质谱引导型制备液相用于药物中多组分鉴别及分离

本文采用岛津新型液体处理器LH-40作为进样器和馏分收集器，单四极杆质谱LCMS-2020作为质谱检测单元，以分离制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例，分别以紫外，质谱以及紫外和质谱同时触发馏分收集，详细说明了不同触发方式的参数设置以及LH-40的制备模拟功能，并且对不同参数设定得到的不同结果进行了说明。相对于紫外检测器引导的制备色谱而言，质谱的加入可以很好的弥补紫外检测器不足，两者相辅相成，可以使得收集结果更加的准确、收集方式更加多样化，以适用于不同性质的化合物制备需求。SSL-CA23-098 Excellence in ScienceLCMS-041 Excellence in Science 质谱引导型制备液相用于药物中多组分鉴别 及分离 LCMS-041 摘要：本文建立了一种使用岛津质谱引 导 型高效液相制备色谱用于药物中多组分的制备分离的方法。以分 离 制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例 ，采用反向液相色谱，分别以紫外，质谱以及紫外和质谱 同 时触发馏分 收集，详细说明了不 同 触发方式的参数设置以及 LH-40 的制备模拟功能，使用不同的触发方式都可以对目标 组分进行准确的收集。多种触发收集模式，满足不 同 性质的化合物制备需求。 关键词：LH-40质谱 制备分离 阿托伐他汀钙 技术特点： *详细说明了 LH-40 馏分收集的参数设置。 性确认需要花费大量时 间 ；对于无紫外吸收的样品，则 无法使用紫外触发馏分收集，以上都是紫外检测器对制 备分离应用的制约。质谱检测器的加入可以很好的弥补 紫外检测器的短板，可以更快的对多个色谱峰进行定性 确认；；可以在目标组分没有紫外响应或者响应较弱时使 用质谱触发馏分收集，得到的结果更加准确。 本文采用岛津新型液体处理器 LH-40 作为进样器 和馏分收集器，同时采集紫外和质谱两路信 号 ，提供紫 外和质谱两种检测模式的多种触发馏分收集方式，为相 关仪器提供一种高效、灵敏、可靠的液相制备分离手段。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱 InertSustainTM C18 200 mm×4.6 mml.D.， 5um 输 液 泵 A 相-20mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)，B相 -乙腈 流速 束： 1.0 mL/min 柱 温： 40℃ 进样体积 只 ：：20 pL 检测波长： 254nm 洗脱方式：梯度洗脱，，初始浓度为B相45%，洗脱程序见表1 表 1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 10.00 Pumps Pump B Conc. 45 25.00 Pumps Pump B Conc. 50 30.00 Pumps Pump B Conc. 95 37.00 Pumps Pump B Conc. 95 37.10 Pumps Pump B Conc. 45 45.00 Controller Stop 质谱条件 质 谱 监测类型 ： 质量数色谱图(MC) 1.3样品前处理 样品溶液配 制 ：取 阿 托伐他汀钙与杂质I、杂质Ⅲ、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ、杂质V、杂质ⅥI、杂质ⅧI对照品各约2.5mg， 置50mL量瓶中，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。 结果讨论 2.1分离条件探索 将 上 述 样 品溶液按1.2中的分析条件进行测定，色谱图如图1所示。阿托伐他汀钙及部分杂质的色谱峰信息 见表2。 图1 样 品 UV 色谱图和离子流色谱图 表2 色谱峰信 息 表 NO. 名称 保留时间 M+H+ M-H- 1 杂质VI 12.3 718.30 716.25 2 杂质Ⅰ 21.0 541.45 539.25 3 杂质Ⅱ 22.1 559.60 557.15 4 阿托伐他汀 23.0 559.40 557.25 5 杂质Ⅲ 23.8 577.30 575.20 6 杂质Ⅳ 30.4 541.40 539.20 7 杂质Ⅵ 32.8 432.05 430.05 8 杂质Ⅴ 34.9 655.50 653.25 2.2馏分收集 2.2.1馏分收 集 的参数设置流程如下： 步骤1.