单抗药物中消泡剂残留量检测方案(ICP-AES)

SSL-CA20-178Excellence in Science Excellence in ScienceICP-149 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel： 86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 利用电感耦合等离子体发射光谱仪测定单抗药物中消泡剂残留量 ICP-149 摘要：本文利用岛津电感耦合等离子体发射光谱仪 ICPE-9820 测定了单抗药物中消泡剂的残留量，实验结果表明：硅元素的相关系数r>0.9997，检出限为0.035 mg/L， 精密度好 (RSD<1.5%)，加标回收率为92.7%，该方法操作简便、快速，测试结果准确，可适用于测定蛋白类样品中消泡剂的残留量。 关键词：电感耦合等离子体发射光谱法ICP-OES 消泡剂硅含量 随着生物技术的不断革新，生物药行业也在快速发展，其中细胞培养技术作为生物药的一种生产方式也在不断迅速发展。在细胞培养过程中会产生大量的泡沫，进而对培养基中的细胞产生不利影响。为了消除泡沫带来的影响，生产时通常要把特定量的消泡剂加入其中来消除泡沫对培养液中的细胞所产生的不利影响。 消泡剂不仅对细胞的生理产生不利影响，也会影响人体健康，在消除泡沫的前提下应尽可能的减少消 泡剂的用量。在对最终成品进行纯化过程中，要尽量去除消泡剂。在优化产品纯化工艺工程中，为了保证产品质量，需要对纯化的过程样以及最终产品进行消泡剂残留量的测定，从而确定最优的纯化工艺。。 本文使用岛津电感耦合等离子体发射光谱法测定了细胞培养液硅元素的含量，该方法操作简单，定量准确，可以满足对蛋白类样品中消泡剂的残留量的测定。 1.1仪器 岛津ICPE-9820 电感耦合等离子体发射光谱仪 1.2实验器皿及试剂 实验所用器皿分别为塑料或玻璃材质，使用硝酸溶液(1+1)浸泡24小时后，用去离子水冲洗，干燥备用；实验用水为超纯去离子水。 1.3样品前处理 移取2.5 mL试样于25mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度线，摇匀，待测。同法制备样品空白溶液和样品加标溶液。 1.4仪器参数 高频功率：1.20kW 等离子体气流速：14.0L/min 辅助气流速： 1.2 L/min 载气流速： 0.7L/min 炬管类型：标准炬管 雾化器类型：同心 结果与讨论 2.1标准曲线溶液配制 用超纯水配制 Si 的标准溶液，标准溶液浓度见表1。 表1 Si标准溶液浓度(mg/L) 元素 观测方向 波长/nm STD1 STD2 STD3 STD4 STD5 STD6 Si 轴向 251.611 0.0 0.25 0.5 1.0 2.5 5.0 2.2硅元素标准曲线如下 图1 Si 元素的标准曲线 r=0.99974 2.3 Si 元素谱峰轮廓图 Si 251.611 Best 条件1 图2Si元素谱峰轮廓图 2.4样品分析结果及加标回收率 按照实验方法，对空白溶液重复测定10次，取3倍强度的标准偏差除以曲线斜率求得硅元素在溶液中的检出限。为考察方法的准确性，对样品进行加标回收，实验结果见表2。 表2 单抗药物样品分析结果及加标回收率 元素 分析结果 样品结果 加标浓度 加标后测定结果 RSD(n=6) 加标回收率 检出限 (mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) (%) (%) (mg/L) Si 2.06 20.6 1.50 3.45 1.25 92.7 0.035 2.5方法精密度实验 为了验证本方法的重复性，取6份同样的样品，分别向样品中加入硅元素的标准溶液(最终溶液硅元素加标量为1.5mg/L)，求出6份样品加标测定结果的 RSD 值，确定方法的精密度，其结果见表3。 表3单抗药物样品加标样测定结果和精密度 元素 加标样测定结果 (mg/L) RSD (%) 1#样品 2#样品 3#样品 4#样品 5#样品 6#样品 Si 3.49 3.50 3.46 3.43 3.40 3.39 1.25 结论 本文利用岛岛电感耦合等离子体发射光谱仪 ICPE-9820 测定了单抗药物中消泡剂的残留，建立了一种测定单抗药物中消泡剂残留量的方法。实验结果表明：该方法线性范围在0.25-5.0 mg/L时，硅元素的相关系数r> 0.9997，仪器检出限为 0.035 mg/L，加标回收率为92.7%， 1.5 mg/L的加标样品6次测定RSD 值<1.5%，该方法操作简便、快速，测试结果准确，可适用于测定蛋白类样品中消泡剂的残留量。 岛津应用云 随着生物技术的不断革新，生物药行业也在快速发展，其中细胞培养技术作为生物药的一种生产方式也在不断迅速发展。在细胞培养过程中会产生大量的泡沫，进而对培养基中的细胞产生不利影响。为了消除泡沫带来的影响，生产时通常要把特定量的消泡剂加入其中来消除泡沫对培养液中的细胞所产生的不利影响。消泡剂不仅对细胞的生理产生不利影响，也会影响人体健康，在消除泡沫的前提下应尽可能的减少消泡剂的用量。在对最终成品进行纯化过程中，要尽量去除消泡剂。在优化产品纯化工艺工程中，为了保证产品质量，需要对纯化的过程样以及最终产品进行消泡剂残留量的测定，从而确定最优的纯化工艺。。本文使用岛津电感耦合等离子体发射光谱法测定了细胞培养液硅元素的含量，该方法操作简单，定量准确，可以满足对蛋白类样品中消泡剂的残留量的测定。