MALDI-8020快速检测寡核苷酸药物的分子量及杂质

本文应用台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱MALDI-8020对4份不同长度的单链DNA药物及4份单链RNA药物进行分析，可以直接测定样品的精确分子量，并对杂质含有情况进行监测。本方法前处理简单，分析速度快，可以在几分钟时间内完成数十个样品的批量检测，结果直接、准确、可靠，可作为寡核苷酸药物合成快速质控的参考。SSL-CA22-599Excellence in Science Excellence in ScienceMALDI-037 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. - Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn MALDI-8020 快速检测寡核苷酸药物的分子量及杂质 MALDI-037 摘要： MALDI-TOF 质谱技术具有前处理简单、分析速度快、分析质量范围宽、图谱简单易解析等优点，本文介绍了应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 MALDI-8020快速检测寡核苷酸药物的分子量及杂质的案例，该方法除直接测定样品精确分子量外，还可对可能含有的杂质情况进行监测。 关键词： MALDI-TOF寡核苷酸 分子量 杂质 技术特点： 心分析速度快，可以进行高通量检测。 心前处理简单，可直接测定样品分子量，并对杂质含有情况进行监测。 MALDI-TOF 质谱技术因其前处理简单、分析速度快、检测通量高、分析质量范围宽、提供的分子量准确、图谱简单易解析等优点，被广泛用于蛋白质、多肽、核酸、聚合物等样品的分子量检测工作。传统的MALDI-TOF 质谱仪体积较大、价格昂贵，限制了该类设备的普及。岛津台式 MALDI-TOF 质谱仪 MALDI-8020体积小巧，在线性正离子模式下与传统的 MALDI-TOF质谱仪具有同等性能。该质谱仪配备了200 Hz 的固态 激光器和一个快速进样的负载锁定室，实现了样品的快速检测。 本文介绍了应用 MALDI-8020 快速测定寡核苷酸药物分子量及杂质的案例。取 0.5uL样品溶液直接点在MALDI 靶板上并在其上覆盖基质，使用 MALDI-8020 进行检测，最快几秒钟即可完成一份样品的检测分析，除精确分子量外，还可获得含有的杂质相关信息，结果直接可靠，可作为寡核苷酸药物合成快速质控的参考。 实验部分 1.1仪器 台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 MALDI-8020 1.2分析条件 谐模式： 线性正离子模式 光 能 量量：：95 调激激光器：355 nm 固态激光器离离子门阈 值1000扫描范围：：m/z 1000-10000脉冲引出质量(Da)8000 1.3样品前处理 取样品加水稀释为100uM， 作为样品工作液。吸取 0.5 uL 3-HPA 基质溶液 (50 mg/mL)、0.5 uL样品工作液依次点靶，自然干燥后将靶板送入质谱分析。在质谱采集软件上选择待分析的样品靶点，可在几分钟内实现数十个样品的批量采集。 图1 样品靶板及仪器样品室 ■结果与讨论 2.1单链 DNA药物分子量及杂质检测 应用 MALDI-8020对4份不同长度的单链 DNA药物进行分子量检测，结果见图2，样品的理论分子量及实测分子量见表1。4份样品均检测到寡核苷酸药物的带一个正电荷[M+H]*及带两个正电荷[M+2H]2+的离子形式，其中[M+H]*具有较高信号强度。质谱图信噪比良好，实测分子量与理论值一致。杂质方面，4份样品均未检测到明显杂质。 表1单链 DNA 药物分子量及杂质情况检测结果 样品链长 [M+H]Tav理论值 [M+H]*ave实测值 (m/z) 杂质检测情况 15nt 4553.05 4553.18 一 16nt 4882.26 4881.84 一 20nt 6118.06 6118.68 一 25nt 7667.06 7666.23 一 备注：“_”代表未检测到明显杂质。 图2单链 DNA 药物的质谱图 2.2单链 RNA 药物分子量及杂质检测 应用 MALDI-8020 对4份单链RNA药物进行分子量检测，结果见图3，样品的理论分子量及实测分子量见表2。4份样品均检测到寡核苷酸药物的带一个正电荷[M+H]*及带两个正电荷[M+2H]2+的离子形式，其中[M+H]*具有较高信号强度。质谱图信噪比良好，实测分子量与理论值一致。 杂质方面，样品Sl未检测到明显杂质信号；样品S2检测到微弱 m/z 5159.67 与 m/z 5464.81 信号；样品S3质谱图上检测到 m/z 3805.81、 m/z 4480.03、m/z4786.22、m/z 5092.05等多个质谱峰；样品S4检测到微弱 m/z 5678.67 信号。 表2 单链 RNA 药物分子量及杂质情况检测结果 样品链长 [M+H]+理论值 [M+H]*av实测值 (m/z) 可能的杂质(m/z) S1 6299.00 6299.88 一 S2 5771.39 5770.92 5159.67，5464.81 S3 6031.70 6031.60 3805.81、4480.03、4786.22、5092.054 S4 6008.66 7666.23 5678.67 备注： “”代表未检测到明显杂质 图3 单链 RNA 药物的质谱图 结论 本文应用台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 MALDI-8020 对4份不同长度的单链 DNA药物及4份单链 RNA 药物进行分析，可以直接测定样品的精确分子量，并对杂质含有情况进行监测。本方法前处理简单，分析速度快，可以在几分钟时间内完成数十个样品的批量检测，结果直接、准确、、可靠，，可作为寡核苷酸药物合成快速质控的参考。 岛津应用云