盐酸左氧氟沙星注射液中无菌实验方法验证检测方案(集菌仪)

Strait Pham aceuticalJournalVo118No. 42006 海峡药学 2006年 第18卷第4期 盐酸左氧氟沙星注射液的无菌实验方法验证 张崇生，陶建亮，王芳(浙江省温州市药品检验所温州325028) 摘要：目的 建立盐酸左氧氟沙星注射液的无菌检查的方法。方法 用薄膜过滤法进行。结果 阳性对照菌24h内全部正常生长，阴性对照及样品澄清无菌生长，试验组检出试验菌。结论 盐酸左氧氟沙星注射液的无菌检查，可采用薄膜过滤法，用pH7.0氯化钠-蛋白白稀释液冲洗，冲洗量800mL，每次50mL。 关键词：盐酸左氧氟沙星注射液；无菌检查；方法验证 中图分类号：R944.1； TQ460.4 文献标识码：A 文章编号：1006-3765(2006)03-0037-02 盐酸左氧氟沙星注射液是喹诺酮类抗感染药物第三代最新品种，为氧氟沙星的左旋体，其抗菌活性约为氧氟沙星的两倍，它的主要作用机制为抑制细菌DNA 旋转酶活性，抑制细菌DNA 的复制。其具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点，是公认的强效抗感染药物。为了保证药品的质量，需要对其无菌情况进行控制。根据《中国药典》2005年版的要求，对盐酸左氧氟沙星注射液的无菌检查的方法进行了验证。 1 试验材料 1.1 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基(批号040910)、真菌培养基(批号050104)、营养肉汤培养基(批号030922)、真菌琼脂培养基(批号040409)、营养琼脂培养基(050225)；均由中国药品生物制品检定所提供。 1.2 菌种 (1)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26003]；(2)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CM-CC (B )63501]；(3)铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerug ino sa)[CM CC (B) 10104](4)生孢梭菌(C lo stridium sporogenes)[CM CC (B)64941](5)白色念珠菌(Candida albicans) [CM CC(F)98001]；(6)黑曲霉(A spergillus niger)[CM CC(F)98003]；(7)大肠埃希菌(E scherichia coli) [CM CC (B)44102] 1.3 样品 盐酸左氧氟沙星注射液，规格：2mL：0.1g(按C18H20FN3O4计算)；批号：05082501；05082502；05082503；生产单位：扬子江药业集团有限公司。 1.4 仪器和滤器 HTY-2000A集菌仪，一次性使用的全封闭三联集菌培养器(杭州泰林)。 2 方法和结果 2.1 菌液制备 2.1.1 取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中，生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，32.5±2.5℃培养18~24h： 2.1.2 取经32.5±2.5℃培养19~21h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌内汤培养物lmL，加9mL生理盐水，10倍稀释至约10~10之间。 2.1.3 取经36℃培养18~22h 的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体 ( 作者简介：张长生，男，31岁，毕业于沈阳药科大学，职称：主管管师。 从事药品检验工作。联系电话：0577-88538910或13395876355 ) 培养基培养物lmL，加入9mL 生理盐水，10倍稀释至107混匀备用。 2.1.4 白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，25.5±2.5℃培养24~48h。取经24℃培养18~24h 的白色念珠菌霉菌液体培养物1mL，加入9mL 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10约为50~100cfu·mL备用。 2.1.5 将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，25.5±2.5℃培养5~7d，使大量的孢子成熟。取经25℃培养7d的黑曲霉真菌斜面培养物，加入生理盐水4mL 洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，稀释至104，约为50~100cfu·mL混匀备用。 2.2 供试液制备 取本品用pH7.0氯化钠-蛋白胨稀释液冲洗并过滤。 2.3 菌液计数 分别取上述5种细菌菌液lmL加入培养皿，每种菌液夜平行2皿。注入营养琼脂约18mL，30~35℃培养(生孢梭菌置厌氧培养箱中培养)。分别取上述两种真菌菌液lmL加入培养皿，每种菌液做平行2皿。