动30分钟。然后离心用0.45微米过滤器过滤。 干茶：将1克的干茶叶与25毫升水/甲醇(50：50)混合放置5min，离心用0.45微米过滤器过滤。另外，将1克干茶叶叶25毫升热水混合，加热5分钟，冷却，离心用0.45微米过滤器过滤。 提取物可以用水/甲醇(50：50)稀释。 ( 分析方法： ) 色谱普：反相C18柱， 4.6x150mm ( 柱温：40℃ ) ( 流速：1mL/min ) 流动相：4.8%乙酸水溶液，甲醇 ( 进样体积： ：10-50uL ) ( 柱后衍生化条件： ) 柱后衍生化体系： Pinnacle PCX 或 Vector PCX反应器体积：1.4mL ( 反应温度：130℃ ) ( 试剂： ) 选择1：40%福林酚试剂水溶液 选择2：15%ABTS储备液溶于甲醇。 ABTS储备液：7 mmole/LABTS试剂溶于2.45mmole/L的过硫酸钠水溶液。储备液使用前需在暗处放置至少12h。 流速：0.1mL/min 检测波长：UV/Vis 635nm HPLC GRADIENT TIME (Min) Acetic Acid/water% Methanol，% 0 95 5 3 95 5 25 40 60 30 40 60 30.1 95 5 40 95 5 MATRIXABTS REAGENT FOLIN-CIOCALTEU REAGENT 新鲜树莓 1.03 mg/g 0.63 mg/g 新鲜蓝莓 0.66 mg/g 0.35 mg/g 干枸杞果 2.39 mg/g 3.30 mg/g 绿茶 50.0 mg/g 抗氧化膳食补充剂 477.24 mg/g 120.0mg/g 之Fig1.10种常见抗氧化剂混合，福林酚试剂Fig 3. 绿茶的热水提取物，福林酚试剂 Fig 2. 新鲜树莓提取物，福林酚试剂 Fig 4. 膳食补充剂提取物， ABTS试剂 ( REFERENCES： ) Barbara Kusznierewicz， Anita Piasek， Agnieszka Bartoszek， Jacek Namiesnik，“The Optimization of Analytical Parameters for Routine Profiling of Antioxidants in Complex Mixtures by HPLC Couples with Post-column Derivatization，”Phytochem. Anal. 2011，22.392-402 总部 扫描二维码了解德祥 香港九龙观塘巧明街100号友邦九龙大楼36楼3605室Tel： (852) 3910 1500 Fax： (852) 2758 3830 亚太地区 香港办事处 香港九龙观塘鸿图道14-16号 志成工业大厦5楼全层 Street， Phuoc Kien Commune， Nha Be District，Ho Chi Minh City.北区北京办事处 西安办事处北京市东城区南竹竿胡同2号 陕西省西安市长安区郭杜街道文苑中路银河SOHO D座50921室 长安双创中心B座Tel：(010) 8232 7383 Fax： (010) 8232 9551东区上海办事处 武汉办事处上海市长宁区天山路1717号 湖北省武汉市东湖高新佳园路2号SOHO天山广场T2幢1002室 (200050) 高科大厦18楼F1801(430074)Tel： (021) 52610159 Fax： (021) 5261 0122南区广州办事处 长沙办事处广东省广州市黄埔区茅岗南路9号 湖南省长沙市经济技术开发区向阳路1号鱼珠智谷A08-09(510730) 金科时代中心3A-1904(410015)Tel： (020) 3256 8788 Fax： (020) 3256 8700海南办事处海南省海口市蓝天路7号华江大厦12B室(570203)昆明办事处云南省昆明市五华区北京路1079号欣都龙城4栋707室(650041)西区 南宁办事处广西省南宁市市族大道141号成都办事处 中鼎万象东方C座601室(530028)四川省成都市高新区都会路55号3单元25楼2506号重庆办事处重庆市渝北区新溉路保华大道仁安龙城国际1期1栋1单元20-9室(400020) 慧淘科仪SmartLab Hub 德祥集团旗下一站式科研用品采购平台 网址： www.smartlabhub.com.cn邮箱： info@smartlabhub.com.cn 抗氧化剂是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。植物中发现的许多酚类化合物以及一些维生素，都具有抗氧化活性。通常用比色法衡量总抗氧化能力，表示为Trolox（水溶性维生素E）当量或没食子酸当量。目前对抗氧化剂测试方法的要求不仅是能检测样品的总抗氧化能力，还要求根据抗氧化剂的生物效益对其进行区分和量化分析。我们的方法研究表明，比色法试剂如福林酚试剂和ABTS试剂，均可以通过高效液相色谱柱后衍生化法对食品和膳食补充剂中抗氧化剂进行分析。福林酚测试法，在碱性条件下，多酚或其他抗氧化剂可以将磷钨钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚或其他抗氧化剂含量成正比，可以用分光光度计进行测定。该试剂对酚类和非酚类抗氧化剂，包括维生素C、维生素B1和叶酸，具有很高灵敏度，对许多抗氧化剂检测限低至1ug/mL。ABTS试剂用于总抗氧化能力（TEAC）法。在抗氧化物存在时ABTS+的产生会被抑制，并可通过紫外检测器检测吸光度间接计算抗氧化能力，该检测方法可以分析40-200 ug/ml的抗氧化剂。使用上述两种试剂可以对目标化合物进行定性和定量分析，并通过与Trolox或没食子酸标准曲线图谱比较计算样品的总抗氧化能力。