隔膜泵在饮料中微生物的检验（滤膜前处理法）中的作用

隔膜泵在饮料中微生物的检验（滤膜前处理法）中的作用（根据中国饮料工业协会发布的团体标准T/CBIA005-2019 ）一、原理滤膜是一种微孔薄膜，当一定量的样液通过滤膜时，细菌、霉菌和酵母菌等微生物被截留在滤膜上。然后将滤膜贴于相应的培养基上培养，计数滤膜上生长的菌落数斌进行相应确认试验，即可相应测得该样品的菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌等微生物数量。二、使用仪器1. 无菌滤膜 微孔滤膜，直径47mm/50mm，孔径为0.45um2. 过滤装置3. 真空泵或隔膜泵4. 抽滤瓶5. 拍击式均质器及均质袋6. 电子天平7. 无菌平头镊子  无菌吸管 1ml、10ml或其他可精确刻度的无菌量器及吸头8. 无菌瓶 500ml、无菌培养皿 直径50~90mm9. 恒温培养箱：36±1℃，28±1℃10. 恒温水浴箱：46±1℃三、分析步骤1. 样品制备 （1）液体样品混匀备用           （2）饮料浓浆和固体饮料样品 取25ml样品置盛有225ml无菌磷酸盐缓冲   液或无菌生理盐水的无菌均质袋中，用WIGGENS HG400 pro拍打式均质器拍打1~2min，制成1:10的样品匀液。           （3）根据对样品污染状况的估计，选择1~3个适宜稀释度的样品匀液抽滤检验，每份样品的过滤量不少于10ml。2.过滤 （1）用WIGGENS BioVac630B 多联抽滤套装，用无菌平头镊子夹取无菌滤膜边缘部分，正面向上，贴放在已灭菌的滤床上，放入无菌滤杯并固定。       （2）无菌吸取不少于10ml待测样液至滤杯内，进行抽滤，当样液全部抽滤后，使用不少于15ml无菌稀释液至滤杯。抽滤后取下滤杯，用无菌平头镊子移取滤膜。       （3）将滤膜截留微生物面向上贴于相应的培养基平板上，平铺并避免在滤膜和培养基之间产生气泡。       （4）使用的无菌稀释液进行空白对照实验。3.验证 （1）菌落总数参照GB4789.2-2016执行       （2）大肠菌群参照GB4789.3-2016执行       （3）霉菌和酵母参照GB4789.15执行四、计算方法1.若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计算范围内时，按照GB4789.2-2016中7.1.2执行2.平板上的数值乘以相应稀释倍数，作为每毫升样品中菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母的计算结果。3.菌落总数和大肠菌群应选取菌落数在100CFU以内无蔓延菌落生长的平板计数；霉菌和酵母应选取菌落数在50CFU以内无蔓延的WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器4.当滤膜上有较大片状菌落生长时，则此平板结果不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板记录菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表一个平板菌落数；细菌大于100CFU的可记录为多不可计，霉菌和酵母菌大于50CFU的可记录为多不可计。5.当滤膜上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。隔膜泵在饮料中微生物的检验(滤膜前处理法)中的作用 (根据中国饮料工业协会发布的团体标准 T/CBIA005-2019) 一、原理 滤膜是一种微孔薄膜，当一定量的样液通过滤膜时，细菌、霉菌和酵母菌等微生物被截留在滤膜上。然后将滤膜贴于相应的培养基上培养，计数滤膜上生长的菌落数斌进行相应确认试验，即可相应测得该样品的菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌等微生物数量。 二、使用仪器 1.无菌滤膜微孔滤膜，直径47mm/50mm， 孔径为 0.45um 2.过滤装置 3.真空泵或隔膜泵 4.抽滤瓶 5.拍击式均质器及均质袋 6.电子天平 7.无菌平头镊子无菌吸管 1ml、10ml或其他可精确刻度的无菌量器及吸头 8.无菌瓶500ml、无菌培养皿 直径50~90mm 9.恒温培养箱：36±1℃，28±1℃ 10.恒温水浴箱：46±1℃ WIGGENS HG400 pro 拍打式均质器 WIGGENS WH-21C 低温生化培养箱 WIGGENS WA20 通用水浴槽 WIGGENS C410 防腐蚀隔膜真空泵 WIGGENS BioVac630B 多联抽滤套装 WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器 三、分析步骤 1.样品制备(1)液体样品混匀备用 (2)饮料浓浆和固体饮料样品取25ml样品置盛有 225ml 无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质袋中，用 WIGGENS HG400 pro 拍打式均质器拍打1~2min， 制成 1：10 的样品匀液。 (3)根据对样品污染状况的估计，选择1~3个适宜稀释度的样品匀液抽滤检验，每份样品的过滤量不少于10ml。 2.过滤 (1)用 WIGGENS BioVac630B 多联抽滤套装，用无菌平头镊子夹取无菌滤膜边缘部分，正面向上，贴放在已灭菌的滤床上，放入无菌滤杯并固定。 (2)无菌吸取不少于10ml 待测样液至滤杯内，进行抽滤，当样液全部抽滤后，使用不少于 15ml 无菌稀释液至滤杯。抽滤后取下滤杯，用无菌平头镊子移取滤膜。 (3)将滤膜截留微生物面向上贴于相应的培养基平板上，平铺并避免在滤膜和培养基之间产生气泡。 (4)使用的无菌稀释液进行空白对照实验。 3.验证((1)菌落总数参照 GB4789.2-2016执行 (2)大肠菌群参照 GB4789.3-2016执行 (3)霉菌和酵母参照 GB4789.15执行 四、计算方法 1.若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计算范围内时，按照 GB4789.2-2016中7.1.2执行 2.平板上的数值乘以相应稀释倍数，作为每毫升样品中菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母的计算结果。 3.菌落总数和大肠菌群应选取菌落数在 100CFU 以内无蔓延菌落生长的平板计数；霉菌和酵母应选取菌落数在 50CFU 以内无蔓延的 WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器4.当滤膜上有较大片状菌落生长时，则此平板结果不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板记录菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表一个平板菌落数；细菌大于100CFU 的可记录为多不可计，霉菌和酵母菌大于 50CFU 的可记录为多不可计。 5.当滤膜上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。