血样中11种常见毒品含量检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-164Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-474 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn ATLAS-LEXT和 LCMS-8045 联用检测血液中11种常见毒品含量 LCMSMS-474 摘要：本文利用 ATLAS-LEXT 和 LCMS-8045 联用，建立了血液中11种常见毒品的分析方法。该方法最大特点为利用ATLAS-LEXT自定义编程功能-双步萃取，大大简化前处理流程。同时实验结果表明：该方法线性良好；对高、中、低水平的标准溶液重复进样6针，保留时间和峰面积重复性良好。加标回收实验中，各物质回收率在69.3~100.0%之间，平行3份样品的峰面积RSD%值分别在0.36~9.42%之间，表明ATLAS-LEXT 回收及精密度良好。该方法为血液中毒品的检测提供很好的参考。 关键词： ATLAS-LEXT LCMS-8045 11种常规毒品 血液 近些年来，毒品泛滥日益成为受关注的社会问题，由涉毒活动带来的各种违法犯罪活动使得公安系统对于贩毒吸毒的打击越发严格。其中，尿液、汗液、唾液及毛发等生物样品中的毒物药物检测是确认是否涉毒等案件的重要依据。由于这类样品的基质均比较复杂，因此在分析前通常需要对样品进行前处理。常见的前处理方法有固相萃取、固相微萃取、液-液萃取等，这些方法通常较为繁琐，耗时耗力。 岛津公司ATLAS-LEXT 自动前处理装置可以对唾 液、尿液、血液等样品中的违禁药物自动进行液-液萃取，复溶后可进行液质联用分析或气质联用分析，自动化程度高，可节省大量时间，提高效率。同时ATLAS-LEXT 可根据前处理需要进行自定义编程，从而完美实现复杂前处理步骤，包括多次萃取，，中性酸性碱性萃取等。 本文利用岛津 ATLAS-LEXT 和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用，通过 ATLAS-LEXT编程功能，建立血液中11种常见毒品的检测方法，供相关人员参考。 1.1仪器 本实验使用岛津全自动样品前处理仪 ATLAS-LEXT 和 LCMS-8045 三重四极杆液质谱联用仪。具体配置为 LC-30AD×2输液泵，DGU-20A5 在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-20AC 柱温箱，， CBM-20A 系统控制器，LCMS-8045三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.97 色谱工作站。 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱： Shim-packVelox PFPP (100 mm L×2.1 mm l.D.， 2.7 um， Shimadzu SGLC P/N： 227-32021-03) 流动相：A相-0.1%甲酸水B相-乙腈 流速：0.4mL/min 柱温：40℃ 进样量：2uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为8%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 0.5 泵 B.Conc 8 4.0 泵 B.Conc 40 7.0 泵 B.Conc 100 8.0 泵 B.Conc 100 8.1 泵 B.Conc 8 11.0 控制器 Stop LCMS-8045 质谱条件： 离子源： ESI(+) 雾化气流速： 3L/min DL温度：250℃ 接口温度：300℃ 加热气流速：10 L/min加热模块温度：400℃扫描模式：多反应监测(MRM)干燥气流速：10L/min MRM 参数：见表2 表2 MRM 参数 No. 名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3Pre Bias(V) 吗啡 286.00 152.10* -20 -55 -26 201.10 -21 -27 -22 2 苯丙胺 136.20 91.10* -10 -19 -18 119.10 -10 -14 -24 3 可待因 300.00 215.10* -23 165.10 -18 4 MDA 180.00 105.20* -13 -22 133.10 -13 -20 -27 5 甲基苯丙胺 150.00 91.10* -13 119.20 -15 6 0°-单乙酰吗啡 328.10 165.05* -23 -38 211.10 -30 -26 7 NK 224.10 125.00* -24 -24 207.10 -12 -23 8 MDMA 194.15 163.10* -10 -13 -29 105.10 -10 -24 -18 9 氯胺酮 238.10 125.05* -28 -20 -21 220.05 -28 -17 -21 10 可卡因 304.10 182.10* -22 -12 -17 150.10 -15 -26 -26 11 美沙酮 310.20 265.20* -15 -10 -27 105.10 -15 -10 -19 注：*表示定量离子 1.3标准溶液的配置 取浓度为 1.0 mg/L 对照品混合溶液，以 ATLAS-LEXT 处理的血液空白基质作为稀释溶剂，依次配制成2、5、10、20、50、100、200 ug/L的系列浓度，待上机分析。 1.4样品前处理方法 在样品管中加入1.0 mL 经稀释后的血液(稀释4倍)，采用 ATLAS 自定义程序进行液液萃取。萃取流程：向样品中依次加入15uL 的10%的NaOH 溶液、0.5mL的硼酸缓冲液、2mL的乙酸乙酯，震荡离心后进行乳化检测，之后取 1.5 mL 上清液到干净样品管中，随后在萃取后的样品中再加入1.5 mL的乙酸乙酯进行萃取，震荡离心后进行乳化检测。