药品（普通输液 , 小容量注射剂以及抗生素）中无菌检查检测方案(无菌试验隔离)

中国药事2005年第19卷第2期·79 无菌隔离舱在药品无菌检查中应用的验证 王知坚，刘咏梅((浙江省药品检验所，杭州 310004) 摘要： 对无菌隔离舱在药品无菌检查中是否适用进行验证。验证实验采用运行确认和性能确认的方法。结果表明无菌隔离舱为药品无菌检查提供了一种可靠的实验环境。 关键词： 无菌隔离舱；无菌检查；验证 中图分类号：R927.33 文献标识码：A 文章编号：1002-7777(2005)02-0079-03 Validation of Isolator System in Sterility Test of Drugs Wang Zhijian and Liu Yongmei (Zhejing Provincial Institute for Drug Control， Hangzhou， 31004) ABSTRACT The applicability of isolator system in sterility testing for drugs was validated.l. The validationstudy was performed in phases of operation qualification and performance qualification. IIsolator system wasvalidated to be credible equipment in sterility testing for drugs. KEY WORDS isolator system； sterility testing； validation 《中国药典》1]规定无菌检查应在洁净度100级单向流空气区域内进行，该区域应进行洁净度验证。传统的无菌检查实验环境是洁净度为10000级背景下局部100级的洁净工作室。随着环境控制技术的进步，新型的符合上述规定的检验环境-无菌隔离舱开始出现。《美国药典》25版2在无菌检查环境要求中已经收载无菌隔离舱。国产的无菌隔离舱已于近年开发成功，对其在药品无菌检查中是否适用需要进行验证。 1 材料 1.1 实验环境 实验在两种环境中进行，一种是传统的无菌室，提供局部100级的净化环境；另一种是本次实验要验证的无菌隔离。 1.2 实验样品 实验采用的样品为所内留样样品，分别为普通输液，小容量注射剂以及抗生素粉针和输液。 1.3 培养基和菌种 实验采用的培养基为中国药品生物制品检定所生产，自行按使用说明书配制。 实验涉及的菌种有金黄色葡萄球菌【CMCC(B)226003】，由中国药品生物制品检定所提供。 1.4 实验设备 实验要验证的设备为HTY无菌隔离舱，由杭州泰林生物技术设备有限公司提供。 2 方法 2.1 无菌隔离舱的运行确认 该无菌隔离舱提供两种运行控制方式：自动和手动。两种方式的控制参数是一致的。控制参数主要有：时间控制，相对湿度控制和舱内压力控制。臭氧灭菌和通风两个运行环节通过时间参数予以控制，臭氧发生的时机由相对湿度参数进行控制，舱内相对正压由压力参数予以控制。用秒表分别记录灭菌和通风的起止时间，与设备的显示时间比较，以验证时间控制的准确性。在加湿和通风过程中设置不同的时间点，分别用湿度计和压差仪测定舱内相对湿度和压力，与显示值比较，以验证控制的准确性。 上述确认实验在不同时间分别进行7次，对各项参数的显示值和测定值进行t检验。 2.2 无菌隔离舱的性能确认 2.2.1 静态洁净和灭菌效果验证 无菌隔离舱灭菌50分钟，通风25分钟后静态应能达到100级的净化级别和无菌的工作状态。在隔离舱内放置实验样品和培养基等物品，按自动运行的参数操作，使用尘埃粒子计数器和浮游菌采样器在不同的时间点测试舱内的尘埃粒子浓度和浮游菌浓度，以验证静态洁净和灭菌的效果。 