尿样中甲基安非他明定量分析检测方案(液质联用仪)

SSL-CA14-322Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-244 咨询电话：021-22013542上海市淮海西路570号红坊E楼http：//www.shimadzu.com.cn ATLAS-USIS-LCMS-8045 联用测定尿样中甲基安非他明含量 LCMSMS-244 摘要：本文建立了一种使用 ATLAS-USIS 自动前处理装置及岛津超高效液相色谱仪 LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8045 联用测定尿样中甲基安非他明含量的方法。以外标法定量，校准曲线线性良好，线性相关系数为 0.9981。对低、、中、高不同浓度的样品平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.06~0.18%和1.06~4.10%之间，仪器精密度良好，检出限和定量限分别为 0.017 ng/mL 和 0.056 ng/mL。该方法具有自动化程度高、分析速度快、灵敏度高、重现性好的特点，，可用于尿样中甲基安非他明含量的测定。 关键词： TLAS-USIS三重四极杆质谱甲基安非他明尿液 甲基安非他明，即兴奋剂甲基苯丙胺，由于毒性剧烈，又俗称“冰毒”，是苯丙胺类毒品中重要的一种，属于违禁毒品。冰毒是一种具有拟交感神经兴奋作用的精神药物，服用后会导致中枢神经系统的兴奋增强，长期或大量服用后容易使吸食者产生身体依赖性和精神依赖性，诱发大量治安和刑事案件，进而引发诸多社会问是。 近年来苯丙胺类毒品的滥用呈增长趋势，由于其严重的社会和个人危害性，各国政府已经采取了许多措施来打击吸毒、贩毒等活动，尿液、汗液、唾液、精液及毛发等均可作为检测的基质，这些基质中的兴奋剂检测是确认吸毒的科学依据，其鉴定结果的准确性至关重要。考虑到可萃取检测基质的量、检测基质中兴奋剂的浓度及可检查期间等，尿液是最合适的检测基质。通常尿液组成复杂，干扰成分多，且待检测物质的含量往往比较低，因此分析尿液基质中的毒品往往必须进行一定的样品前处理。常见的前处理方法有固相萃取、固相微萃取、 液-液萃取等，利用这些方法可以达到目标物的提纯、净化、浓缩等作用，但是人工操作较为繁琐、费时，且成本较高。因此开发自动化程度高、快速、准确、高效的检测方法无论从禁毒或毒理研究等方面来说都具有重要意义。 岛津ATLAS-USIS 自动前处理装置针对尿液、血液等样品中的毒品、兴奋剂等违禁药物可自动进行液-液萃取制备样品，复溶后可以进行液质联用分析或气质联用分析，自动化程度高，大量节省人力物力。高效液相色谱-串联质谱法检测具有灵敏度高、重复性好、通量高等特点，能够提供快速、准确的分析结果。本文利用岛津 ATLAS-USIS 自动前处理装置，结合LCMS-8045建立了尿液中甲基安非他明含量的高自动化、高灵敏度、快速的检测方法。 图11甲基安非他明的结构式 1.1仪器 本实验使用 ATLAS-USIS 自动前处理装置及岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045联用系统。具体配置为 LC-30ADx2输液泵， DGU-20A， 在线脱气机， SIL-30AC自动进样器， CTO-30A 柱温箱， CBM-20A系统控制器， LCMS-8045 三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.86 色谱工作站。 1.2分析条件 质谱条件 液相条件 离子化模式： ESI(+) 色谱柱： Shim-pack GIST C18 Column(2.1 mm I.D.x50 mm L.，2 um) 加热气：空气10.0L/min 雾化气：氮气3.0L/min 流动相：A相-0.2%甲酸水溶液， 干燥气：氮气10.0 L/min B相-甲醇 碰撞气：氩气 流速：0.40 mL/min 接口温度：300℃ 柱温：40℃ DL温度：250℃ 进样量：5uL 加热模块温度：400℃ 洗脱方式：等度洗脱，B相浓度为12%， 扫描模式：多反应监测 (MRM) 驻留时间： 100 ms MRM参数：见表1 表1 NMRM优化参数 化合物 英文名 CAS No. 前体离子 产物离子 Q1 Pre CE (V) Q3 Pre Bias (V) Bias (V) 甲基安非他明 Methyl amphetamine 537-46-2 150.25 91.15* -11.0 -22.0 -17.0 119.20 -16.0 -15.0 -21.0 注：*表示定量离子 1.3标准溶液的配制 将1 mg/mL 甲基安非他明(甲醇溶解)标样储备液以流动相逐级稀释得到浓度分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 ng/mL 的标准溶液。 1.4样品前处理方法 (1)取准确体积的1 mg/mL标样储备液，加到空白尿液中，依次配制得到浓度分别为50.00、10.00、1.00 ng/mL的基质加标溶液，每个浓度平行取样6份，用 ATLAS-USIS 自动前处理装置的 MainSeq 2 程序进行前处理，将前处理得到的样品用流动相定容到5 mL， 0.22 um 滤膜过滤后上机分析(注： ATLAS-USIS 的 MainSeq2 程序处理样品时，取 3mL尿样，用4mL乙酸乙酯萃取，然后取3mL 上清液进行烘干处理，最后手动用流动相将烘干剩余物定容到5mL)； (2)取准确体积的1 mg/mL 标样储备液，加到经 ATLAS-USIS 处理过的空白尿样中，依次配制得到浓度分别为50.00、5.00、0.50 ng/mL 的基质加标溶液，0.22 um 滤膜过滤后上机分析以考察基质效应。 