萃取装置在出口饮料中磷酸胆碱的测定 液相色谱-质谱/质谱法实验中的应用

萃取装置在出口饮料中磷酸胆碱的测定 液相色谱-质谱/质谱法实验中的应用（根据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3937-2014）一、原理试样用水稀释提取，经离子交换固相萃取柱净化（酒类饮料使用HLB固相萃取柱预净化），用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量二、使用试剂1. 甲醇2. 甲酸3. 乙腈4. 乙酸铵5. 20mmol/L乙酸铵溶液：1.54g乙酸铵溶解于1000ml水中6. 10%甲酸甲醇溶液：10.0ml甲酸溶解于甲醇中，用甲醇定容至100ml7. 氯化磷酸胆碱标准品：纯度99%8. 磷酸胆碱标准储备溶液9. 磷酸胆碱标准工作溶液：用乙腈-水溶液稀释储备液，配置成浓度分别为5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml的标准工作溶液，现用现配。10. 0.22um水性滤膜三、使用仪器1.液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源2.分析天平3.涡旋混合器                          4.固相萃取装置5.氮吹浓缩仪6.超声波清洗器                    7.均质器                                                                        四、分析步骤1.试样制备（1）液体试样 将取得的代表性试样用WIGGENS DPM24 数字式脉冲高速振荡器混匀后，装入洁净的玻璃器皿中，密封并做好标记           （2）含有果肉、果渣等固体试样 用均质器均质后混匀，装入洁净的玻璃器皿中，密封并做好标记。           （3）试样的保存 将试样置于4℃以下冷藏保存。2.提取（1）果汁、运动饮料、葡萄酒和啤酒 准确称取1g试样，加水稀释至10ml，用WIGGENS D-500Pro 数显均质乳化器混匀。准备WIGGENS SES635索氏多联抽提装置净化。      （2）清酒 准确称取1g试样，加水稀释至100ml，用移液管准确吸取1ml样液，加1ml乙酸铵溶液，混匀，准备过固相萃取柱净化。3.净化 （1）果汁、运动饮料和清酒 用移液管准确吸取提取液1ml过SAX固相萃取柱，弃去流出液，用3ml甲醇淋洗。然后用8ml10%的甲酸甲醇溶液洗脱，洗脱液用氮气吹干，用移液管加1ml乙腈-水溶液定容。混匀后过0.22um微孔滤膜。供液相色谱-质谱/质谱测定。        （2）葡萄酒和啤酒 用移液管准确吸取1ml过HLB固相萃取柱，用2ml水洗脱，接收全部流出液。将流出液全部转移至SAX固相萃取柱，弃去流出液，用3ml甲醇淋洗，用8ml10%的甲酸甲醇溶液洗脱，洗脱液用氮气吹干，用移液管加1ml乙腈-水溶液定容，混匀后过0.22um微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱测定。4.测定  五、得出结论六、注意事项1. 试样保存要置于4℃以下冷藏保存2. 磷酸胆碱标准储备溶液需在1~4℃冷藏保存，有效期6个月萃取装置在出口饮料中磷酸胆碱的测定液相色谱-质谱/质 谱法实验中的应用 (根据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3937-2014) 一、原理 试样用水稀释提取，经离子交换固相萃取柱净化(酒类饮料使用 HLB 固相萃取柱预净化)，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量 二、使用试剂 甲醇 2.甲酸 3.乙腈 4.乙酸铵 5. 20mmol/L乙酸铵溶液： 1.54g 乙酸铵溶解于 1000ml水中 6.110%甲酸甲醇溶液：10.0ml甲酸溶解于甲醇中，用甲醇定容至100ml 7.氯化磷酸胆碱标准品：纯度99% 8.磷酸胆碱标准储备溶液 9.磷酸胆碱标准工作溶液：用乙腈-水溶液稀释储备液，配置成浓度分别为 5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml的标准工作溶液，现用现配。10.0.22um 水性滤膜 三、使用仪器 1.液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源 2.分析天平 3.涡旋混合器 4.固相萃取装置 5.氮吹浓缩仪 6.超声波清洗器 7.均质器 四、分析步骤 1.试样制备(1)液体试样将取得的代表性试样用 WIGGENS DPM24 数字式脉冲高速振 荡器混匀后，装入洁净的玻璃器皿中，密封并做好标记 (2)含有果肉、果渣等固体试样用均质器均质后混匀，装入洁净的玻璃器皿 中，密封并做好标记。 (3)试样的保存将试样置于4℃以下冷藏保存。 2.提取(1)果汁、运动饮料、葡萄酒和啤酒准确称取1g试样，加水稀释至10ml，用 WIGGENS D-500Pro 数显均质乳化器混匀。准备 WIGGENS SES635索氏多联抽提装置净化。 (2)清酒准确称取1g试样，加水稀释至100ml， 用移液管准确吸取 1ml样液，加1ml乙酸铵溶液，混匀，准备过固相萃取柱净化。 3.净化 (1)果汁、运动饮料和清酒用移液管准确吸取提取液 1ml 过 SAX 固相萃取柱，弃去流出液，用3ml甲醇淋洗。然后用8ml10%的甲酸甲醇溶液洗脱，洗脱液用氮气吹干，用移液管加1ml 乙腈-水溶液定容。混匀后过 0.22um 微孔滤膜。供液相色谱-质谱/质谱测定。 (2)葡萄酒和啤酒用移液管准确吸取 1ml过 HLB固相萃取柱，用2ml水洗脱，接收全部流出液。将流出液全部转移至 SAX固相萃取柱，弃去流出液，用3ml甲醇淋洗，用8ml10%的甲酸甲醇溶液洗脱，洗脱液用氮气吹干，用移液管加1ml乙腈-水溶液定容，混匀后过 0.22um微孔滤膜，供液相 色谱-质谱/质谱测定。 4.测定 表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% ≥50 ≥20~50 >10~20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 五、得出结论 样品 中 磷酸胆碱含 量的 测定结 果 可由 仪 器工 作 站软 件 得到或按照式(1)计算： 式中 ： x ——试 样中 待测物的浓度，单位为毫克每千克(m g/k g )； c ——试样最终溶液中待测物 的浓 度 ，单 位为微克每毫升(p g /m L)； c o ——空白试验溶液中待测物 的浓 度，单 位 为微克每毫 升 (pg/m L )； V ——试样溶液定容体 积 ，单位为毫升(mL)； m ——试样溶 液代表 的试 样 量 ，单位为克(g)； F ——换算系数 ，果汁、运动 饮料、葡萄酒和啤酒中F-10，清酒中F=200。 六、注意事项 1.试样保存要置于4℃以下冷藏保存 2.磷酸胆碱标准储备溶液需在1~4℃冷藏保存，有效期6个月