细胞脱落、黑点、碎片问题的处理办法

　　科学研究中需要用到各种细胞系作为实验模型，这些细胞系通常可以从各大细胞库获取。而在收到细胞库寄送来的常温细胞时，常常会遇到一些问题，比如细胞脱落、皱缩、有黑点，接下来远慕为大家详细解答这些情况。　　一、收货时，细胞脱落　　有些细胞本身贴壁不牢，很容易脱落（如293系列，TM3，TM4，Raw264.7，原代内皮细胞，原代平滑肌细胞）。　　另外，运输过程中受到碰撞或气温过低，也可能导致细胞脱落。　　处理办法　　① 脱落的细胞进行离心收集，并在离心管中消化。　　② 仍然贴壁的细胞，按照常规方法加入胰酶或其他解离剂消化。　　③ 再将消化好的脱落细胞和贴壁细胞混合，按比例接种到新的培养器皿中。　　二、收货时，细胞皱缩　　运输过程中，路途颠簸加上温度不稳定，常温细胞会发生回缩。　　处理办法　　放入培养箱静置2-4小时，若4小时后仍然没有伸展，延长静置时间。注意，过夜静置时，需倒出部分培养基，留5-10mL在瓶中，瓶盖拧松透气，保持气体交换（L15培养体系除外）。　　若有脱落细胞，需离心收集。　　三、收货时，细胞黑点较多　　当受到运输环境影响时，细胞会发生应激反应，分泌活动增加，导致分泌蛋白增多，呈黑色圆球状，分布无规律。　　同时，路途中凋亡的细胞碎裂后将产生细胞碎片，为黑色或透明色，呈不规则状，分布无规律。　　另外，有些细胞本身分泌活动较强，培养时常伴随黑点。　　处理办法　　1.贴壁细胞放培养箱静置2-4小时后，正常换液或传代；　　2.悬浮细胞800~1000rpm（约160~200g） 低速离心3min去除碎片。通常培养数天后，细胞状态会逐渐稳定下来。