赛里安LC6000 HPLC搭配DAD检测器分析复杂基质中的水溶性维生素

前言：维生素是生命正常代谢过程中至关重要的化合物。它们不仅天然存在于许多食品中，目前也经常添加到加工食品中。此外，在饮食不规律的人群中，使用维生素补充剂已经愈发常见。维生素分为两种，即水溶性和脂溶性。其中水溶性维生素最为常见主要是硫胺素（B1），吡哆素（B6），钴胺素（B12），核黄素（B2），烟酸（B3），烟酰胺，抗坏血酸葡糖苷，维生素C 和异抗坏血酸。由于水溶性维生素的性质不稳定，因此在常规分析中具有一定难度。日常生活中影响水溶性维生素稳定性的因素有很多，如暴露在高温、强光、空气的条件下以及与其它的食品成分发生相互作用，均会影响水溶性维生素的稳定性。通过使用带有二极管阵列检测器（DAD）的反相高效液相色谱（HPLC），很容易开发出检测水溶性维生素的方法。在定量分析中，由于维生素C和异抗坏血酸的不稳定性，其在样品制备过程中经常发生分解，因此建议建立单独的 HPLC 方法。结论：本文使用带有二极管阵列检测器和反相 C18色谱柱的赛里安HPLC-6000系统可以轻松同时鉴定出 9 种水溶性维生素，方法简便、快速。由于维生素C和异抗坏血酸的不稳定特性，样品制备是此应用过程中必须考虑的关键因素。即使对于不稳定的维生素，赛里安LC6000 也观察到了极好的线性。同时 Compass CDS 软件可轻松比较吸收光谱，结果准确可信。)Techcomp 维生素是生命正常代谢过程中至关重要的化合物。它们 不 仅天 然存在于许多食品中，目前也经常添加到加工食品中。此外 ，在饮 食不规律的人群中，使用维生素补充剂已经愈发常见。维生素分为 两种，即水溶性和脂溶性。其 中水溶性维生素最为常见主要是硫胺 素 (B1)，吡哆素 ((B6)，钴胺素 ((B12)，核黄素 ((B2)，烟酸 (B3)，烟酰胺，抗坏血酸葡糖苷，维生素C和异抗坏血酸。 由于水溶性维生素的性质不稳定，因此在常规分析中具有 一 定 难度。日常生活中影 响 水溶性维生素稳定性的因素有很多，如暴露 在高温、强光、空 气的条件下以及与其 它 的食品成分发生相互作用，均会影 响 水溶性维生素的稳定性 。 通过使用带有 二 极管阵列检测器(DAD)的反相高效液相色谱 (HPLC)，很容易开发出检测水溶性维生素的方法。在定量分析中，由于维生素C和异抗坏血酸的不稳定性 ，其在样品制备过程中经常发 生分解，因此建议建立单独的 HPLC方法。 Author： 天美仪拓实验室设备(上海)有限公司色谱市场部 本报告描述了食品种常见的水溶性维 生素的定性和定量分析，建立了一种可同时 测定9种水溶性维生素的反相高效液相色谱 法(RP-HPLC)。采用赛里安LC6000系统 上实现了9种水溶性维生素的分离和定量。具有多波长选择特性LC6000-DAD二极管阵 列检测器可有效实现在各种维生素的最大吸 收波长处对其进行检测。 本应用方案使用 SCION 6000 HPLC(配DAD 检 测 器和 C18， 5um反相柱)时，可以同时轻松鉴定9种目标 化合物。制备的分析用标准品在四丁基铵中的浓度范 围为 0.1-50mg/L。为了分析维生素B1和 B6， 使用了 盐酸盐。同时因为样品是富 含 维生素 的 健康饮料和营 养补品，因 此 在样品制备过程中以1：10的 比例稀释，然后通过 0.45um过滤器过滤后 待 分析。 仪器和试剂 采用包含以 下 模块的赛里安LC6000高效液相色谱仪系 统： ·集成六通道 真 空脱气的SC I ON LC6000四元泵 ·SCION LC6000 高精度、低残留自动进样器 · SCION LC6000 柱温箱 ·具有超高 灵 敏度的SC I ON LC6000 二极管阵列检测器 液相色谱条件 表1.方法 参数 色谱柱： SCION ODS-AQ C18 5umX 4.6IDX250mm 流动相： 磷酸盐缓冲液(PH5.2)： 乙腈(90： 10V/V) 磷酸盐缓冲液：10mM四丁基氢氧化铵10mM磷酸二氢钾 流速： 0.8 ml/min 柱温： 40°℃ 检测波长： 260nm (DAD) 进样量： 10pL 结果 所有目标化合物均具有良好的现性；R2值在0.996以 上 。在分析中，由于洗脱液中维生素的不稳定性，为 了保证良好 的 线性，维生素C、异抗坏血酸和维生素 B 12必须现用 现 配。图 1显示了维生素B，的线性，该线 性代表了上述 三 种目标化合物之外的所有目标化合物 (R2为0.996)。 表2列出了每种目标化合物以及图2的相应峰数。图 2显 示 了5mg/L分析标准品的色谱图 。图2突出显 示了 每 种 目 标维生素的出色分离度和峰形。 表2.峰 标 识 峰 维生素 1 B1 2 B6 3 烟酰胺 4 B12 5 抗坏血酸葡糖苷 6 C 异抗坏血酸 8 Bz 9 烟酸 图2.5mg/L标准样品图谱 图3显示了分析富含维生素的饮料样品时获得的色谱 图。此外，图 4突出显 示 了 Compass CDS 软件将目 标分析物的吸收光谱与分析标准品的光谱进行比较的 能力，从而提高 了 结果可信度。 图3.富含维生素饮料的色谱图 图4.标准样品和样品测试结果光谱图对比 图5显示 了 营养补品样品的色谱图，而图6详细显示 了维生素C与分析标准品 的 吸收光谱比较。营养补品 比富含维生素的健康饮料多一种维生素，即维生素C。两个样品中均含有维生素B和烟酰胺。通过吸光度 光谱的比较证实，鉴定出的目标化 合 物具有与该化 合 物的相应标准品完全相同的吸光度，因此结果准确可 信。 图5.营养补品样品的色谱图 结论 本文使用带有 二 极管阵列检测器和反相C18色谱柱的 SCION HPLC-6000系统可以轻松同时鉴定 出 9种水溶 性维生素，方法简便、快速。由于维生素C和 异 抗坏血 酸的不稳定特性，样品制备 是 此应用过程中必须考虑 的关键因素。即使对于不稳定的维生素，SCION LC6000 也观察到了极好的线性。同时 Compass CDS 软件可轻松比较吸收光谱，结果准确可信。 天美集团总部 香港九龙葵涌 青 山道552-566号美达中心6楼 t 00852-27519488e techcomp@techcomp.com.hk 北京分公司 北京市朝阳区红军营南路天畅园7号楼1、3层(100107)t 010-64010651 e TIL _CH@techcomp.cn 天美仪拓实验室设备(上海)有限公司 上海市松江新桥民益路201号16幢 (201612)t 021-67687200e TIL _CH@techcomp.cn 广州分公司 广州市天河区体育西路109号高盛大厦16C(510620)t 020-38899384 e TIL _CH@techcomp.cn 上海分公司 上海市徐汇区桂 平 路333号5号楼6楼(200233)t 021-64870138e TI L _CH@techcomp.cn 400-810-7898 www.techcomp.cn www.techcomp.com.hk Techcomp 天美仪拓实验室设备(上海)有限公司 Techcomp Instrument Ltd.