饲料中硝基呋喃类检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-2021 解决方案 全自动固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中的硝基呋喃类药物 介自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；高效液相色谱法；硝基呋喃；；饲料 硝基呋喃类药物(NITROFURANS)是一类合成的抗菌药物，主要有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林，其作用机制为扰细菌氧化还原酶从而阻断细菌的正常代谢。硝基呋喃类抗生素被广泛应用丁大肠杆菌和沙门氏菌的预防和治疗中，也会对动物的增长有促进作用。但是，此类药物若是被违法添加至饲料中，长期使用会使其残留在被饲喂动物的肌肉组织与内脏组织，人在食用这些动物性食品后也会出现类似丁药物过敏的症状，重者会出现心动过速、血压升高、胸胸等症状，孕妇在长期食用这些肉食品后还有可能造成新生儿畸形的风险。中此可见，对饲料巾硝基呋喃类药物进行监测是保障人类食品安全的重要组成部分，是保障人类身体健康与生命安全的重要措施。 全自动固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中的硝基呋喃类药物 1.介绍 硝基呋喃类药物(Nitrofurans)是一类合成的抗菌药物，主要有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林，其作用机制为干扰细菌氧化还原酶从而阻断细菌的正常代谢。硝基呋喃类抗生素被广泛应用于大肠杆菌和沙门氏菌的预防和治疗中，也会对动物的增长有促进作用。但是，此类药物若是被违法添加至饲料中，长期使用会使其残留在被饲喂动物的肌肉组织与内脏组织，人在食用这些动物性食品后也会出现类似于药物过敏的症状，重者会出现心动过速、血压升高、胸闷等症状，孕妇在长期食用这些肉食品后还有可能造成新生儿畸形的风险。由此可见，对饲料中硝基喃类药物进行监测是保障人类食品安全的重要组成部分，是保障人类身体健康与生命安全的重要措施。 图-1..四种硝基呋喃类代谢物结构图 本文参考农业部1486号公告-8-2010《饲料中硝基呋喃类药物的测定高效液相色谱法》进行前处理，试样用乙腈提取，提取液浓缩、复溶后使用阳离子交换固相萃取柱经睿科 RaykolFotector Plus 全自动固相萃取仪净化，洗脱液经Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪吹干，2%甲酸水溶液复溶，，高效液相色谱检测，外标法定量。添加上机浓度为1.0 ug/mL 的加标实验，得到硝基呋喃类药物的加标回收率在 78%-89%之间， RSD 值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中硝基呋喃类药物的检测需求。 关键字：全自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；高效液相色谱法；硝基呋喃；i；饲料 2.仪器和耗材 全自动固相萃取仪：：睿科Raykol Fotector Plus 全自动氮吹浓缩仪：睿科Raykol EVA-80 全自动液体处理工作站：睿科Raykol Auto Prep 200 高效效相色谱： Waters ACQUITY UPLC I-Class 配备大体积流通池 固相萃取小柱： MCX， 60 mg/3 mL (RayCure，货号： RC-204-72855) 乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，甲酸(分析纯)，氨水(分析纯)：：含量为25%~28% 2%甲酸水溶液：量取2mL甲酸和98 mL 水混匀。 5%氨化甲醇溶液：准确量取5 mL氨水和95 mL甲醇混匀。 3.标准曲线配制 使用睿科 Raykol Auto Prep 200可实现标准品的全自动化配制，将单标母液(200 ug/mL)通过工作站的配液模式和直接稀释模式，配制一条浓度分别为0.2 ug/mL， 0.5 ug/mL， 1.0ug/mL， 2.0 ug/mL 和5.0 ug/mL的标准工作曲线。 图-2 Auto Prep 200 液体工作站配标程序 4.样品前处理 4.1提取 称取2g(精确至0.01 g)配合饲料试样于100 mL离心管中，加入50mL乙腈，涡旋1min， 65℃超声提取15 min， 每隔5 min 手摇一次。