茯苓中禁用农药检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-694Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-228 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GC-MS/MS 法测定中药材茯苓中35个农药残留物含量 GCMSMS-228 摘要：本文参考2020版《中国药典》公示稿2341农药残留量测定法第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》，建立了 GCMSMS 法测定茯苓中35个农药残留物的方法。在5~100 ug/L(以甲胺磷计)浓度范围内建立内标基质标准曲线，线性关系良好，相关系数均大于0.995。STD3(限量值浓度)的茯苓基质标连续分析6次，35个禁用农药残留物的峰面积 RSD 均在10.88%以内。该方法适用于2020版《中国药典》公示稿规定的药材及饮片((植物类)中35个禁用农药残留物的准确定量测定。 关键词：：气相色谱-三重四极杆质谱联用仪禁用农药茯苓 本文采用岛津 GCMS-TQ8050 NX 三重四及杆气质于《中国药典》2020年版四部通则0212药材和饮片 联用仪，参照《2341农药残留量测定法》征求意见稿检定通则、2341农药残留量测定法第五法修订草案的 中第五法的仪器参数、35个农药残留物的推荐离子对公示。其中最大的变化是规定了33种禁用农药不得检 和色谱条件、并依照第五法的样品前处理方式，建立了出，并新增了“第五法药材及饮片(植物类)中禁用 中药材中35个农药残留物测定的方法。该方法灵敏度农药多残留测定法””。此修订案一经公示即刻引起了 高，重复性好，完全满足2020版《中国药典》公示稿行业内的广泛关注。 对药材及饮片(植物类)中禁用农药限量值的要求。 实验部分 1.1仪器 岛津三重四极杆气质联用仪 GCMS-TQ8050 NX 1.2分析条件 载气控制方式：恒压 初始载气流量：2.43 mL/min 离子源温度：250℃ 进样口温度：250℃ 接口温度：250℃ 进样方式：不分流 检测器电压：调谐电压+0.7 kV 进样量：1pL 采集模式：MRM，参数见表1 样品的前处理 结果与讨论 3.1标准溶液色谱图 35个农药残留物和磷酸三苯酯(内标)的 MRM 色谱图如图2所示，各组分出峰时间及 MRM 参数见表1。各组分质量色谱图见图3. 图2 35个农药残留物及磷酸三苯酯(内标)混合标准溶液 MRM 色谱图 ((30-75pg/L) No 组分名称 英文名 保留时间 离子对 CE (碰撞能) 1 内吸磷-O Demeton-O 12.058 88.00>60.00 4 88.00>59.00 20 2 灭线磷 Ethoprophos 13.034 199.70>157.80 5 157.80>96.70 20 3 杀虫脒 Chlordimeform 13.761 152.00>117.00 15 196.00>181.00 5 4 治螟磷 Sulfotep 14.478 322.00>174.00 15 322.00>294.00 10 5 甲拌磷 Phorate 14.734 260.00>75.00 5 230.80>175.00 10 6 a-六六六 a-BHC 15.436 181.00>145.00 15 218.70>182.90 5 7 特丁硫磷 Terbufos 16.397 230.80>129.00 25 230.80>175.00 13 8 内吸磷-S Demeton-S 16.561 88.00>60.00 4 88.00>59.00 20 9 v-六六六 V-BHC 18.143 181.00>145.00 15 218.70>182.90 5 10 久效磷 Monocrotophos 18.571 127.00>109.00 12 127.00>95.00 16 11 氟甲腈 Fipronil desulfinyl 19.837 388.00>333.00 20 388.00>281.00 35 12 B-六六六 B-BHC 20.115 181.00>145.00 15 218.70>182.90 5 33 4，4'-滴滴涕 4，4’-DDT 