饲料中赭曲霉毒素A检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-2021 解决方案 全自动固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中的赭曲霉毒素A 介自动固相萃取；全自动均质器；高效液相色谱法；赭曲霉毒素A；饲料 介绍 赭曲霉毒索是继黄曲霉毒素后又-一个引起世界广泛关注的霉菌毒索。它是由曲霉属的7种曲霉和青霉属的6种青霉菌产生的一组重要的、污染食品的真菌毒素。其中毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农产品污染最严重、与人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素A。动物摄入霉变的饲料后，其会在体内蓄积，而且代谢缓慢，引起动物肝脏和肾脏损伤，具有高度致癌、致畸、致突变作用。 全自动固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中的赭曲霉毒素A 1.介绍 赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。。它它是由曲霉属的7种曲霉和青霉属的6种青霉菌产生的一组重要的、污染食品的真菌毒素。其中毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农产品污染最严重、与人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素A。动物摄入霉变的饲料后，其会在体内蓄积，而且代谢缓慢，，引起动物肝脏和肾脏损伤，具有高度致癌、致畸、致突变作用。 图-1.赭曲霉毒素A结构式 本文参考 GB/T 30957-2014《饲料中赭曲霉毒素A的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》，试样用80%甲醇水溶液提取，提取液离心、稀释后用含有赭曲霉毒素A特异抗体的免疫亲和柱经睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取仪净化。用清洗缓冲液和超纯水淋洗柱子除去杂质，，L以甲醇洗脱，高效液相色谱检测，外标法定量。添加上机浓度为 10 ug/L的加标实验，1得到赭曲霉毒素A的加标回收率在 92%-101%之间， RSD 值小于5%，，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中赭曲霉毒素A的检测需求。 关键字：全自动固相萃取；；全自动均质器；高效液相色谱法；赭曲霉毒素A；饲料 2.仪器、耗材 全自动固相萃取仪：：睿科Raykol Fotector Plus 全自动液体处理工作站：睿科Raykol Auto Prep 200 全自动均质器：睿科Raykol AH 50 赭曲霉毒素A免疫亲和柱 (Romer， 500ng/3mL) 高效效相色谱： Waters ACQUITY UPLC I-Class 配备大体积流通池 甲醇(色谱纯)；乙乙(色谱纯)；吐温-20(分析纯)；PBS盐包；氯化钠(分析纯)；碳酸氢钠(分析纯)；冰乙酸(分析纯)；超纯水 清洗缓冲液：称取25.0g氯化钠、5.0g碳酸氢钠溶于水中，加入0.1mL吐温-20，用水稀释至1L。 初始流动相：：量取 480 mL 乙腈至1000 mL容量瓶中，加入10 mL冰乙酸，用超纯水定容至1000mL 3.标准曲线配置 使用睿科 Raykol Auto Prep 200 可实现标准品的全自动化配制，可将母液(100 ug/mL)通过工作站的直接稀释模式，配制-一条浓度分别为0.5 ug/L， 2.5 ug/L， 10 ug/L， 50 ug/L和100 ug/L 的标准工作曲线。 图-2. Auto Prep200液体工作站配标程序 4.样品前处理 4.1提取 准确称取粉碎试样25 g于200mL离心管中，加入5.0g氯化钠及100 mL 80%甲醇水溶液，用睿科AH-50 全自动均质器以18000 r/min 的速度均质2 min， 然后以10000 r/min 的转速离心5 min， 取5 mL上清液于50 mL 离心管中，加入45 mL PBS缓冲液混匀，放入离心机中以10000 r/min的转速离心5 min， 取10 mL上清液于80 mL 玻璃试管中，待用。 4.2净化 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Fotector Plus 固相萃取柱 赭曲霉毒素A免疫亲和柱(Romer， 500ng/3 mL) 淋洗 清洗缓冲液、超纯水 洗脱 甲醇 以2 mL/min 的速度精确上样10mL待测液，用10 mL清洗缓冲液和 10 mL 水淋洗免疫亲和柱，气推30 mL压干免疫亲和柱，推速为80 mL/min。最后用1.5 mL 甲醇以0.5 mL/min的速度洗脱小柱，收集洗脱液，加入1.5mL 超纯水，涡旋混匀，过滤膜上机检测。详细步骤见图-3。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间mirl 1 清洗样品通道 H20 2.8 2 填充样品路径 H20 40 3 1.3 3 特殊上样 废水 2 10 5.8 4 清洗样品瓶 清洗缓冲液 废水 40 10 6.4 5 淋洗 H20 废水 3 10 3.9 6 气推 废水 80 30 2.2 7 清洗注射泵 CH30H 60 5 0.5 8 洗脱 CH30H 收集 0.5 1.5 3.3 9 气推 收集 0.5 2 4.4 10 气推 收集 40 10 1.1 11 结束 12 图-3. Fotector Plus 赭曲霉毒素A免疫亲和净化方法 5.检测条件 表-2赭曲霉毒素A液相色谱检测条件 色谱柱 Waterss BEH-C (2.1×100 mm， 1.7 um) 流速 0.200 mL/min 流动相 乙腈：水：冰乙酸=96：102：2 柱温 35°C 进样体积 10uL 梯度洗脱 等度洗脱 荧光检测器 激发波长333nm 发射波长460nm 取空白试样25 g， 添加上机浓度为 10 ug/L的赭曲霉毒素A标准品，进行上述前处理，回收率结果如下表-3所示。 表-3添加实验的回收率及相对标准偏差结果(n=6) 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 4 5 6 0TA 95.7 95.6 92.5 98.7 97.3 100.4 96.7 2.8 7.1.淋洗溶剂对回收率有一定影响，应以清洗缓冲液和水同时淋洗免疫亲和柱除去残留的色素和杂质。若只用水淋洗，将会导致杂质干扰过大，影响结果的准确性。 7.2..免疫亲和柱使用前需提前从冰箱中取出，于25℃回温20分钟左右，冬天室温较低时建议放到温度较高的地方回温。 8.总结 8.1.采用睿科Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪能同步进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。 8.2.睿科Raykol Auto Prep 200 全自动液体工作站可实现混标、标准曲线的配置，全程无需人为值守，让实验人员远离有毒有害物质，保护身体健康。 8.3.睿睿Raykol AH-50全自动均质器采用密封式设计，能有效防止有机溶剂挥发；兼容各种体积的离心管，适配性强；均质完成后可自动进行刀头清洗，避免交叉污染，减少人力耗费。 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2020年10月版 网址：：Vwww.raykol.com邮箱： info@raykol.com热线： 邮箱： info@raykol.com热线：址：：Vwww.raykol.com 本文参考GB/T 30957-2014《饲料中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》 ，试样用80%甲醇水溶液提取，提取液离心、稀释后用含有赭曲霉毒素A特异抗体的免疫亲和柱经睿科Fotector Plus全自动固相萃取仪净化。用清洗缓冲液和超纯水淋洗柱子除去杂质，以甲醇洗脱，高效液相色谱检测，外标法定量。添加上机浓度为10 ug/L的加标实验，得到赭曲霉毒素A的加标回收率在92%-101%之间，RSD值小于5%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中赭曲霉毒素A的检测需求。