牛奶中氯霉素检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RKFT-F003 解决方案 牛奶中氯霉素的检测 高效液相色谱/串联质谱；全自动固相萃取；氯霉素；牛奶 介绍 氯霉素是第一个可以人工合成的抗生素，常用于家禽疾病的预防和治疗。由于氯霉素对人体有严重的毒副作用，而动物源性食品中的氯霉素残留会通过肉、蛋、奶等食物传递给人类。目前美国、日本、韩国和欧盟等国家和地区均已禁止在食用性动物中使用氯霉素，并规定在动物源性食品中不得检出。本实验参考《GB 29688-2013食品安全国家标准牛奶中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》采用睿科Fotector Plus全自动固相萃取仪进行净化，睿科Auto EVA 80全自动平行浓缩仪进行浓缩，高效液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。在添加浓度为0.1~5.0 Hg/kg范围内，回收率为78%~89%，相对标准偏差小于10%，准确度和精密度均符合残留分析要求，可以满足牛奶中氯霉素残留量的检测需要。 1.仪器与耗材 仪器和耗材 睿科 Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 睿科 MPE真空平行浓缩仪 睿科 Auto EVA 80全自动平行浓缩仪 液相色谱-质谱联用仪：安捷伦Aglent1260+Agilent 6410 Cg固相萃取小柱(RayCure， 500mg/6ml，货号： RC-204-16004) 试剂 甲醇(色谱纯)，乙酸乙酯(色谱纯)，氯化钠(分析纯)，超纯水 4%氯化钠溶液：取4g氯化钠，用超纯水溶解并定容至100mL 2.样品制备及前处理 2.1提取 称取10g(±0.05)牛奶试样于 50mL 离心管中，加入氯代氯霉素内标工作液，再加入20mL乙酸乙酯，涡旋震荡 15min， 6000r/min离心10min， 取乙酸乙酯层于浓缩杯中。再用 20mL乙酸乙酯提取一次，合并2次提取液，用睿科 MPE 高通量真空平行浓缩仪于45℃条件下浓缩至干。加入4%氯化钠溶液5mL，涡旋复溶，再加入 5mL 正己烷，震荡混合1min， 静置分层，弃去正己烷层。再加入5ml正己烷重复除脂，取下层清夜至上样管中，待净化。 2.2固相萃取净化条件 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Fotector Plus 固相萃取柱 C18 柱(RayCure， 500mg/6ml) 活化 甲醇，超纯水 洗脱 甲醇 2.3固相萃取净化 Cis固相萃取小柱先用 5mL 甲醇和5mL水活化，然后以 1mL/min 的速度上样，用2mL超纯水清洗样品瓶，一并过柱，接着用 5mL 超纯水淋洗柱子。将柱子推干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。用睿科 EVA 80全自动平行浓缩仪在50℃条件下浓缩至干，用1mL 30%甲醇水溶液定容，涡旋混匀，过滤膜上机检测。具体方法如下图-1所示。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间mir 1 青洗样品通道 甲醇 1.5 2 舌化 甲醇 有机废液 3 5 2.1 3 舌化 水 废水 3 5 2.1 4 上样 废水 2 5 3.1 5 青洗样品瓶 水 废水 60 2 1.7 6 林洗 水 废水 3 5 2.1 7 气推 废水 80 30 2.2 8 青洗注射泵 甲醇 60 3 0.4 9 洗脱 甲醇 收集 2 5 2.9 10 气推 收集 2 2 1.4 11 气推 收集 20 10 1.3 12 结束 图-1 Fotector Plus 氯霉素固相萃取净化方法 3.检测条件 3.1色谱柱条件 柱子 Waters XBridge BEH HILIC 2.5um×21 mmx50mm 流速 0.200 mL/min 流动相 A：水 B：甲醇 柱温 30°C 进样体积 10 pL 检测器 Agilent 6410 离子模式 ESI 吹扫气 11L/min 氮气温度 350°C 簇电压 4000 雾化压力 35 psi 梯度洗脱 0-1.5 min， 5%流动相 B； 2 min-3.5 70% 流动相B， 5.0-6.05%流动相 B 3.2 MRM参数 名称 分子量MW 子离子m/z 母离子m/z 碎裂电压/V 碰撞电压/eV 驻留时可/ms 氯霉素 323 257.1 321.1 120 20 40 152.0* 120 30 40 氯霉素-D5 328 157.1 326.1 130 15 30 3.3标准品质谱图 图-2.氯霉素质谱图(5ug/L) 4.方法可行性验证 在10g空白牛奶样品中分别添加0.1、1.0和5.0Hg/kg 氯霉素标液，按照上述方法进行前处理，回收率及精密度见表-2。从表中可以看出，3个加标浓度的回收率在78%-89%之间，相对标准偏差小于10%，符合痕量残留检测的要求。 表-2牛奶加标回收率及 RSD 值(n=3) 名称 添加浓度/ug.kg 平均回收率/% RSD/% 氯霉素 0.1 78.30 5.6 1.0 85.18 4.3 5.0 88.34 3.2 5.总结 睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取仪采用全自动操作，可以排除人员操作带来的误差，从活化化上样、洗脱一步到位，六通道同时进行；同时 Fotector Plus 能够实现高通量处理，最多一天能够处理180个样品，省时省力，真正为批量检测提供帮助。 睿科 MPE真空平行浓缩仪适合于大体积提取液的批量浓缩，浓缩效率是单台旋蒸的10倍以上。独特的尾管设计方便用户观察剩余体积和定容。 睿科EVA 80 全自动平行浓缩仪通过独特的氮吹针自动追随液面技术可以极大地减少氮气使用量，同 热线：400-885-1816 时避免手动氮吹需要经常去调节氮吹针高度带来的麻烦。 真空平行浓缩仪浓缩 全自动固相萃取仪净化 全自动平行浓缩仪浓缩 RayKol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.，Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2021年10月版 网址：www.raykol.com邮箱： info@raykol.com热线： 邮箱： info@raykol.com热线：址：：Vwww.raykol.com GB 29688-2013 食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶中氯霉素残留量的检测。