选择合适的触发馏分收集的方式，若需要使用MS 触发收集，需要在“模拟输出”项下选择MS对 应的通道，以及需要监控的质量数。 口仪器参数视图 常规 高级 结 束时间：45.00 min 馏分收集器 输出 分析时间(min) 类型 m/z(1) m/z(2) m/z(3) m/z( 1 0.000-45.000 MC 718.20 577.20 541.20 2 0.000-45.000 TIC 如下图所示，勾选“启用馏分收集器”，根据触发模式在“制备触发器”的开始和结束选项中选择对应的通 道和命令，可 根据 需 要选择：满足单独通道的参数或者同时满足两个通道的参数。 步骤2.编辑馏分收集开始和结束 的 命令，如下图所 示 ，可 以选择根据色谱峰的级别或者斜率触发馏分收 集 开始和结束的命令。 步骤3.如下图所示，可将最终确定的液相条件时采 集 的色谱峰导入，点击步骤2示意图中“模拟”按钮，会在制备模拟结果显示出 当 前条件 下 的收集结果。其中颜色区域是会进行馏分收集的区域。 0.000 0.000 8.333 步骤4.可根据 需 要添加其它条件，以添加锁定区域为例说明。如下图所示，可在时间程序列表中添加处理 命令，包括锁定时间段，更改参数值等命令； 也可以直接在模拟制备结果右侧的时间程序中添加命令，添加后点击步骤2示意图中“应用”按钮，即可 自动生成时 间 程序列表。 设置完所有的参数后，点击步骤2示意图中 “模拟”按钮，在制备模拟结果中 显 示的就是所有命令下的模 拟收 集 结果。 2.2.2 UV 触发馏分收集 选择 Ch2， 使用UV触发馏分收集，“制备触发器”的开始和结束均选择 Ch2。按照级别进行收集，级别参 数设置为 7000 uV，添加了4个锁定的时间段，此处锁定对该时间段内色谱 峰 不进行收 集 ，模拟收 集 结果如步 骤4中所示。按照上述馏分收集参数进行馏分收集，结果如图2所 示 。实际的馏分收集结果与模拟馏分收集结 果一致。 图2UV 触发馏分收集结果 2.2.3 MS 触发馏分收集 选择 Ch1， 使用MS触发馏分收集 ，选择 MS 模拟信号输出 m/z分别为718.20、577.20和541.20。 “制备 触发器”的 开始和结束均选择 Ch1。按照级别进行收集，级别参数设置为 50000 pV，添加 了 4个锁定的时间段。 按照上述馏分收集参数进行馏分收集，结果如图3所示。杂质Ⅲ的模拟信号满足级别要求，但由于保留时 间 在锁定区间内，因而未收集该馏分；根据图4所示，杂质Ⅴ在的质谱图中也能提取到 m/z 541， 因而也对该 杂质进行了馏分收集。 图3 MS触发馏分收集结果 图4 杂质Ⅴ质谱图 2.2.4 UV 和 MS 共同触发馏分收集 选择 Ch1 和 Ch2，使用 MS和UV 联合触发馏分收 集，选择 MS 模拟信号输出 m/z分别为718.20、577.20和655.20。 “制备触发器”的开始选择 Chl AND Ch2 (需要同时满足 MS 和UV条件)，制备触发器结束选择 Ch1 OR Ch2 (MS 和 UV 满足其中一个条件)。按照级别进行收集， Ch1级别参数设置为 50000 pV， Ch2级别 参数设置为 7000uV。添加了4个锁定的时间段。 按照上述馏分收集参数进行馏分收集，结果如图5所示。杂质Ⅲ的模拟信 号 满足级别要求，但由于保留时 间在锁定区间内，因而未收集该馏分；其余馏分正常收集。 图5 UV 和 MS 共同触发馏分收集结果 ■结论 本文采用岛津新型液体处理器 LH-40 作为进样器和馏分收集器，单四极杆质谱 LCMS-2020 作为质谱检测单 元，以分离制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例，分别以紫外，质谱以及紫外和质谱同时触发馏分收集，详 细说明了不同触发方式的参数设置以及 LH-40的制备模拟功能，并且对不同参数设定得到的不同结果进行了说 明 。相对于紫外检测器引导的制备色谱而言，质谱的加入可以很好的弥补紫外检测器不足，两者相辅相成，可 以使得收集结果更加的准确、收集方式更加多样化，以适用于不 同 性质的化合物制备需求。 岛津应用云