结果讨论 2.1标准样品一级质谱图和产物离子质谱扫描图 图2甲基安非他明的一级质谱图(左图)和产物离子质谱扫描图(右图，CE值为-15V) 2.2标准样品的 MRM 色谱图 图355 ng/mL的甲基安非他明MRM色谱图 2.3线性范围 将浓度为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 ng/mL 甲基安非他明标准工作液，按1.2中的分析条件上机分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法建立校准曲线，结果如图4所示，线性方程、线性范围和相关系数见表2。 图4甲基安非他明的校准曲线 表2校准曲线参数(权重1/C2) 名称 校准曲线 线性范围(ng/mL) 相关系数R 准确度(%) 甲基安非他明 Y=(260136)X+(1022.13) 0.02~50.00 0.99 81 90.0~108.5 2.4检出限和定量限 对浓度为 0.02 ng/mL 溶液进样分析，以 ASTM 法计算噪声，以噪声的3倍作为最低检出限(即S/N=3， LOD 表示)，以噪声的10倍作为最低定量限(即S/N=10， LOQ表示)，则仪器对甲基安非他明的最低检出限、最低定量限分别为0.017 ng/mL、0.056 ng/mL。 表3检出限和定量限 名称 检出限(ng/mL) 定量限(ng/mL) 甲基安非他明 0.017 0.056 2.5精密度实验 将 ATLAS-USIS 自动前处理装置处理得到的样品采用1.2的方法进行分析，考察仪器的重复性，甲基安非他明在不同浓度下的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.06~0.18%和1.06~4.10%之间，结果表明仪器具有良好的精密度。 表4 ATLAS-USIS处理样品的保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 名称 RSD% (1ng/mL) RSD % (10 ng/mL) RSD% (50 ng/mL) R.T. Area R.T. Area R.T. Area 甲基安非他明 0.18 4.10 0.15 3.45 0.06 1.06 2.6回收率实验 在空白尿液中添加甲基安非他明，按照1.4-(2)用 ATLAS-USIS 对样品处理后进样分析，计算回收率，结果如表5所示，在不同浓度下甲基安非他明的回收率在102.3~117.8%之间。需要指出的是经过 ATLAS-USIS 处理得到样品在手动定容到 5 mL后，以100%萃取效率计算定容后样品的实际浓度，则上机分析时的理论浓度为加入浓度的45%。 表5 ATLAS-USIS前处理装置回收率结果 名称 加标浓度 理论上机分析浓度 实测浓度 平均回收率 (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (%) 0 0 ND 甲基安非他明 1.00 0.45 0.53 117.8 10.00 4.50 4.75 105.6 50.00 22.50 23.02 102.3 2.7基质效应 分别配制低、中、高三份不同浓度的标准溶液和样品加标液，以相同浓度样品加标液所得峰面积同标准溶液所得峰面积的比直换算成百分比作为基质效应进行考察，所得基质效应结果在80%~120%之间，则认为基质效应可以忽略。实验结果见表6，由表6可知在不同浓度下甲基安非他明基质效应结果在94.3~99.2%之间，精密度RSD%在0.80~2.32之间，表明基质效应对目标物检测的干扰较小，由图5和图6可知，尿样基质不干扰待测物的测定。 图5空白尿样的MRM色谱图 图6空白尿样加标浓度为5 ng/mL的MRM色谱图 表6基质效应考察 名称 加标浓度 基质效应 RSD% (ng/mL) (%) 甲基安非他明 0.50 95.0 2.32 5.00 99.2 1.21 50.00 94.3 0.80 结论 本文建立了一种使用 ATLAS-USIS 自动前处理装置结合岛津超高效液相色谱仪LC-30A 和三重四极杆质谱仪LCMS-8045 联用测定尿样中甲基安非他明含量的方法。以外标法定量，校准曲线线性良好，线性相关系数为 0.9981。对低、中、高不同浓度的样品平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准积差分别在0.06~0.18%和1.06~4.10%之间，检出限和定量限分别为 0.017和0.056 ng/mL。该方法具有自动化程度高、分析速度快、灵敏度高、重复性好的特点，可用于尿样中甲基安非他明含量的检测。 岛津全球应用技术开发支持中心 本文利用ATLAS-USIS自动前处理装置，结合岛津LCMS-8045建立了高自动化、高灵敏度、快速检测尿液中甲基安非他明含量方法。使用ATLAS-USIS自动前处理装置，通过液液萃取法对尿样中的甲基苯丙胺进行自动制备；之后使用岛津LCMS-8045液质联用系统对得到的样品进行定量分析。方法自动化程度高、分析速度快、灵敏度高、重复性好，可用于尿样中甲基安非他明含量的测定。