牛奶中氯霉素检测方案

分子印迹固相萃取柱净化一GC-MS/MS 测定牛奶中的氯霉素 (北京普析通用仪器有限责任公司) 1.适用范围 本方法适用于牛奶中氯霉素残留量的检验。 2.仪器与试剂 2.1仪器与设备 高效液相色谱-串联质谱联用仪，配有电喷雾离子源 (ESI)； 电子天平，固相萃取装置，涡旋混合器，微量移液器，离心机，氮吹仪，超声波清洗器 2.2试剂 氯霉素分子子迹固相萃取柱(40mg/3mL，北京普析通用仪器有限责任公司)，乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，乙酸(色谱纯)，正己烷，甲醇乙酸(9：：1)，0.1%甲酸水溶液-甲醇溶液(95+5，体积比)，氯霉素标准品 (CAS： 56-75-7)；氯霉素-D5(CAS： 02480-68-0) 3分析步骤 3.1试样提取 称取2g(精确至0.01g)样品于15mL离心管中，添加 0.1 u g/mL 内标工作液 100 uL于待测样品中，加标，加入 1g氯化钠，，加入4mL乙腈， 2mL正己烷，，置于水平振荡器振荡 10min， 充分提取。离心 5min (4000r/min)，取乙腈相到15mL 离心管中。再次加入4mL乙腈重复提取，合并乙腈相。将乙腈相在40℃下用氮气将其吹干。加入2mL超纯水，超声混匀，使残渣充分溶解后备用。 3.2 净化 预淋洗：乙酸：甲醇(1：9)3mL预淋洗。 活化：3mL甲醇活化，加入3mL水冲洗甲醇，保证水在柱中未完全流干。 上样： 将上述残渣溶液上柱 淋洗：3mL水淋洗，完全抽干。 洗脱：用3mL的乙酸：甲醇(1：9)洗脱固相萃取柱，彻底抽干，收集洗脱液，40℃N2吹 干，再准确加入1 mL 乙：水(1：1)复溶。超声混匀。将溶液用0.2 u m 有机相滤膜过滤后供液相色谱串联质谱测定。 3.3 标准曲线制作： 标准物质储备液(1ug/mL)：根据标准物质储备液单标的含量，精确移取标准物质储备液，并用乙腈定容。此溶液置于-18℃下冷藏。 内标标准物质储备液(1ug/mL)：根据内标标准物质储备液单标的含量，精确移取内标标准物质储备液，并用乙腈定容。此溶液置于-18℃下冷藏。 标准物质中间液(20ng/mL)：移取1ug/mL标准物质储备液，用乙腈：水(1：1)配制为20ng/mL标准物质中间液，摇匀，备用。 内标标准物质中间液(100ng/mL)：移取1ug/mL标准物质储备液，用乙腈：水(1：1)配制为100ng/mL标准物质中间液，摇匀，备用。 分别准确移取标准物质中间液(20ng/mL)、内标标准物质中间液(100ng/mL)适量，并用乙腈：水(1：1)稀释得到以下浓度的标准工作液(见表2)经0.2m 微孔滤膜过滤，备用。 表1 标准工作液浓度 序号 1 2 3 4 5 工作液浓度 ng/mL 0.5 1 2 5 10 标准物质中间液(20ng/mL)体积uL 25 50 100 250 500 内标标准物质中间液(100ng/mL)体积uL 100 定容体积mL 1 3.4 测定 1)液相仪器条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (2.1mm，，775mm×2m) 柱温：40℃ 进样羊：2HL 流动相A：水 流动相B：乙腈 泵模式：二元高压梯度 总流速： 0.3mL/min 初始流动相：流动相B乙腈 30% 时间程序 时间 min 单元 命令 值 5 控制器 STOP 2)质谱条件 离子源： ESI，负离子模式 扫描方式：多反应监测 监测离子：见表3 表2被测的母离子和离子参数表 被测物名称 定性离子对(m/z) 驻留时间(msec) Q1(V) CE Q3(V) 氯霉素 321.10>152.10 100 16 16 16 321.10>257.15 氯霉素-D5 326.20>157.15 100 21 11 27 注：质谱中被测的母离子和离子参数均为使用仪器优化出的最佳条件。 4.结果与分析 4.1检出限 按照以下公式进行方法检出限的计算。 式中： S一为噪声的3倍，即仪器能辨认的最小的物质信号； b一标准曲线回归方程的斜率。 最终检出限为 0.00001mg/kg 4.2准确度 牛奶样品加标回收率见表3。 表3牛奶中氯霉素回收率数据 样品名称 化合物名称 添加浓度(ug/kg) 取样量(g) 实测值 (ug/kg) 回收率% 牛奶 氯霉素 2 2 2.330 116.52% 2 2.325 116.25% 2 2.325 116.28% 4 4.407 110.18% 4 4.452 111.30% 4 4.570 114.26% 10 10.794 107.94% 10 11.176 111.76% 10 11.255 112.55% 由表可知，氯霉素回收率在107.94%—116.52%之间。 分子印迹分子印迹固相萃取柱净化— GC-MS/MS 测定牛奶中的氯霉素