上述实验在不同时间分别进行7次，对灭菌(通风))：前后的尘埃粒子数和浮游菌数进行t检验。 2.2.2 动态环境参数验证 无菌隔离舱在进行实验的过程中应能保持压力的恒定，同时在动态测试时，其微生物控制水平和静态时相比应落在适宜的范围内，通常所能接受的动静比应为5~7。在实验进行的过程中，在不同的时间点测试舱内的压力和浮游菌浓度，以验证动态环境参数。 上述实验在不同时间分别进行7次，对实验开始和实验中的压力值以及浮游菌数进行t检验。 2.2.3 样品的无菌检查 实验前将培养基、样品和器材放入无菌隔离舱，关闭舱门，按自动方式进行隔离舱内的灭菌和净化。环境参数达到要求后，按《中国药典》附录无菌检查法操作，对上述实验样品进行无菌检查，并记录培养的结果。 2.3 传统无菌室中的实验 在无菌室中，按《中国药典》附录无菌检查法操作，对上述实验样品进行无菌检查，并记录培养的结果。 3 结果 3.1 运行确认结果 HTY无菌隔离舱的各项控制参数的比较结果见表1。结果显示该隔离舱时间控制参数控制准确。相对湿度参数表示的是灭菌开始时的舱内湿度，设定值为85%，显示值和测定值都达到了设定值，表示控制是有效的。压力参数表示的是通风结束后的舱内压力，设定值为40Pa，显示值和测定值虽略低于设定值，但在可以接受的范围内，表示压力控制也是有效的。 表1 控制参数验证结果 控制参数名称 显示值 测定值 t值 P 时间 灭菌 50 49.6 0.5477 >0.05 (min) 通风 25 25.9 1.8665 >0.05 相对湿度(%) 85.64 91.4 8.8293 <0.05 压力(Pa) 39.27 38.14 2.2667 <0.05 3.2 性能确认结果 3.2.1 静态洁净和灭菌效果验证结果 洁净效果用尘埃粒子浓度表示，灭菌效果用浮游菌浓度表示，结果见表2。结果显示浮游菌浓度在灭菌前后下降明显，差异显著，灭菌后舱内浮游菌浓度达到100级净化区域的要求。两种粒径的尘埃粒子浓度通风前后差异显著。通风后，舱内两种粒子浓度均达到100级净化区域的要求。 表2 静态洁净和灭菌效果验证结果 灭菌 灭菌 项目名称 t值 P (通风)前(通风)后 浮游菌数(个/m) 467 3.6063 <0.05 尘埃粒子数 Max0.5um n44778559 2776 3.6044 <0.05 (粒/m) Max5um 5856 0 2.5184 <0.05 3.2.2 动态环境参数验证 动态环境参数包括舱内压力，实验过程中的浮游菌浓度，结果见表3。结果显示上述参数在实验过程中均未发生明显改变，差异不显著。压力参数接近设定值40Pa，实验过程中能确保舱内保持相对正压。浮游菌浓度实验过程中能保持在100级净化区域的水平上。 表3 动态环境参数验证结果 项目名称 实验开始 实验中 t值 P 压力(Pa) 38.9 38 1.3590 >0.05 浮游菌数(个/m) 6 4 0.2357 >0.05 3.2.3 两种实验环境中无菌检查的结果 分别在无菌室和隔离舱内进行了70批次各种剂型的注射剂的无菌检查。其中有5批样品是人为污染有微生物的，检验结果见表4. 表4 两种环境中无菌检查的结果 样品种类 批数 无菌室 隔离室 合格 不合格 合格 不合格 大输液 26 23 3 23 3 小容量注射剂 30 30 0 30 0 抗生素粉针 7 6 6 抗生素输液 7 1 6 3.2.4 两种实验环境中无菌检查符合率的比较结果 分别对上述70批次各种剂型注射剂的无菌检查结果的符合率进行统计分析，结果见表5。两种环境中结果的符合率为100%，差异无显著性((x=0，P>0.05)。 表5 两种环境中无菌检查结果符合率(%)的比较结果 隔离舱 无菌室 合计 合格 不合格 合 格 65 0 65 不合格 0 5 5 合计 65 5 70 4 讨论 控制的精度对确保舱内其他参数的实现具有重要意义。