生活污水中四氢大麻酚和四氢大麻酸检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-785Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-608 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn AOE 系统与 LCMSMS 联用检测生活污水中四氢大麻酚和四氢大麻酸 LCMSMS-608 摘要：本文利用岛津 AOE 系统和 LCMSMS 质谱联用，建立了生活污水中四氢大麻酚和四氢大麻酸同时分析的方法。该方法采用内标法定量，对方法的线性、精密度及加标回收率进行考察，结果显示：该方法线性良好，线性相关系数均在0.996以上，低、中、高三个浓度水平加标实验考察回收率及重复性，平行测试3次，各组分的加标回收率在86.1%~111.9%之间，平行测定三次的相对标准偏差在1.33%~5.93%之间，方法准确可靠。 关键词： AOE系统四氢大麻酚四氢大麻酸 生活污水 大麻是世界范围内滥用最为严重的毒品之一，其中四氢大麻酚 (THC) 是首要的精神活性成分，能使人致幻成瘾，并可对人体产生多种毒害作用。TTHC在人体内相关酶的催化下先生成活性代谢产物11-羟-A9-四氢大麻酚和8-羟-^9-四氢大麻酚，然后进一步代谢为非活性的四氢大麻酸 (THC-COOH)和极少量的8，11-二羟-^9-四氢大麻酚，其中 THC-COOH 是 THC在体内的主要代谢产物，THC 及其代谢物随着人体代谢排放入生活污水中。 污水中毒品检测是了解区域毒情的新兴的重要技术手段，准确测定污水中毒品的浓度，是污水毒品检测技术能够发挥作用的重要前提，但毒品排放之后随着水体的流动而扩散、稀释，大部分毒品的最终检 测浓度极低，往往需要通过固相萃取技术对分析物富集和去除部分杂质，并与 LC-MS/MS 技术联用，提升检测灵敏度。岛津针对污水毒品检测中前处理过程较为繁琐的痛点和难点，推出全自动固相萃取分析系统(AOE系统))，该系统将样品前处理、超高效液相色谱分离、质谱检测、数据处理等高度集成，成功实现了生活污水样品直接上样分析，大大简化样品分析过程。 本文利用AOE 系统和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用，建立一种简便、快速、准确的生活污水中四氢大麻酚和四氢大麻酸的分析方法。供相关人员参考。 图1 岛津 AOE 系统 1.2分析条件 色谱条件 (SPE)： 固相萃取柱： Oasis HLB Direct Connect HP (30mm L. ×2.1 mm l.D.， 20 um) SPE 输液泵：A-水，B-甲醇/乙腈/异丙醇((1/1/1， v/v/v) SPE流速： 3mL/min 进样量：2000uL 表1 SPE 时间程序 Time(min) Module Command Value 0 Pumps Pump C Flow 0.5 0.01 Pumps Pump CFlow 3 3.00 Pumps SV(PumpC) B 5.00 Pumps SV(Pump C) A 8.00 Pumps Pump C Flow 3 8.01 Pumps Pump C Flow 0.5 色谱条件 (UHPLC)： 色谱柱： Shim-pack Scepter C18-120 (100 mm L.× 2.1 mml.D.，3 um) 流动相：A相-0.1mM乙酸铵 +0.1mM氟化铵水溶液；B相-乙腈/甲醇(1/1)流速：0.4mL/min 柱温：40℃ 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为80%，时间程序见表2 表 2梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 3.00 Pumps Pump B Conc. 80 5.00 Pumps Pump B Conc. 100 6.00 Pumps Pump B Conc. 100 6.10 Pumps Pump B Conc. 80 9.00 Controller Stop LCMS-8050 质谱条件： 离子源： ESI(-) 接口电压： -3.5kV 雾化气流速： 3L/minDL温度：200℃ 加热模块温度：400℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) 接口温度：300℃ 干燥气流速：10.0 L/min MRM参数：见表3 加热气流量：10.0 L/min 表3 MRM 参数 No. 名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3Pre Bias(V) THC 313.10 245.35* 15 27 11 191.25 11 27 20 2 THC-IS 316.20 248.40* 11 27 16 194.35 11 28 21 3 THC-COOH 343.10 191.90* 17 32 20 245.30 16 27 11 4 THC-COOH-IS 346.10 194.35* 16 31 12 248.35 17 29 11 1.3标准溶液配制 分别取四氢大麻酚和四氢大麻酸标准溶液，用甲醇稀释，配制混合工作液，放置于-20℃冰箱中保存。