41.072 235.00>165.00 25 235.00>199.00 18 34 硫丹硫酸酯 Endosulfan sulfate 42.900 271.80>236.70 15 273.80>238.90 15 (IS) 44.800 48.519 35 磷酸三苯酯 Triphenyl phosphate 326.00>233.00 10 326.00>215.00 25 36 蝇毒磷 Coumaphos 361.80>109.00 16 361.80>81.00 32 图3标准品MRM色谱图(部分组分， STD1， 2~5 ug/L) 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6mL，加入混合对照品溶液，配成浓度分别为5、10、25、50、75、100 ug/L(以甲胺磷计，分别对应代号 STD1-6)的标准溶液，取1mL标样加入0.3 mL磷酸三苯酯内标，涡旋混匀，取1uL进样。以各目标物浓度比为横坐标，目标物峰面积比为纵坐标，以内标法绘制标准曲线，所得校准曲线线性关系良好，线性相关系数大于0.995。曲线结果如下图4所示。线性方程及相关系数见表3。 图4部分农药校准曲线 表3校准曲线相关系数 No. 组分名称 相关系数r 浓度范围 (ug/mL) No. 组分名称 相关系数r 浓度范围 (ug/mL) 1 内吸磷-0 0.9998 0.002~0.04 19 对硫磷 0.9997 0.002~0.04 2 灭线磷 0.99995 0.002~0.04 20 p，p'-三氯杀螨醇 0.99992 0.005~0.1 3 杀虫脒 0.99995 0.002~0.04 21 甲基异柳磷 0.9996 0.002~0.04 4 治螟磷 0.99994 0.002~0.04 22 水胺硫磷 0.9996 0.005~0.1 5 甲拌磷 0.9997 0.002~0.04 23 a-硫丹 0.9998 0.005~0.1 6 a-六六六 0.99994 0.005~0.1 24 氟虫腈砜 0.9998 0.002~0.04 7 特丁硫磷 0.9998 0.002~0.04 25 狄氏剂 0.9998 0.005~0.1 8 内吸磷-S 0.9995 0.002~0.04 26 4，4'-滴滴伊 0.9998 0.005~0.1 9 y-六六六 0.99991 0.005~0.1 27 苯线磷 0.9997 0.002~0.04 10 久效磷 0.9998 0.003~0.06 28 甲基硫环磷 0.9998 0.003~0.06 11 氟甲腈 0.9995 0.002~0.04 29 除草醚 0.99993 0.005~0.1 12 β-六六六 0.99996 0.005~0.1 30 2，4'-滴滴涕 0.9993 0.005~0.1 13 8-六六六 0.99997 0.005~0.1 31 4，4'-滴滴滴 0.9998 0.005~0.1 14 艾氏剂 0.9995 0.005~0.1 32 β-硫丹 0.99998 0.005~0.1 15 甲基对硫磷 0.9992 0.002~0.04 33 4，4'-滴滴涕 0.9995 0.005~0.1 16 o，p'-三氯杀螨醇 0.9997 0.005~0.1 34 硫丹硫酸酯 0.9997 0.005~0.1 17 氟虫腈亚砜 0.9993 0.002~0.04 35 蝇毒磷 0.99993 0.005~0.1 18 氟虫腈 0.99990 0.002~0.04 3.3重复性考察 配制低、中、高三个浓度标准溶液，连续进样6次，考察分析方法保留时间和峰面积的重复性。结果表明：35个农药残留物保留时间的 RSD%均小于0.07%和峰面积的RSD% 均小于8.71%，方法重复性良好，仪器精密度良好。结果见表 4。 表 4重复性测试(n=6) RSD% RSD% RSD% No. 