饲料中氯霉素类药物检测方案(浓缩仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-2021 Knowledge Optimized Laboratory 解决方案 全自动固相萃取-液相色谱-串联质谱测定饲料中3种氯霉素类药物 高效液相色谱-中联质谱法；；全自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；氯霉素；；饲料 介绍 氯霉素类药物是一类广谱抗生索，作为兽药常用于家禽疾病治疗和预防。由丁氯霉霉类药物对人体有严重的毒副作用，长目前美国、日本和欧盟等国家和地区均已禁止在食用性动物中使用氯霉素，我国也规定氯霉素在动物源性食品中不得检出。然而少数数料生产企业在生产过程中违法添加氯霉素，而养殖户在不知情的情况下使用了此类饲料，造成食品中氯霉素残留超标，进而对人的身体健康造成严重威胁，因此对饲料中氯霉素类药物残留的检测就显得尤为重要。 全自动固相萃取-液相色谱-串联质谱测定饲料中3种氯霉素类药物 氯霉素类药物是一类广谱抗生素，作为兽药常用于家禽疾病治疗和预防。由于氯霉素类药物对人体有严重的毒副作用，，目前美国、日本和欧盟等国家和地区均已禁止在食用性动物中使用氯霉素，我国也规定氯霉素在动物源性食品中不得检出。然而少数饲料生产企业在生产过程中违法添加氯霉素，而养殖户在不知情的情况下使用了此类饲料，造成食品品氯霉素残留超标，进而对人的身体健康造成严重威胁，因此对饲料中氯霉素类药物残留的检测就显得尤为重要。 O 图-1.三种氯霉素类药物结构图 本文参考《农业部2483号公告-8-2016饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定液相色谱-串联质谱法》，试样采用碱性乙酸乙酯提取，提取液浓缩、复溶、除脂后经睿科RaykolFotector Plus 全自动固相萃取仪净化，洗脱液经睿科 Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪吹干，30%甲醇水溶液复溶，高效液相色谱-串联质谱检测，内标法定量。添加上机浓度为 5 ug/L 的加标实验，得到3种化合物的加标回收率在77%-83%之间， RSD 值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中3种氯霉素类药物的检测需求。 关键字：高效液相色谱-串联质谱法；全自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；：；氯霉素；饲料 2.仪器和耗材 全自动固相萃取仪：：睿科Raykol Fotector Plus 全自动液体处理工作站：睿科 Raykol Auto Prep 200 全自动氮吹浓缩仪： RaykolEVA 80 液相色谱-质谱联用仪： Aglent1260+Agilent 6410 C18固相萃取柱(RayCure，200mg/3ml， 货号： RC-204-16002) 甲醇(色谱纯)，乙酸乙酯(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，浓氨水(分析纯) 5%甲醇水溶液：量取5mL甲醇用超纯水定容至100 mL。 30%甲醇水溶液：量取30mL 甲醇用超纯水定容至100mL。 5%甲醇水溶液饱和的正己烷：取足够的5%甲醇水溶液和正己烷充分振荡混合，静置分层，上层即为5%甲醇水溶液饱和的正己烷。 使用用科 Raykol Auto Prep 200 可实现标准品的全自动化配制，将单标母液(100 ug/mL)通过工作站的配液模式和内标曲线模式，配制一条浓度分别为 1.0 ug/L， 2.0 ug/L， 5.0 ug/L，10.0 ug/L 和 20.0 ug/L 的标准工作曲线。 图- Auto Prep 200 液体工作站配标程序 4.样品前处理 .1提取 称取2g饲料试样置于50 mL 离心管中，加入100 uL 混合内标工作液，再加入0.3 mL氨水和 10 mL 乙酸乙酯，涡旋混匀2 min， 振荡提取 10 min， 以10000 r/min 离心10 min， 转移上清液至80 mL 玻璃试管中。残渣再用10 mL乙酸乙酯提取1次，合并2次上清液，用Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪于45℃条件下浓缩至干，用4 mL5%甲醇水溶液复溶，再加入4mL 5%甲醇水溶液饱和过的正己烷，涡旋1 min， 静置分层，弃去上层正己烷，重复除热线：400-885-1816 网址：：Vwww.raykol.com 邮箱： info@raykol.com 脂一次，待净化。 