药品托拉塞米中4种苯胺类遗传毒性杂质含量检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-770Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-231 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GC-MS/MS 法测定药品中4种苯胺类遗传毒性杂质含量 GCMSMS-231 摘要：本文利用岛津公司 GCMS-TQ8040 NX 三重四极杆气相色谱质谱联用仪，建立了药品托拉塞米中邻硝基甲苯、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺4种遗传毒性杂质的检测方法。该方法使用二氯甲烷为提取液采用液液萃取法进行前处理，在2~100 ng/mL 浓度范围内各组分线性关系良好，相关系数均达到0.999以上，方法检出限在 0.03~0.39 ng/mL。2 ng/mL标准混合溶液连续进样7针，峰面积RSD 均小于 4.31%。0.1ug/g与0.25ug/g加标浓度的加标回收率为 96.0~105.0%。该方法简便快捷、灵敏度高，能够有效检测化药中这4种苯胺类遗传毒性杂质的含量。 关键词：气气色谱-三重四极杆质谱联用仪药品：l 遗传毒性杂质 托拉塞米是一种利尿剂，主要用于治疗水肿性疾病，如心力衰竭、肝硬化和肾脏疾病，也可以治疗高血压。托拉塞米在合成过程中必须使用间甲苯胺，间甲苯胺中可能引入邻甲苯胺、对甲苯胺和邻硝基甲苯，这四种物质均含有遗传毒性杂质致癌性杂质的警示结构，为遗传毒性杂质。 遗传毒性杂质是一类在很低的浓度下即可诱导基因突变并导致染色体的断裂和重排从而具有潜在致癌性的物质。该类物质近年来引起国际社会的高度度注，ICH针对遗传毒性杂质制订了指导原则 M7 遗传毒性杂 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8040 NX 三重四极杆气相色谱质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱：SH-Rtx-wax (30 m×0.25mm×0.25 um) 进样口温度：250℃ 流速控制方式：恒线速度方式 线速度： 44.7 cm/s 进样方式：不分流进样 质指南。该指南提供了多种遗传毒性杂质类物质的毒理学数据，并根据这些数据给出了这些物质的阈值。 遗传毒性物质通常限度很低，，目前已有采用GCMS 法检测药品中苯胺类物质的报道，为进一步提高检测的灵敏度，本文使用二氯甲烷为提取液采用液液萃取法进行前处理，采用 GCMS-TQ8040 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪检测，建立了托拉塞米中邻硝基甲苯、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺四种遗传毒性杂质的检测方法。该方法简便快捷、灵敏度高，可用于托拉塞米中这四种遗传毒性杂质含量的检测。 高压进样：250kPa (1 min) 离子化方式：E 离子源温度：230℃ 色谱质谱接口温度：240℃ 检测器电压：调谐电压+0.6kV 采集模式：MRM，离子信息见表1 样品前处理 结果与讨论 3.1四种遗传毒性杂质质量色谱图 Q120.00>65.10 (+) 3.55e3 Q 106.00>77.10(+) 5.40e3 图1四种遗传毒性杂质标准溶液质量色谱图(2ng/mL) 表1四种遗传毒性杂质组分信息 No. 中文名称 英文名称 CAS号 保留时间(min) 定量离子 定性离子 20.00>92.10 1 邻硝基甲苯 o-Nitrotoluene 88-72-2 9.174 120.00>65.10 92.00>65.10 2 对甲苯胺 p-Toluidine 106-49-0 9.223 106.00>77.10 106.00>79.10 106.00>51.10 3 间甲苯胺 m-Toluidine 108-44-1 9.324 106.00>77.10 106.00>79.10 107.00>77.10 4 邻甲苯胺 o-Toluidine 95-53-4 9.486 106.00>77.10 106.00>79.10 107.00>77.10 3.2标准曲线和检出限 分别配制2、5、10、20、50、100 ng/mL的混合标准溶液，进样1uL，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，各化合物标准曲线如图2所示。根据2ng/mL标样数据，以3倍信噪比计算四种遗传毒性杂质的仪器检出限，各化合物检出限及线性相关系数如表2所示。 Area Area 间甲苯胺 图2四种遗传毒性杂质标准曲线 表2各组分相关系数及仪器检出限、仪器定量限 No. 组分名称 相关系数(R) 检出限(ng/mL) 定量限(ng/mL) 邻硝基甲苯 0.9997 0.03 0.09 2 对甲苯胺 0.9993 0.39 1.31 3 间甲苯胺 0.9993 0.30 1.00 4 邻甲苯胺 0.9993 0.27 0.89 3.3重复性实验 取2ng/mL标准品溶液，连续进样7次，考察仪器的重复性，测定结果见表 3. 表3各组分重复性结果 No. 化合物名称 面积1 面积2 面积3 面积4 面积5 面积6 面积7 RSD (%) 1 邻硝基甲苯 6746 6722 6984 6592 7125 7168 7209 3.56 2 对甲苯胺 5282 5122 5205 5220 4883 4876 5066 3.18 3 间甲苯胺 6752 6477 6747 6563 6755 6849 6460 2.32 4 邻甲苯胺 5992 5556 5795 5326 5708 5996 5560 4.31 3.4加标回收率 检测市售的托拉塞米片，药品中检出了邻甲苯胺。对此药品进行两个浓度水平的加标实验，回收率结果如表4所示。 表4药品加标实验结果 No. 化合物名称 样品含量 (ug/g) 加标 (0.1ug/g) 加标 (0.25ug/g) 测试值((ug/g) 回收率(%) 测试值((ug/g) 回收率(%) 邻硝基甲苯 N.D. 0.105 105.0 0.253 101.2 2 对甲苯胺 N.D. 0.096 96.0 0.246 98.4 3 间甲苯胺 N.D. 0.103 103.0 0.258 103.2 4 邻甲苯胺 0.031 0.129 98.0 0.280 99.6 注： N.D.表示未检出。 结论 本文利用岛津公司的 GCMS-TQ8040 NX 三重四极杆气相色谱质谱联用仪，建立了药品托拉塞米中邻硝基甲苯3邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺四种遗传毒性杂质的检测方法。该方法使用二氯甲烷为提取液采用液液萃取法进行前处理，在2~100 ng/mL 浓度范围内各各组分线性关系良好，相关系数均达到0.999以上，方法检出限在0.03~0.39 ng/mL。 2 ng/mL标准混合溶液连续进样7针，峰面积RSD 均小于 4.31%。0.1 ug/g与 0.25ug/g 加标浓度的加标回收率为 96.0~105.0%。该方法简便快捷、灵敏度高，能够有效检测托拉塞米中这四种遗传毒性杂质的含量。 岛津应用云 本文利用岛津公司的GCMS-TQ8040 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪，建立了药品托拉塞米中邻硝基甲苯、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺四种遗传毒性杂质的检测方法。该方法使用二氯甲烷为提取液采用液液萃取法进行前处理，在2~100 ng/mL浓度范围内各各组分线性关系良好，相关系数均达到0.999以上，方法检出限在0.03~0.39 ng/mL。2 ng/m标准混合溶液连续进样7针，峰面积RSD均小于4.31%。0.1 μg/g与0.25 μg/g加标浓度的加标回收率为96.0~105.0%。该方法简便快捷、灵敏度高，能够有效检测托拉塞米中这四种遗传毒性杂质的含量。