COVID-19中逆转录实时聚合酶链反应检测方案(分子荧光光谱)

EDINBURGHINSTRUMENTSA Techcomp Company COVID-19 疾病检测一在大流行期间利用荧光检测 由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)带来的急性呼吸综合征导致了COVID-19的爆发，让全世界正在遭受巨大的损失和严重的苦难，相关的研究人员们也致力于提供可准准，快速，灵敏以及应用范围广，特别是因为症状差异大，甚至可能几天都不出现症状的测试手段。为此，许多的方法被设计和测试以用于该疾病的诊断，其中一种美国FDA 批准的测试试剂盒就利用了基于荧光的逆转录实时聚合酶链反应 (rRT-PCR)技术。rRT-PCR测试的工作原理是通过结合的荧光探针从 SARS-CoV-2病毒中检测出复制的核酸拷贝，该探针在引物复制后从其淬灭剂释放出(图1)。 图1应用结合荧光和淬灭分子对作为特定类型 cDNA 探针产生 rRT-PCR荧光过程图。 一旦从个体的呼吸系统中获取了合适的标本，就将 RNA分离并反转录为互补 DNA (cDNA)， 然后通过几套SARS-CoV-2 引物和探测目标进行 PCR 反应，以扩增 cDNA 拷贝数。吸附在探针检测套上的是一对分子，它们作为荧光发射剂和暗猝灭剂(非发射性)串联在一起；5(6)-羧基荧光素 (FAM)作为发射体，黑洞猝灭剂-1(BHQ1)作为黑暗淬灭剂(图2)。当PCR循环达到延伸阶段时， Taq 聚合酶引物核酸酶在5'端的活性会破坏探针中 BHQ-1的FAM， 然后根据每个循环测量其荧光，从而增加强度以进行阳性诊断。 图 2 FAM发射光谱与BHQ-1吸收光谱及其相关结构重叠。 数据来自 BioSeach Technologies 和 AAT Bioquest。.分子结构来自 Sigma Aldrich (FAM) 和 ATDBio， Ltd. (BHQ-1)。 尽管近年来RT-PCR测试试剂盒和分子探针的使用越来越广泛，但是这些分子却花了很多精力和时间来合成和优化其光物理性质。此外，开发更明亮，发射更清晰，有针对性的特异性或光谱吸收更广泛的新分子将对更多的病毒和疾病的检测有更好的作用。当使用 488 nm 氩离子激光器并在某些溶剂和缓冲液中激发时， FAM 具有相对较高的量子产率，但是，对于大多数其他普通激光器或紧凑型激光二极管或在酸性介质中， FAM效果不佳。此外，在520nm 附近的发射峰值对于超灵敏检测器而言不是最佳的，因为光电二极管峰值在800-900 nm左右靠近近红外区(NIR)，光电倍增管(PMT) 靠近紫外峰值(UV)约为400nm。这就要求化学家和生物学家继续开发新一代的荧光和淬灭探针，尤其是那些需要检测较少的 PCR 循环以进行更快筛选的探针。 COVID-19测试仪器 爱丁堡仪器实时双光束紫外/可见分光光度计 DS5 爱丁堡仪器公司提供了灵敏的荧光，磷光和发光光谱系统，以更好地帮助研究人员研究新的分子探针设计。同时还拥有一款新的紫外可见分光光度计系列，可以准确，快速地测量分子的吸收光谱。 爱丁堡一体化稳态瞬态荧光光谱仪FS5 FS5 荧光分光光度计是完全集成的专用荧光光谱仪。FS5 适用于分析和研究实验室，可以处理常规速度的分析和苛刻研究测试条件所需的敏感性。全面的 FluoracleR软件可实现强大的实用性，其设计理念可实现最大的灵活性，在一台仪器中具有多种测量模式。 我们的仪器主要服务于材料科学，还用于生物物理学和某些生命科学领域。 与我们联系 如果您正在研究 COVID-19，并且想了解有关我的的仪器如何为您提供帮助的更多信息，请与我们的科学家和销售代表团队联系以获取更多信息、技术细节或系统规格-我们随时准备就绪，满足您所有的分子光谱需求。 从我们的家人到您的家人，在此期间，我们祝大家健康和安全，并希望很快能再次与大家见面。       由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）带来的急性呼吸综合征导致了COVID-19的爆发，让全世界正在遭受巨大的损失和严重的苦难，相关的研究人员们也致力于提供可准确，快速，灵敏以及应用范围广，特别是因为症状差异大，甚至可能几天都不出现症状的测试手段。为此，许多的方法被设计和测试以用于该疾病的诊断，其中一种美国FDA批准的测试试剂盒就利用了基于荧光的逆转录实时聚合酶链反应（rRT-PCR）技术。rRT-PCR测试的工作原理是通过结合的荧光探针从SARS-CoV-2病毒中检测出复制的核酸拷贝，该探针在引物复制后从其淬灭剂释放出。      一旦从个体的呼吸系统中获取了合适的标本，就将RNA分离并反转录为互补DNA（cDNA），然后通过几套SARS-CoV-2引物和探测目标进行PCR反应，以扩增cDNA拷贝数。吸附在探针检测套上的是一对分子，它们作为荧光发射剂和暗猝灭剂（非发射性）串联在一起； 5（6）-羧基荧光素（FAM）作为发射体，黑洞猝灭剂– 1（BHQ1）作为黑暗淬灭剂（图2）。当PCR循环达到延伸阶段时，Taq聚合酶引物核酸酶在5'端的活性会破坏探针中BHQ-1的FAM，然后根据每个循环测量其荧光，从而增加强度以进行阳性诊断。