均质器在食品微生物学检验 菌落总数测定中的作用

均质器在食品微生物学检验 菌落总数测定中的作用（根据中华人民共和国国家标准GB 4789.2-2022）一、 原理菌落总数指标主要用来评价食品清洁度，反映食品在生产加工、储存、运输等过程中被微生物污染的程度及卫生质量的重要指标。近年来在市场简单管理总局发布的食品监督抽检微生物不合格中，菌落总数指标不合格占比居于首位。菌落总数即为食品检样经过处理，在壹定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。二、 使用仪器1. 恒温培养箱2. 冰箱：2℃～5℃3. 天平：感量为0.1g4. 恒温装置5. 均质器6. 振荡器7. 无菌吸管8. 无菌锥形瓶9. 无菌培养皿10. pH计或pH比色管或精密pH试纸11.菌落计数器WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器                         WIGGENS WH-650 恒温培养箱        WIGGENS D-500Pro 数显均质乳化器                              WIGGENS HG400 pro拍打式均质器三、 分析步骤1. 样品稀释（1）固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225魅力，无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌介质杯中，使用‍‍‍‍‍WIGGENS D-500Pro 数显均质乳化器8000r/min ~10000r/min均质1min-2min，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用WIGGENS HG400 pro拍打式均质器拍打1min-2min，制成1:10的样品匀液。（2）液体样品:以无菌吸管吸取25ml样品置于225ml，无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，或放入225ml，稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1:10的样品匀液。当结果要求为每g样品中菌落总数时，按第一步操作。（3）用1ml无菌吸管吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于9ml稀释液的无菌试管中，在振荡器上振荡混匀，制成1:100的样品匀液。按操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。（4）根据对样品污染状况的估计，选择1~3个适宜稀释度的样品匀液，吸取1ml在 无菌培养皿中，各两个，同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌培养皿内做空白对照。（5）及时将15ml~20ml冷却至46℃~50℃的平板计数琼脂培养基（可放置于48℃±2℃‍‍‍  WIGGENS WH-650 恒温培养箱中保温）倾注培养皿，并转动培养皿使其混合均匀。2.培养水平放置待琼脂凝固，平板翻转36℃±1℃培养48h。水产品30℃±1培养72h±3h。3.菌落计数（1）可用肉眼观察，必要时用‍‍WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。（2）选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板技术菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。(3)其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无较大片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分步又很均匀，可计算半个平板后*2代表一个平板菌落数。（4）当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数器四、得出结论五、注意事项1.菌落总数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。2.使用仪器时，注意使用规范，严格按照实验手册和实验室规范进行操作。                                                                          均质器在食品微生物学检验菌落总数测定中的作用 (根据中华人民共和国国家标准GB 4789.2-2022) 一、原理 菌落总数指标主要用来评价食品清洁度，反映食品在生产加工、储存、运输等过程中被微生物污染的程度及卫生质量的重要指标。近年来在市场简单管理总局发布的食品监督抽检微生物不合格中，菌落总数指标不合格占比居于首位。菌落总数即为食品检样经过处理，在壹定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。 二、使用仪器 1.恒温培养箱 2. 冰箱：2℃~5℃ 3. 天平：感量为0.1g 4. 恒温装置 5. 均质器 6. 振荡器 7. 无菌吸管 8. 无菌锥形瓶 9. 无菌培养皿 10. pH计或 pH比色管或精密 pH试纸 11.菌落计数器 WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器 WIGGENS WH-650 恒温培养箱 WIGGENS D-500Pro 数显均质乳化器 WIGGENS HG400 pro 拍打式均质器 三、分析步骤 1.样品稀释 (1)固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225魅力，无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌介质杯中， 使用 WIGGENS D-500Pro 数显均质乳化器8000r/min~10000r/min 均质 1min-2min，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用WIGGENSHG400 pro 拍打式均质器拍打1min-2min， 制成1：10的样品匀液。 (2)液体样品：以无菌吸管吸取 25ml 样品置于225ml， 无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，或放入225ml，稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min， 制成1：10的样品匀液。当结果要求为每g样品中菌落总数时，按第一步操作。 (3)用1ml无菌吸管吸取1：10样品匀液1ml， 沿管壁缓慢注于9ml稀释液的无菌试管中，在振荡器上振荡混匀，制成1：100 的样品匀液。按操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。 (4)根据对样品污染状况的估计，选择1~3个适宜稀释度的样品匀液，吸取1ml在 无菌培养皿中，各两个，同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌培养皿内做空白对照。 (5) 及时将15ml~20ml 冷却至46℃~50℃的平板计数琼脂培养基(可放置于48℃±2℃WIGGENS WH-650 恒温培养箱中保温)倾注培养皿，并转动培养皿使其混合均匀。 2.培养 水平放置待琼脂凝固，平板翻转36℃±1℃培养 48h。水产品 30℃±1培养72h±3h。 3.菌落计数 (1)可用肉眼观察，必要时用 WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器，，i记录稀释倍数和相应的菌落数量。 (2)选取菌落数在 30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板技术菌落总数。低于30CFU 的平板记录具体菌落数，大于300CFU 的可记录为多不可计。 (3)其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无较大片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分步又很均匀，可计算半个平板后*2代表一个平板菌落数。 (4)当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数器 四、得出结论 7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算，示例见B.2。 式中： NV—样品中菌落数； 2C——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和； 721 ——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数； ——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数；d——稀释因子(第一稀释度)。 五、注意事项 1.菌落总数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 2.使用仪器时，注意使用规范，严格按照实验手册和实验室规范进行操作。