分别取内标溶液，用甲醇稀释，配制混合内标工作液，浓度为10 ug/L，放置于-20℃冰箱中保存。取混合工作液用甲醇以逐级稀释方法配制校准曲线工作液，浓度分别为0.5、1、2、5、10、20、50、100 ug/L。 将超纯水与乙腈按照7：3比例混合均匀作为标准曲线稀释溶液，将夜准曲线工作液按照1：1000比例稀释，按照 1：1000 的比例加入内标工作液和1：100 的比例加入30%的乙酸铵溶液，摇匀装入样品瓶中待测。 1.4样品的预处理 未经处理的生活污水样品，放置于-20℃冰箱中保存。测试前，解冻待测样品，取14mL样品溶液加入6mL乙腈混合均匀，然后过PTFE 滤膜。准确移取样品，按照1：1000 的比例加入内标工作液和 1：100 比例加入30%的乙酸铵溶液，摇匀装入样品瓶中待测。 结果与讨论 2.1 AOE 上样-萃取流程 经过预处理的污水样品经大体积自动进样器 (SIL-16P)取样后被 SPE 输液泵推送至固相萃取柱 SPE1上，四氢大麻酚和四氢大麻酸被 SPE1 吸附，在3 min 时通过十通阀流路切换，超高效液相色谱系统采用梯度洗脱将目标分析物由SPE1洗脱到 UHPLC分析柱上，完成色谱峰的重聚焦和分离。在 SPE1洗脱的同时，带有低压梯度比例阀的输液泵分别输送有机溶剂和水，完成固相萃取柱 SPE2 的再生和平衡，准备下一个样品分析。 图2 AOE 洗脱上样萃取流程及结果 2.2 MRM 色谱图 图3 THC 和 THC-COOH标准溶液 (0.5ng/L) MRM 色谱图 2.3线性范围 按照1.3配制成各浓度混合标准溶液，以内标法绘制标准曲线，标准曲线如图4，曲线结果如下表4所示，所得校准曲线线性关系良好，线性相关系数均大于0.996，准确度在 90.6%-112.5% 之间。 图4 THC和THC-COOH标准曲线 表4 标准曲线结果 化合物 线性范围 相关系数 准确度 定量限 检出限 (ng/L) (%) (ng/L) (ng/L) THC 0.5-100 0.996 92.7-112.5 0.10 0.03 THC-COOH 0.5-100 0.997 90.6-107.9 0.38 0.12 2.4仪器精密度 按照1.3步骤配制低、中、高浓度标准溶液，连续进样6次，考察分析方法保留时间和峰面积的重复性，结果如下表5所示。保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别小于0.14%和3.12%，仪器精密度良好。 表5重重复性测试(n=6) 化合物 浓度 ng/L 保留时间 峰面积 浓度 保留时间 峰面积 浓度 保留时间 峰面积 RSD% RSD% ng/L RSD% RSD% ng/L RSD% RSD% THC 5 0.03 1.09 20 0.03 2.11 50 0.06 1.27 THC-COOH 5 0.14 3.12 20 0.13 1.99 50 0.14 1.01 2.5基质加标实验 取生活污水样品，按照1.4步骤中制备样品和低、中、高三个不同浓度的加标样品，各样品平行测定3次。测试结果显示：加标回收率在86.1%~111.9%之间，平行测定三次的相对标准偏差在 1.33%~5.93%之间，说明本方法准确性良好。 表6基质加标实验结果(n=3) 化合物 样品浓度 加标浓度(5ng/L) 加标浓度(20ng/L) 加标浓度 (50ng/L) (ng/L) 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% THC N.D. 86.1 3.31 105.0 4.05 111.9 2.45 THC-COOH N.D. 91.3 5.93 89.6 1.33 87.2 3.36 结论 本文利用岛津AOE 系统和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050，建立一种简便、快速、准确的生活污水中四氢大麻酚和四氢大麻酸同时分析的方法。该方法采用内标法建立校准曲线，各组分线性相关性良好。低、中、高三个浓度水平验证仪器精密度，保留时间和峰面积均表现出了良好的重复性。加标回收实验中，各物质回收率在86.1%~111.9%之间，方法准确可靠。该方法操作简捷、灵敏度高、分析速度快， i可以为公安行业中生活污水中大麻的检测提供很好的借鉴和参考。 岛津应用云 本文利用岛津AOE系统和三重四极杆质谱仪LCMS-8050，建立一种简便、快速、准确的生活污水中四氢大麻酚和四氢大麻酸同时分析的方法。该方法采用内标法建立校准曲线，各组分线性相关性良好。低、中、高三个浓度水平验证仪器精密度，保留时间和峰面积均表现出了良好的重复性。加标回收实验中，各物质回收率在86.1%~111.9%之间，方法准确可靠。该方法操作简捷、灵敏度高、分析速度快，可以为公安行业中生活污水中大麻的检测提供很好的借鉴和参考。