组分名称 (STD1， 2-5 ug/L) (STD3， 10~25 ug/L) (STD4， 20~50 ug/L) R.T. Area R.T. Area R.T. Area 1 内吸磷-O 0.01 2.12 0.01 1.74 0.03 3.54 2 灭线磷 0.02 6.03 0.01 2.22 0.03 3.05 3 杀虫脒 0.01 1.65 0.01 2.52 0.03 2.10 4 治螟磷 0.03 4.42 0.02 4.46 0.03 2.78 5 甲拌磷 0.05 2.53 0.01 3.01 0.02 3.82 6 α-六六六 0.01 1.82 0.01 1.76 0.02 2.14 7 特丁硫磷 0.01 7.43 0.01 2.43 0.02 2.08 8 内吸磷-S 0.03 5.62 0.01 4.27 0.02 4.49 9 v-六六六 0.01 2.43 0.01 2.04 0.02 2.28 10 久效磷 0.07 8.71 0.03 2.13 0.02 7.06 11 氟甲腈 0.02 3.78 0.02 3.42 0.03 3.55 12 β-六六六 0.01 1.53 0.01 2.12 0.02 2.22 13 8-六六六 0.01 4.92 0.01 1.49 0.02 2.82 14 艾氏剂 0.02 4.70 0.01 2.19 0.02 2.54 15 甲基对硫磷 0.02 7.13 0.01 8.62 0.03 1.38 16 o，p'-三氯杀螨醇 0.01 4.77 0.01 2.01 0.02 3.27 17 氟虫腈亚砜 0.03 4.26 0.01 3.25 0.02 3.01 18 氟虫腈 0.03 8.54 0.02 5.75 0.02 3.09 19 对硫磷 0.05 6.36 0.03 6.55 0.04 3.20 20 p，p'-三氯杀螨醇 0.01 4.58 0.01 2.52 0.02 5.41 21 甲基异柳磷 0.01 4.81 0.01 5.59 0.02 3.28 22 水胺硫磷 0.01 7.65 0.01 8.85 0.02 4.84 23 a-硫丹 0.02 7.37 0.01 4.42 0.02 3.47 24 氟虫腈砜 0.01 5.64 0.01 1.78 0.02 2.69 25 狄氏剂 0.02 2.49 0.02 3.77 0.02 2.58 26 4，4'-滴滴伊 0.01 2.56 0.01 3.92 0.02 2.16 27 苯线磷 0.02 1.99 0.02 6.34 0.03 6.04 28 甲基硫环磷 0.01 7.66 0.01 2.26 0.02 2.81 29 除草醚 0.02 2.99 0.01 4.52 0.02 3.64 30 2，4'-滴滴涕 0.01 1.11 0.01 2.71 0.02 2.31 31 4，4'-滴滴滴 0.01 2.78 0.01 3.28 0.02 2.77 32 β-硫丹 0.03 2.70 0.02 3.20 0.02 1.71 33 4，4'-滴滴涕 0.01 4.52 0.01 2.70 0.02 0.97 34 硫丹硫酸酯 0.01 3.70 0.01 2.44 0.01 2.52 35 蝇毒磷 0.01 2.96 0.01 4.68 0.01 1.36 3.4加标回收实验 取茯苓样品，按照第2章步骤制备样品和加标样品，三个水平加标浓度如下表5所示，各样品平行测定6次。测试结果显示：通过两步提取，各水平的加标回收率在71.51~97.13%之间，相对标准偏差 RSD%在0.27~12.01%之间。 表5基质加标实验结果 No. 加标，n=6 加标，n=6 加标)，n=6 组分名称 (STD1， 2-5 ug/L) (STD3， 10~25 pg/L) (STD4， 20~50 ug/L) 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 内吸磷-O 71.70 2.05 73.88 1.33 79.78 3.57 2 灭线磷 75.14 2.27 76.30 1.48 81.11 2.67 杀虫脒 75.22 2.18 83.79 1.51 87.46 1.22 4 治螟磷 79.42 8.42 74.02 4.06 76.47 2.25 甲拌磷 75.21 3.05 79.06 2.49 79.99 3.71 6 a-六六六 82.85 0.27 86.28 1.41 88.41 1.63 ( 特丁硫磷 84.56 3.00 77.16 1.68 81.74 1.38 内吸磷-S 78.11 6.32 77.92 3.31 78.97 6.26 9 y-六六六 83.70 1.16 86.21 