LCMS测定川楝子中川楝素的含量

本文利用岛津公司LCMS-2050单四极杆液质联用仪测定川楝子中川楝素的含量。结果显示：对川楝素标准品溶液进行重复性测试，川楝素两个峰的保留时间及峰面积的RSD分别在0.15~0.18%和0.73~0.97%之间；以两个峰的峰面积之和采用外标法定量，其结果显示校准曲线相关系数大于0.999；使用0.2 µg/mL标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算川楝素方法检出限，低于限度的百分之一以下。使用川楝子药材作为加标基质，考察三个不同浓度水平加标回收以及RSD，结果显示，三个不同水平的加标回收率在91.16~103.04%之间；该方法满足2020版中国药典中川楝子中川楝素的定性定量分析的要求。综上所述，各项数据表明本方法灵敏度高、稳定性和重复性好，分析效率高，适用于川楝子中川楝素的含量测定。SSL-CA23-152Excellence in Science Excellence in ScienceLCMS-044 LCMS 测定川楝子中川棟楝素的含量 LCMS-044 摘要：本文利用岛津公司新型小型化单四极杆液质联用仪，对 川 楝子 中 川 楝素的含 量 进行测定。在0.2~10ug/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数大于0.999，方法检出限为 0.018 ug/mL。0.2 ug/mL标准品溶液 连续进样6针，峰面积 RSD 均小 于 0.97%。三个浓度水 平 的加标回收率为91.16%~103.04%。该方法灵敏度高，重复性好，能够有效的测定川楝子中川楝素的含量。 关键词：川楝 子 川楝 素 液质联用法 技术特点： 心此方法测定中药中的川楝素，三 干扰少，准确性好，更适用于中药领域用户使用。 必灵敏度高，检出限可达2020版中国药典规定限度的百分之一以下。 川楝子为楝科植 物 川楝 Melia toosendan Sieb.et Zucc. 的干燥成熟果实，收录于2020版中国药典中，川 楝子性味苦寒，有小毒，具有疏肝泄热、行气止痛、杀虫等功能，主 要用于肝郁化火，胸胁、脘腹胀痛，疝气疼痛，虫积腹痛，现代研究发现川楝子也具有杀虫、抗炎镇痛、抗肿瘤、抗肉毒素等药理作用。 的检测方式。但是，由 于 川楝素最大吸收波长为210nm， 在分析实际药材时，药材中的复杂成分对于检测 的结果干扰大。而采用LCMS可有效提高方法的灵敏 度 、准确度和抗 干 扰能力，并简化前处理过程，有效提高 检测效率 。 川楝 素 为川楝子的 主 要活性成分，也是其 主 要的 毒性成分，在2020版中国药典中规定川楝素的含量应 在0.060%~0.20%范围内，含 量 过少则功效难以达到，含量过多则产生 毒 性。因此，川楝 素 的含量是中药材 川 楝子质量控制的关键。 据文献报道，川楝子的中川楝素可采用 LC-UV 图1 川 楝素 实验部分 1.1仪器 岛津单四极杆液质联用仪 LCMS-2050，配置信息如下： 系统控制器 CBM-40 7机 儿： DGU-405 脱气 输 液 泵 LC-40D xs×2柱温 箱CTO-40C 自动进样器 SIL-40C XS 质谱 1仪：LCMS-2050上· 色谱 工 作站 Labsolutions Ver. 5.114 1.2分析条件 液相色谱条件 色 谱 普 柱：：Shim-pack Scepter C18 (100 mmx2.1mml.D.， 1.9 um，岛津 (上海)实验器材有限公司， P/N： 227-31012-05) 流 动 相 A -0.01%甲酸水；B -乙腈 进样体积 2uL 柱 温品：40℃流 速 0.4 mL/min 洗 针液：甲 醇 /水=1：1(v：v) 洗脱方式： 等度洗脱，流动相A/B=31/69。 质谱条件 离子化模式：ESI -雾化气流速：2.0 L/min 接妾口电压：-3.5kV干燥气流速 5.0 L/min 脱溶剂温度：400℃加热气流速：7.0 L/min 接 妾口温度：300°℃DL温 度：250℃选择离 子 模式：SIM m/z ： 573.23 样品前处理 取川楝子中药材粉末约0.05g， 精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，称定重量，加热回流 1小时，放冷，再称定重量，用 甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过 ，取续滤液，即得。 