从验证的结果分析，各项控制精度都符合要求。相对湿度和压力控制存在显示值和测定值有显著差异的现象，这是由于舱内传感器的位置和检测仪器的测点位置不一致所引起的。从测试结果分析，这种差异还是可以接受的。 4.2 无菌检查应在100级净化区域内进行。对该净化区域的理解应放在微生物指标的控制上。该区域首先应该能够达到相对无菌，同时还应该能够有效控制实验过程中可能产生的微生物污染。国家标准中对100级净化区域微生物指标的控制标准是浮游菌浓度不得过5个/m'。隔离舱应能提供这样的实验空间。从验证的结果分析，在舱内放置实验用品的静态下，灭菌效果良好，能达到上述标准。在实验进行过程中，微生物指标的控制水平基本维持在100级上，符合无菌检查对洁净空间的要求。结合上述验证实验结果，可以考虑缩短灭菌程序的维持时间，从而提高工作效率。 4.3 100级净化区域除了对微生物指标有控制要求外，还对空间中的尘埃粒子有较高的控制要求。国家标准规定，0.5um粒子不得过3500粒/m²，5um粒子为0。隔离舱应该能够提供这样的空间。 由于采用了高效空气过滤器，滤除了进入隔离舱的空气中的各种尘埃粒子，因此，在静态条件下，通风25分钟后隔离舱内可达到100级水平。 4.4 作为一种可以替代传统无菌室的无菌检查空间，在全面应用到无菌检查之前，应该对其使用的效果进行必要的考察，以确定在该空间中进行无菌检查实验结果的可信度。一种理想的情况应该是在上述空间中进行的无菌检查实验有尽可能低的假阳性率，同时又应该具有尽可能高的阳性检出率。这种考察应该以在传统无菌室中的实验结果作为对比。70批样品基本覆盖了无菌检查的常规剂型，具有较强的代表性。实验前，人为地在各种剂型中设置了阳性样本。从验证结果分析，两种环境中的检验结果具有完全一致的符合率，隔离舱中的检验结果假阳性率为零，检出率为100%。验证实验证明，无菌隔离舱为药品无菌检查提供了一种可靠的实验环境。 ( 参考文献： ) ( [1] 中国药典[S].二部，2000：附录89(附录XI H) ) ( [2] USP [S]. 2 5： 22 4 7 (Ge n eral Information 1208) ) ( [3] 医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方 法 [S]. G B/T16292~16294 ) 国家食品药品监管局研究部署今年反腐倡廉工作 本刊讯 日前，国家食品药品监管局召开党组扩大会议，传达学习中央纪委五次全会精神，研究部署新一年反腐倡廉工作。会上，局党组书记、局长郑筱萸要求食品药品监管系统各级党组织和党员干部认真学习贯彻胡锦涛总书记在中央纪委五次全会上的重要讲话，以对党和人民的事业高度负责的精神，扎实抓好食品药品监管中的党风廉政建设工作。中央纪委驻局纪检组组长、局党组成员杨宝祥介绍了中央纪委五次全会的情况，传达了胡锦涛总书记的重要讲话和中央纪委书记吴官正的工作报告，对贯彻落实中需要注意的问题提出了意见和建议。局机关党委、有关司室和驻局纪检检监察察的负责人参加了会议。 郑筱萸强调，食品药品监管系统各级党组织和党政领导干部要带头学习贯彻胡锦涛总书记的重要讲话，从加强党的执政能力建设的高度，充分认识抓好食品药品监管中反腐倡廉工作的极端重要性，增强政治责任感和使命感，切实履行好党和人民赋予的责任；要突出工作重点，加大治本力度，建立健全教育、制度、监督并重的惩治和预防腐败体系，认真解决权力运行中存在的问题，以良好的党风政风，保持和促进食品药品监管事业的改革和发展；要加大专项整治力度，严厉打击食品药品生产流通中制假售假等违法犯罪行为，坚持维护人民群众的利益；要大力弘扬求真务实精神，狼抓反腐倡廉工作落实，在带头改进作风中不断推进食品药品监管中的党风廉政建设。 ◎Tsinghua Tongfang Optical Disc Co.， Ltd.All rights reserved.