在10000 r/min 离心机上离心10 min，取5mL上清液于玻璃试管中，用睿科 Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪在50℃、1L/min的条件下吹干，残渣用5 mL 2%甲酸水溶液复溶，待净化。 4.2 净化与浓缩 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科Raykol Fotector Plus 固相萃取柱 MCX (RayCure， 60mg/3mL) 活化 甲醇、2%甲酸水溶液 淋洗 水、甲醇 洗脱 5%氨水甲醇 将 MCX 小柱安装在仪器上，分别用3mL甲醇和3mL 2%甲酸水溶液以2 mL/min 速度活化，将上述待净化液以1 mL/min 上样，用3mL水清洗样品瓶，然后用3mL甲醇以2 mL/min速度淋洗固相萃取柱，用气推的方式压干小柱。最后用5mL氨化甲醇以1 mL/min 速度洗脱，洗脱液用用科 Raykol EVA-80 全自动氮吹浓缩仪在50℃、1L/min 的条件下吹干，残渣用1mL 2%甲酸水溶液复溶，过微孔滤膜后上机检测。详细步骤见图-3。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间(min) 1 清洗样品通道 甲醇 1.3 2 活化 甲醇 有机废液 2 3 1.9 3 活化 2%甲酸水溶液 废水 2 3 1.9 4 上样 有机废液 1 5 5.6 5 清洗样品瓶 水 废水 60 3 3.8 6 淋洗 甲醇 有机废液 2 3 1.9 7 气推 有机废液 80 30 2.2 8 清洗注射泵 5%氨化甲醇 60 3 0.4 9 洗脱 5%氨化甲醇 收集 1 5 5.4 10 气推 收集 2 2 1.4 11 气推 收集 20 10 1.3 12 结束 13 图-3 Fotector Plus 硝基呋喃类药物固相萃取方法 5.检测条件 5.1液相色普条件 表-2硝基呋喃液相色谱检测条件 色谱柱 Waters BEH-C8 (2.1×100 mm， 1.7 um) 流速 0.300 mL/min 流动相 A：0.05%乙酸铵，B：乙腈 柱温 35°C 进样体积 10uL 检测波长 365nm 时间/min 流动相A(0.05%乙酸铵) 流动相B(乙腈) 0.0 85% 15% 15.0 65% 35% 17.0 85% 15% 16.0 85% 15% 5.3色谱图 min 图-4.硝基呋喃类药物标准溶液色谱图(1ug/mL) (1呋喃西林；；2呋喃妥因；3呋喃唑酮；4呋喃它酮) 6.加标实验 取空白试样2g，添加上机浓度为1.0 ug/mL 的硝基南喃类药物标准品，进行上述前处里，|回收率结果如下表-3所示。 表-3添加实验的回收率及相对标准偏差结果(n=3) 名称 回收率(%) 平均回收率 RSD S1 S2 S3 % % 呋喃西林 80.6 81.3 77.0 79.6 2.9 呋喃妥因 83.8 79.4 83.0 82.1 2.9 呋喃唑酮 75.6 77.9 81.4 78.3 3.7 呋喃它酮 85.4 97.0 84.6 89.0 7.8 7.总结 7.1采用睿科 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪能同步进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。 7.2睿科Raykol Auto Prep 200 全自动液体工作站可实现混标、标准曲线的配置，全程无需人为值守，让实验人员远离有毒有害物质，保护身体健康。 7.3睿科Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪处理通量高，80个样品可同时进行氮吹，实验平行性好；而且采用氮吹针自动追随液面设计，无需手动调节氮吹针高度且耗气量小，省时省力。 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2020年10月版 热线：箱： info@raykol.com网址：：vwww.raykol.com 硝基呋喃类药物(Nitrofurans)是一类合成的抗菌药物，主要有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林，其作用机制为干扰细菌氧化还原酶从而阻断细菌的正常代谢。硝基呋喃类抗生素被广泛应用于大肠杆菌和沙门氏菌的预防和治疗中，也会对动物的增长有促进作用。