结果与讨论 3.1川楝素标准溶液谱图 图 2 川楝素标准 溶液 选择性离 子 图(2ug/mL) 2020版中国药典规定，峰1、峰2均为川楝素。川楝素1的理论塔板数为11112，川楝素2的理论塔板数 为12756，满足2020版中国药典中理论塔板数以川楝素峰计不低 于 8000的 要求。 3.2校准曲线和检出限 2020版中国药典规定，川楝素的两个峰之和进行计算。配制0.2、0.5、1、2、5、10 ug/mL 的川楝素系列 浓度标准溶液，取2uL进样，以浓度为横坐标，两 个峰面积之和为纵坐标做标准曲线，标准曲线如图2所示，相关系数 (R) 为 0.9995， 准确度为93.1%~103.8%。根据0.2 ug/mL标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算 川楝素方法检 出 限，川楝素的方法检出限为 0.018 ug/mL， 低于限度的百分之一以下。 图 3 川 楝 素标准曲线 3.3重复性实验 取 0.2 ug/mL标准品溶液，连续进样6次，考 察 仪器的精密度，测 定结果见表1。 表1 川 楝素峰1，2精密度结果 序号 川楝素峰1 川楝素峰2 保留时间 min 峰面积 保留时间 min 峰面积 1 7.158 205811 9.366 71605 2 7.148 205611 9.356 73450 3 7.153 208635 9.356 73465 4 7.133 208451 9.328 72949 5 7.163 207695 9.380 73316 6 7.153 205338 9.365 73226 平均值 7.151 206924 9.359 73002 RSD% 0.15 0.73 0.18 0.97 3.4样品含量测定 将川楝素样品按照上述前处理方法进行处理 ，上机进行测定，样品中川楝素选择性离子图如图4所示。平 行 测 定6份样品含量以及考察 RSD， 具体结果如表2所示。 图4 样 品 中川 楝 素的选择性离子图 表26份平行样品川楝素含量结果 名称 称样质量g 定容体积mL 浓度 ug/mL 含量% 平均值% RSD% 平行样1 0.0590 50.00 3.430 0.291 平行样2 0.0591 50.00 3.435 0.291 平行样3 0.0591 50.00 3.407 0.288 平行样4 0.0589 50.00 3.383 0.287 0.289 0.70 平行样5 0.0592 50.00 3.397 0.287 平行样6 0.0590 50.00 3.441 0.292 3.5加标回收率 将川楝素样品中分别加入不同浓度水平的川楝素标准品，按照上述前处理方法处理，分别制备出80 ug、100 ug、120 ug 三个添加水平的加标样品，平 行6份样品考察回收率和 RSD， 三个不同水 平 样品的加标回收率 在91.16~103.04%范围内， RSD 结果如表3所示。 表3 不 同 浓度水平 川 楝素添加回收率结果 添加量煎ug 平均回收率% RSD% 80 93.95 0.67 100 92.94 0.70 120 101.18 0.76 结论 本文利用岛津公司 LCMS-2050单四极杆液质联用仪测定川楝子中川楝素的含量。结果显示：对川楝素标准 品溶液进行重复性 测 试，川 楝素两个峰的保留时 间 及峰面积的 RSD 分别在 0.15~0.18%和0.73~0.97%之间；以两个峰的峰面积之和采用外标法定量，其结果显 示 校准曲线相关系数大于0.999；使用0.2 ug/mL标样数据 ，以3倍信噪比(峰至峰)计算川楝素方法检出限，低于限度的百分之一以下。使用川楝子药材作为加标基质 ，考 察 三 个不 同 浓度水平加标回收以及RSD， 结果显示，三 个不同水平的加标回收率在 91.16~103.04%之间；该方 法满足2020版中国药典中川楝 子 中川楝素 的 定性定量分析的要求。综上所述，各项数据表明本方法灵敏度高、稳定性和重复性好，分析效率高，适用于川楝子中 川 楝素的含量测定。 岛津应用云 岛津企业管理(国)有限公司标术分析集酸加标浓度2ug/L)重 叠 色谱图(基线