4.2净化与农缩 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Raykol Fotector Plus 固相萃取柱 C18 柱(RayCure， 200mg/3ml) 活化 甲醇、超纯水 淋洗 超纯水 洗脱 甲醇 分别以3mL甲醇、3mL水活化C18小柱，将上述提取液以1 mL/min 的速度进行上样，并用3mL水清洗样品瓶，一并过柱。用气推将柱子压干，最后以5 mL甲醇洗脱目标化合物(具体方法设置见图-3)。将洗脱液用 Raykol EVA-80 全自动氮吹浓缩仪于45℃条件下浓缩至干，用30%甲醇水溶液定容至1mL，涡旋混匀，过滤膜上机检测。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间(min) 1 清洗样品通道 甲醇 2.8 2 活化 甲醇 有机废液 2 3 1.9 3 活化 水 废水 2 3 1.9 4 上样 废水 1 4 4.5 5 清洗样品瓶 水 废水 60 3 3.8 6 气推 有机废液 80 30 2.2 7 清洗注射泵 甲醇 60 5 0.5 8 洗脱 甲醇 收集 1 5 5.4 9 气推 收集 2 2 1.4 10 气推 收集 20 10 1.3 11 结束 12 图-3. Fotector Plus 氯霉素类药物固相萃取方法 5.检测条件 5.1 色谱-质谱条件 柱子 Waters XBridge BEH HILIC 2.5umx2.1 mm x50mm 流速 0.200mL/min 流动相 A：H2O B： Methanol 柱温 30°C 进样体积 10 uL 检测器 Agilent 6410 离子模式 ESI 吹扫气 11L/min 氮气温度 350°C 簇电压 4000 雾化压力 35psi 洗脱梯度 0-1.5 min， 5%流动相 B；2 min-3.5 70%流动相B， 5.0-6.05%流动相B 名称 母离子m/z 子离子m/z 驻留时间Dwell/secs 碰撞能CE/eV 碎裂电压 Frag/eV 氯霉素 321.1 257.1 152.0* 40 18 120 40 12 氟苯尼考 356.1 336.0*185.1 40 20 135 40 9 甲砜霉素 354.1 290.1 185.1* 40 23 130 40 12 氯霉素-d5 326.1 157.1 40 20 120 氟苯尼考-d3 359.1 339.1 40 10 120 甲砜霉素-d3 357.1 188.1 40 22 120 质谱图 图-4.三种氯霉素类药物的质谱图(5 ug/L，左-氯霉素，中-氟苯尼考，右-甲砜霉素) 6.加标实验 取空白试样2 g，添加上机浓度为 5.0 ug/L 的氯霉素类药物混合标准品，进行上述前处理，回收率结果如下表-2所示。 表-2添加实验的回收率及相对标准偏差结果(n=3) 名称 回收率(%) 平均回收率 RSD S1 S2 S3 % % 氯霉素 88.6 81.4 78.9 83.0 6.0 氟苯尼考 85.0 75.0 81.2 80.4 6.3 甲砜霉素 75.1 75.4 82.5 77.7 5.4 7.总结 7.1采用睿科 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪能同步进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。 7.2睿科Raykol Auto Prep 200 全自动液体工作站可实现混标、标准曲线的配置，全程无需人为值守，让实验人员远离有毒有害物质，保护身体健康。 7.3睿科 Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪处理通量高，80个样品可同时进行氮吹，实验平行性好；而且采用氮吹针自动追随液面设计，无需手动调节氮吹针高度且耗气量小，省时省力。 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2020年10月版 邮箱： info@raykol.com热线：址：www.raykol.com 热线：址：Vwww.raykol.com邮箱： info@raykol.com 本文参考《农业部2483号公告-8-2016 饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定 液相色谱-串联质谱法》 ，试样采用碱性乙酸乙酯提取，提取液浓缩、复溶、除脂后经睿科Raykol Fotector Plus全自动固相萃取仪净化，洗脱液经睿科Raykol EVA 80全自动氮吹浓缩仪吹干，30%甲醇水溶液复溶，高效液相色谱-串联质谱检测，内标法定量。添加上机浓度为5 ug/L的加标实验，得到3种化合物的加标回收率在77%-83%之间，RSD值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中3种氯霉素类药物的检测需求。