之后取 1.5 mL 上清液合并到干净样品管中。干燥完成后加入1mL的50%甲醇水溶液复溶， 0.22 um 滤膜过滤上机分析。 图 ATLAS-LEXT样品处理流程图 结果与讨论 2.1标准品 MRM 色谱图 吗啡 可待因 苯丙胺 可卡因 美沙酮 图2 毒品标准品MRM色谱图(10ug/L) 2.2线性范围 按照1.3配制成各浓度标准溶液，以各目标物浓度为横坐标，目标物峰面积为纵坐标，以外标法绘制标准曲线，所得校准曲线线性关系良好，线性相关系数大于0.995，准确度在 88.9~107.9%之间。曲线结果如下图3所示。线性方程及相关系数见表3。 Conc.(ppb) 可卡因 美沙酮 图3 毒品标准曲线 表3 校准曲线参数(1/C) 序号 名称 校准曲线 相关系数r 精确度 检测限(ug/L)定限限 (ug/L) 1 吗啡 Y=(46415.3)X+(5467.76) 0.9985 91.6-105.6 0.03 0.08 2 可待因 Y=(34395.9)X+(5520.58) 0.9967 89.9-107.7 0.06 0.19 3 苯丙胺 Y=(193112)X+(23761.5) 0.9983 93.0-105.1 0.04 0.12 4 MDA Y=(126095)X+(26532.8) 0.9969 93.7-104.9 0.02 0.07 5 O-单乙酰吗啡 Y=(24609.1)X+(7226.55) 0.9980 88.9-107.9 0.06 0.18 6 甲基苯丙胺 Y=(175359)X+(-24268.4) 0.9990 94.5-104.3 0.03 0.10 7 MDMA Y=(268400)X+(3572.17) 0.9975 89.0-105.9 0.02 0.06 8 NK Y=(302018)X+(33594.1) 0.9982 91.3-105.6 0.02 0.05 9 氯胺酮 Y=(297893)X+(-19595.1) 0.9996 96.3-104.0 0.03 0.08 10 可卡因 Y=(219065)X+(-28927.5) 0.9999 98.6-101.1 0.01 0.04 11 美沙酮 Y=(258908)X+(-39284.8) 0.9999 98.3-101.0 0.03 0.10 2.3重复性考察 按照1.3步骤配制低、中、高三个浓度标准溶液，连续进样6次，考察分析方法保留时间和峰面积的重复性。结果表明：11种毒品保留时间的 RSD 均小于 0.52%和峰面积的 RSD 均小于3.0%，方法重复性良好，仪器精密度良好。结果见表 4。 表4 重复性测试(n=6) 样品名称 RSD% (5pg/L) RSD% (20 ug/L) RSD% (100 ug/L) R.T. Area R.T. Area R.T. Area 吗啡 0.52 1.15 0.37 1.02 0.23 0.68 可待因 0.32 3.00 0.17 1.75 0.11 1.81 苯丙胺 0.29 0.87 0.15 1.34 0.11 1.39 MDA 0.26 2.28 0.15 1.35 0.11 1.30 0-单乙酰吗啡 0.27 2.60 0.18 1.34 0.11 0.96 甲基苯丙胺 0.26 0.70 0.16 1.05 0.11 0.44 MDMA 0.23 0.77 0.12 0.81 0.11 0.62 NK 0.23 1.74 0.14 1.90 0.11 0.97 氯胺酮 0.20 1.92 0.13 0.91 0.10 1.78 可卡因 0.14 0.54 0.10 0.40 0.08 0.21 美沙酮 0.07 0.83 0.07 1.24 0.07 1.01 2.4加标回收实验 取血样，按照1.4步骤中制备样品和加标样品，两个水平加标浓度如下表5所示，各浓度平行处理3份。测试结果显示：通过两步提取，各水平的平均加标回收率在69.3~100.0%之间，相对标准偏差在0.36~ 9.42%之间。 表5基质加标实验结果(n=3) 名称 样品浓度 加标(10ug/L) 加标(40ug/L) (ug/L) 回收率% RSD% 回收率% RSD% 吗啡 ND 69.3 1.90 72.9 9.26 可待因 99.5 1.33 97.7 3.04 苯丙胺 96.4 1.20 96.4 6.68 MDA 99.8 0.95 100.0 9.42 0°-单乙酰吗啡 88.6 1.12 89.7 6.96 甲基苯丙胺 94.4 1.22 93.0 0.46 MDMA 93.6 1.92 92.7 1.58 NK 91.2 2.32 91.4 6.27 氯胺酮 93.7 1.13 90.0 0.61 可卡因 89.6 1.16 77.7 1.64 美沙酮 80.8 0.36 75.9 1.21 结论 本文利用岛津 ATLAS-LEXT自定义前处理程序功能-双步萃取，同 LCMS-8045联用，建立一种简便、快速、准确的血液中11种毒品的分析方法。该方法采用外标法定量，在2-200 ug/L的范围内，各组分线性相关系数均在0.995以上，线性良好。对高、中、低水平的标准溶液重复进样6针，保留时间和峰面积均表现出了良好的重复性。加标回收实验中，各物质回收率在69.3~100.0%之间，平行3份样品的峰面积RSD%值分别在0.36~9.42%之间， ATLAS-LEXT 回收及精密度良好。该方法操作简捷，为血液中毒品的检测提供很好的参考。 岛津应用云 本文利用ATLAS-LEXT和LCMS-8045联用，建立了血液中11种常见毒品的分析方法。该方法特点为利用ATLAS-LEXT自定义编程功能-双步萃取，大大简化前处理流程。同时实验结果表明：该方法线性良好；对高、中、低水平的标准溶液重复进样6针，保留时间和峰面积重复性良好。加标回收实验中，各物质回收率在69.3 ~ 100.0%之间，平行3份样品的峰面积RSD%值分别在0.36~ 9.42%之间，表明ATLAS-LEXT回收及精密度良好。该方法为血液中毒品的检测提供很好的参考。