蜂蜜和蜂王浆中6 种青霉素类药物的残留检测方案(液相色谱仪)

采用三重四极杆液质联用系统测定蜂蜜和蜂王浆中6种青霉素类药物的残留 作者 前言 ( 薛晓锋 ) 万正瑞，吴翠玲，安娟，杜伟，薛彬 青霉素，又名盘尼西林，是一种广谱抗生素。长期食用含有过量青霉素的蜂蜜、王浆，会危害人体健康。青霉素类药物稳定性差，标准方法多，采用固相萃取方法对食品基质中的青霉素类药物进行富集和净化，方法较为繁琐，操作耗时长。因此，本研究开发出一种快速检测蜂蜜和蜂王浆中青霉素类药物残留的检测方法。该方法采用 Agilent Bond Elut QuEChERS dSPE EMR-Lipid 除去蜂王浆基质中的脂肪等杂质，蜂蜜基质利用乙腈直接提取，并结合高灵敏度 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统，适用于检测蜂蜜和蜂王浆基质中的青霉素G、青霉素V、氨苄西林、苯唑西林、哌拉西林和邻氯青霉素残留。 标样的配制：青霉素G、青霉素V、氨苄西林、氨苄西林-d5、苯唑西林、哌拉西林和邻氯青霉素标准品用乙腈-水(1：3，V/V)，配制成 1.0 mg/mL的母液，于冰箱-20°℃保存。 标准曲线的配制：取配制成 1.0 mg/mL 的混合标样母液，以乙腈-水 (1：3， V/V)为溶剂，稀释为 100 ng/mL标准溶液，再逐级稀释为50、25、10、5.0和1.0 ng/mL5个浓度点。 加标溶液的配制：取配制成 1.0 mg/mL 的混合标样母液，以乙腈-水(1：3， V/V)为溶剂，稀释为1.0 pg/mL标准溶液，加入蜂蜜和蜂王浆基质中，使其添加浓度为5、20和200 pg/kg。 蜂蜜和蜂王浆基质中青霉素类药物的前处理流程和分析条件，如图1-2、表1-3所示。 图1.蜂蜜中青霉素类药物的前处理流程 图2.蜂王浆中青霉素类药物的前处理流程 表1.色谱条件 色谱柱 Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 3.0×100 mm， 1.8 pm(部件号959758-302) 柱温 40°C 进样量 2pL 流动相A 0.1%甲酸水溶液 流动相B 乙腈 流速 0.4 mL/min 梯度条件 0-1 min，2% B；1-5 min，2%-90%B； 5-7 min， 90%B；后运行 2 min 扫描模式 正离子模式 干燥气温度 350C 干燥气流速 10L/min 雾化器压力 45 psi 鞘气温度 350°C 鞘气流速 10 L/min 毛细管电压 4000V(+) 表3.质谱监测的离子对参数 化合物名称 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 碎裂电压(V) 碰撞电压(V) 氨苄西林-d5 355.1 111 110 12 氨苄西林 350.1 106 110 12 氨苄西林 350.1 160 110 6 邻氯青霉素 436.0 160 110 15 邻氯青霉素 436.0 277 110 2 苯唑西林 402.1 243 100 8 苯唑西林 402.1 160 100 11 青霉素G 335.1 176 90 6 青霉素G 335.1 160 90 4 青霉素Ⅴ 351.1 160 90 4 青霉素V 351.1 114 90 32 哌拉西林 518.2 160 140 15 哌拉西林 518.2 143 140 25 图4.蜂蜜基质加标样品(200 pg/kg) 的 MRM谱图 图5.蜂王浆基质加标样品(200 pg/ kg) 的 MRM 谱图 表4.6种青霉素的线性方程 分析物 线性方程 相关系数R² 氨苄西林 Y=677.0354X-400.5226 0.994 哌拉西林 Y=166.9804X-219.1022 0.997 青霉素G Y=283.0328X-238.5378 0.993 青霉素V Y=151.5897X-150.7411 0.991 苯唑西林 Y=237.8381X-195.8661 0.994 邻氯青霉素 Y=199.2543X-60.9733 0.996 如图3-5，分别为50ug/L 青霉素标品和青霉素在蜂蜜与蜂王浆中 200 pg/ kg 加标水平中的响应。如表4所示，6种青霉素在1 ng/mL-100 ng/mL 范围内线性相关良好。从表5中可得到，在王浆和蜂蜜基质中，三种加标浓度(5、20和200pg/kg)下的平均回收率分别为 71.2%-111.9%和75.9%-115.1%， RSD分别不高于9.2%和9.1%；6种青霉素药物在蜂蜜和蜂王浆中的最低定量限分别为2.5 pg/kg 和1.25 pg/kg。 表5.6种青霉素在不同基质和添加水平下的回收率 本文采用 Agilent Bond QuEChERS dSPE EMR-Lipid 除去蜂王浆基质中的脂肪等杂质，蜂蜜基质利用乙腈直接提取，使用Zorbax Eclipse Plus C18 色谱柱并结合 Agilent 1290 Infinity ll液相色谱/6470三重四极杆液质联用系统，采用正离子扫描模式获得了较高的灵敏度。通过方法学验证数据得到，以上2种方法分别适用于蜂王浆和蜂蜜基质中青霉素类药物(如青霉素G、青霉素V、氨苄西林、苯唑西林、哌拉西林和邻氯青霉素)的残留分析。 消耗品 部件号 Agilent Bond QuEChERS dSPE EMR-Lipid 5982-1010 Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 3.0×100 mm， 1.8 pm 959758-302 Agilent Captiva 过滤膜， RC， 0.2 pm 5190-5281 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文采用 Agilent Bond QuEChERS dSPE EMR-Lipid 除去蜂王浆基质中的脂肪等杂质，蜂蜜基质利用乙腈直接提取，使用Zorbax Eclipse Plus C18 色谱柱并结合 Agilent 1290 Infinity II液相色谱/6470 三重四极杆液质联用系统，采用正离子扫描模式获得了较高的灵敏度。通过方法学验证数据得到，以上 2 种方法分别适用于蜂王浆和蜂蜜基质中青霉素类药物（如青霉素G、青霉素 V、氨苄西林、苯唑西林、哌拉西林和邻氯青霉素）的残留分析。