注入虎红琼脂约18mL。23~28℃培养。活菌计数结果(见表1)。 表1 活菌计数(cfu·mL-) 104稀释 105稀释 10-6稀释 107稀释 试验次数 2 2 2 2 金黄色葡萄菌 67 68 枯草芽孢杆菌 78 81 生孢制菌 65 白色念珠菌 59 61 黑曲霉菌 60 63 铜绿假单胞菌 71 73 大肠埃希菌 60 61 2.4 培养基的灵敏度和无菌检查 2.4.1 取装量12mL的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接种金黄色葡萄球菌、生孢梭菌各3管，每管接种量为lmL(含50~ 100cfu·mL)；余下2管不接种做对照(培养基无菌检查用)。 2.4.2 取装量9mL的液体真菌培养基4管，接种白色念珠菌3管，每管接种量为lmL (含50~ 100cfu·mL)；余下1管不接种做对照(培养基无菌检查用)。 2.4.3 各管置规定的温度培养5d，逐日记录结果，每株菌接种后的培养基，呈现生长；对照澄清无菌生长(见表2)。 表2 培养基的灵敏度和无菌检查 灵敏度与无菌 金黄色葡萄球菌 + + + + 生孢梭菌 十 十 十 十 + 白色念珠菌 + + 无菌检查(细菌培养基) 无菌检查(真菌培养基) 2.5 方法的验证采用薄膜过滤法 2.5.1 取少量冲洗液湿润滤膜，将样品15支，全量通过一次性使用的全封闭三联集菌培养器，再用pH7.0氯化钠-蛋白胨稀释液50mL/次，冲洗滤膜数次，每次用力振摇(取另一全封闭三联集菌培养器，同法操作)，再逐一加入各试验菌lmL(含50~ 100cfu·mL)。分别加硫乙醇酸盐流体培养基5桶及真菌培养基2桶，每桶100mL。 2.5.2 阳性对照：另取集菌培养器，不过滤供试品，其它操作同上，作为阳性对照。 2.5.3 阴性对照：另取集菌培养器各过滤pH7.0氯化钠-蛋白胨稀释液300mL，然后分别加入硫乙醇酸盐培养基和真菌培养基各100mL，不加对照菌液。 2.5.4 培养：硫乙醇酸盐流体培养基桶30~35℃培养；真菌培养基桶23~28℃培养，培养3~ 5d。每天观察并记录结果(见表3、4、5)。 表3 阴性对照结果 培养基 培养ld 培养2d 培养3d 培养4d ：培养5d 硫乙醇酸盐流体培养基桶 - - - - 真菌培养基 - - 一 - - 表4不同阳性对照菌冲洗量结果 大肠 金黄色枯草芽孢 铜绿 生孢 埃希菌葡萄球菌 杆菌 假单胞菌 梭菌 冲洗量400mL 48h(-) 24h(-) 24h(-) 48h(- ) 24h (- ) 冲洗量600mL 24h(-) + 24h(-) + 冲洗量800mL + + + + + 冲洗量1000mL + + + + 阳性对照 + +- + + + 表5 36h观察真菌结果 黑曲霉菌 白色念珠菌 冲洗量400mL + 十 冲洗量600mL + 阳性对照 十 3 结果 3.1 从表1可以看出，菌悬液计数均在50~100cfu·mL。 3.2 从表2可以看出，培养基灵敏度和无菌检查符合要求。 3.3 从表3、4.5可以看出 盐酸左氧氟沙星注射液的无菌检查，阳性对照菌24h 内全部正常生长，阴性对照及样品澄清无菌生长，试验组检出试验菌，可采用薄膜过滤法，用pH7.0氯化钠-蛋白胨稀稀液冲洗，冲洗量800mL，每次50mL，每次用力振摇。 4 讨论 4.1 本品属喹诺酮类抗菌药，具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点，抑菌机制为抑制细菌DNA 旋转酶活性及细菌DNA 的复制，对真菌并无作用，因此其无菌检验方法不能采用直接接种法。故采用薄膜过滤法，以冲洗量的选择实验作为验证试 4.2 阳性对照菌的加入方式，2005年版《中国药典》没有明确指出，目前各检验单位采用：供试品过滤且冲洗完成后，将菌液直接加入培养基。而在国际调和修正案的无菌方法中指出在冲洗滤膜的最后阶段，将菌液加入含有少量的冲洗液的滤器中，过滤后再加入培养基，这样就减少了由于滤膜的质量问题而引起的漏检金。 ( 参考文献 ) ( []国家药典委员会编.中华人民共和国药典 S].2005年版二部，北 京：化学工业出版社，2005， ) ( [2]穗福福.微生物检测验证技术M].北京：中国医药科技出版， 2005. ) ( 3]潘友文.现代医药工业微生物实验质量管理与验证技术M].北 京：中国协和医医大学出版，2004， ) 试论我国药物剂型及制剂研究概况 郑科(福建中鹭医药有限公司福州350001) 摘要： 从20世纪50年代初期到21世纪以来，我国在药物剂型及制剂的研究领域取得了一系列重要成果，大大促进了我国制剂生产整体水平的提高，缩短了与国际水平的差距。 关键词：药物剂型；药物制剂 中图分类号：R94 文献标识码：A 文章编号：1006-3765(2006)03-0038-03 作者简介：郑科，男(1976.1~)。1998年毕业于中国药科大学，药师。执业药师。联系电话：0591-87829688-612，13960782915 药物剂型和药物制剂是药物的载体，以准确的剂量、方便的给药形式或方式直接服务于患者，是治疗疾病和预防疾病的重要工具。20世纪50年代初期，我国仅作了一些制剂处方 ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net