0.90 88.98 1.67 10 久效磷 80.62 12.01 75.31 5.70 80.54 8.06 11 氟甲腈 74.27 5.32 79.07 2.65 83.53 3.47 12 β-六六六 79.03 3.57 85.93 1.91 89.15 2.03 13 8-六六六 74.48 5.01 76.76 0.98 75.17 3.10 14 艾氏剂 81.46 6.37 85.86 1.62 89.25 2.80 15 甲基对硫磷 93.04 4.69 84.51 6.04 86.57 2.86 16 o，p'-三氯杀螨醇 76.04 2.37 81.77 3.30 86.76 3.62 17 氟虫腈亚砜 74.88 3.96 78.79 2.40 83.91 1.06 18 氟虫腈 79.09 7.53 79.48 2.35 82.37 3.88 19 对硫磷 75.12 9.51 93.06 3.50 97.13 2.29 20 p，p'-三氯杀螨醇 80.05 3.36 83.59 1.89 86.87 5.17 21 甲基异柳磷 79.46 2.77 77.98 1.79 80.00 2.51 22 水胺硫磷 82.98 3.22 81.09 3.60 79.39 6.19 23 a-硫丹 78.43 6.21 86.78 4.02 87.69 1.51 24 氟虫腈砜 81.30 1.78 81.84 2.45 86.93 2.19 25 狄氏剂 85.26 4.17 90.74 1.47 92.07 2.61 26 4，4'-滴滴伊 81.45 2.13 88.65 2.58 89.14 2.02 27 苯线磷 76.77 6.78 92.59 2.27 85.01 3.85 28 甲基硫环磷 82.34 7.23 79.00 2.75 78.32 7.73 29 除草醚 89.89 4.73 83.89 4.36 87.31 2.48 30 2，4'-滴滴涕 83.36 2.51 87.60 1.81 91.24 4.09 31 4，4'-滴滴滴 79.49 2.41 86.41 2.77 89.72 3.97 32 β-硫丹 82.40 2.85 86.60 2.75 90.87 2.29 33 4，4'-滴滴涕 85.93 2.02 89.26 1.29 90.56 1.26 34 硫丹硫酸酯 83.32 3.36 86.97 1.92 86.32 1.63 35 蝇毒磷 71.51 3.60 74.26 3.20 77.99 1.93 3.5样品测试 取茯苓样品，按照第2章步骤制备样品，上机检测，如图5所示，样品中未检测出农药残留物。 图5茯苓样品 MRM 谱图 结论 本文利用岛津 GCMS-TQ8050 NX， 建立一种简便、快速、准确的药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留的分析方法。该方法采用内标法定量，在5-100 ug/L(以甲胺磷计)的范围内，各组分线性相关系数均在0.995以上，线性良好。对高、中、低水平的标准溶液重复进样6针，保留时间和峰面积均表现出了良好的重复性。加标回收实验中，各物质回收率在71.51~97.13%之间，平行样品的峰面积 RSD%值在0.27~12.01%之间，回收率及精密度良好。该方法操作简捷，为药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留的检测提供很好的参考。 岛津应用云 本文利用岛津GCMS-TQ8050 NX，建立一种简便、快速、准确的药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留的分析方法。该方法采用内标法定量，在5-100 μg/L（以甲胺磷计）的范围内，各组分线性相关系数均在0.995以上，线性良好。对高、中、低水平的标准溶液重复进样6针，保留时间和峰面积均表现出了良好的重复性。加标回收实验中，各物质回收率在71.51 ~ 97.13%之间，平行样品的峰面积RSD%值在0.27~ 12.01%之间，回收率及精密度良好。该方法操作简捷，为药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留的检测提供很好的参考。