面粉中总糖和还原糖检测方案(紫外分光光度计)

上海美析仪器有限公司美析仪器 3.5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖的方案 目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量((还原糖以葡萄糖含量计)。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3，5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 仪器及试剂 美析 V1500PC分光光度计 (1)lmg/ml，葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL，容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml， 混匀，4℃冰箱中保存备用。 (2)3，5-二硝基水杨酸 (DNS)试剂 将6.3gDNS 和 262mL， 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和 5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 1000mL，贮于棕色瓶中备用。 (3)碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸馏水中。 (4)酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。 (5)6M HCI 和 6M NaOH各100mL。 实验步骤 1.制作葡萄糖标准曲线 取7支 20mL具塞刻度试管编号，分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖标准液、吸取葡萄糖标液(1mg/mL)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，膏葡萄糖含量为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mg， 加入3，5-二硝基水杨酸(DNS) 试剂1.5ml，用蒸馏水稀释至2ml，配成不同葡萄糖含量的反应液。 2.样品中还原糖和总糖的测定(1)还原糖的提取 准确称取3.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入 50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温 20min，使还原糖浸出。将浸出液((含沉淀)转移到50mL离心管中，于 4000r/min 下离心 5min，沉淀可用 20mL 蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 (2)总糖的水解和提取 准确角取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6M HCI，置沸水浴中加热水解 30min(水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查)。待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示旨，用6mol/LNaOH 中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL 容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL'容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。 (3)显色和比色 取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。 结果与计算 计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。 查曲线所得水解后还原糖毫克数稀释倍数 糖(%)= 9 100 样品毫克数 仪器参数 V-1500PC 可见分光光度计 仪器特点 *采用单片微机控制，128*64位液晶显示 *宽大的液晶显示器可显示多组数据 *巨大的内存空间，可存储多组数据和曲线 *自动调0、调100%功能 *波长自动调节 *滤色片自动切换 *宽大样品池(5mm~100mm) *具有最多十点标样建标准曲线测量功能 *可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量 *可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量 *可断电保存测量设置的标准曲线参数 *配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线*配 USB 接口 *可通过 PC软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求 技术指标及基本参数 *波长范围：320~1100nm *光谱带宽：2nm *波长准确度： ±0.5nm *波长重现性：≤0.2nm *透射比准确度：±0.3%T 上海美析仪器有限公司 *透射比重复性：0.15%T *杂散光：≤0.05%T (340nm NaNO2) *稳定性： 0.001A/h (500nm 预热后) *测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量 *波长调节：自动调节 *光度范围： -0.3~3A *显示方式： 128*64 液晶 *检测器：进口硅光二极管 *光源：进口钨灯 *电源： AC 220V/50Hz 或 110V/60Hz *功率： 120W *仪器尺寸：480×350×220mm *主机净重： 11Kg 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念"科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微 量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，L，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。 美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 了解更多内容请关注我公司微信公众号：美析仪器 TEL- 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。