蔬菜中农兽药残留检测方案(农药 兽药)

Bellefonte， PA 16823-0048 USA电话800-247-6628·814-359-3441传真800-447-3044·814-359-3044email： supelco@sial.comS)SUPELCOsigma-aldrich.com/supelco 技术公告900B 固相萃取液相/气相方法分析水果和蔬菜中的农药残留 ENVI-Carb石墨化固黑固相萃取小处处理的极性分析物(包括氨基甲酸酯和硫脲类农药)回收率不但高于C8-或C18-硅胶基质小柱，而且稳定性更好。独立研究人员发现， ENVI-Carb萃取小柱是一种分析多种蔬菜和水果中超过200种有机氯、有机磷、含氮和氨基甲酸酯等农药的有效样品前处理方法。通过ENVI-Carb萃取小柱，研究人员既可以回收活性炭/硅藻土微型柱无法回收的若干农药，又可以消除微型柱繁琐的制备工作。这类农药大部分是通过气相色谱分析的，而10种氨基甲酸酯则通过高效液相色谱来分析。 关键词 ●农药·有机氯农药 ●有机磷农药 ·含氮农药·氨基甲酸酯农药 ·样品制备·固相萃取 鉴于人们对水果和蔬菜农药残留的担忧，研究人员研发了多种方法来监测农药残留。与此同时，监管机构和相关分析员也一直努力减少样品制备过程中使用的有机溶剂数量。固相萃取 (SPE)技术已被证明是环境样品分析中纯化、萃取以及浓缩污染物的有效方法。目前，从水生环境样品中萃取污染物的SPE方法多将辛基(C8)或者十八基(C18)固相与二氧化硅相结合。使用上述材料，非极性分析物表现出了良好的回收率和重现性。但是，当使用典型的反相萃取条件时，酸、碱性及其他极性分析物(例如，氨基甲酸酯和硫脲类农药)的回收率往往很低。 相对于传统的液-液萃取或者C8/C18硅胶基质的SPE，碳基质的SPE萃取小柱ENVITM-Carb能够提供出色、更一致的极性分析物回收率，同时具有相当的低极性化合物分析结果。有关极性农药的典型分析结果详见表1。 表2罗列了ENVI-Carb石墨化碳黑和C8-/C18-硅胶基质填料的物理性质。由于碳相的无孔性，样品处理速度较快-——有分析物扩散入孔的过程。此外，尽管无孔碳的表面积小于多孔硅胶(通过nitrogeN BET测得)，但农药的净化能力却毫不逊色。一般所需的填料重量仅为硅胶填料的一半。 表1.使用ENVI-Carb SPE萃取小柱的农药回收率最高回收率(平均值%±标准偏差) 固相萃取 液/液 ENVI-Carb" C8/C18硅* 萃取* 分析物 n=5 n=4 n=4 杀线威 95±5 53±1 55±16 灭多威 97±5 43±1 74±8 涕灭威 96±3 67±8 88±8 灭草隆 97±4 90±6 90±4 甲萘威 98±5 74±15 102±13 敌草隆 98±6 90±6 94±3 1L水样， HPLC/UV分析 数据源自Supelco实验室 *数据源自B.E.Goodby，环境实验室，1990年6月/7月，第19-58页。 表2.ENVI-Carb石墨化碳黑和硅胶基质SPE填料的物理性质 ENVI-Carb石墨化碳黑 C8-和C18硅胶基质 石墨炭黑 硅胶基质改性 疏水性 疏水性 无定形开粒 40-100pm 无定形杉粒40-60pm 非多孔 多孔(60-300A) 表面积100m²/g 表面积：400-600m²/g 加拿大(安大略省渥太华)农业和鲜活农产品的研究人员们开发了一种多残留物净化和分析方法，可以监测蔬菜和水果中超过200种有机氯有机机、含氮和氨基甲酸酯等农药。其灵活的系统能够快速扫描“加急”样品(表3)，同时彻底净化复杂(高背景)样品。最初，研究人员采用活性炭和Celite@硅藻土混合填充的微型柱(1)完成萃取程序，但发现ENVI-Carb萃取小柱能回收更多用活性炭硅藻土吸附剂无法回收的农药。因此研究人员们改用ENVI-Carb SPE萃取小柱代替活性炭硅藻土微型柱，从而消除了微型柱复杂的制备过程。在表4中，加拿大研究人员对比总结了ENVI-Carb SPE萃取小柱和活性炭硅藻土微型柱的农药回收率，以及使用ENVI-CarbSPE小柱萃取蔬菜和水果中标准农药的典型回收率。粗体表示无法被活性炭/硅藻土微型柱回收的分析物。使用C18、ENVI-Carb、氨基柱SPE萃取小柱的典型分析见图A。 1. 向100mL腈腈中加入50g切碎的样品并混匀(例如，Omni-mixer匀浆机，半速，5分钟) 2. 加入10g氯化钠(=向刻度量筒中加入8mL)。混匀5分钟。口 3 将乙腈层(顶层)中的13mL液体转移至15mL的带刻度离心管中。 4. 加入3g无水硫酸钠(液面上升至15mL标记处)，盖上盖子，摇匀，以去除水分。 5高速离心5分钟。6 将10mL(=5g样品)少量溶液移至洁净的15mL小管中。▲在纯净的氮气吹扫下蒸发至0.5mL(水浴，35℃) 7. 转移至ENVI-Carb SPE小柱中(6mL小柱，500mg填充)。.v 8用20mL乙腈/甲苯(3：1)溶液洗脱农药。，◆9 用旋转蒸发仪将样品浓缩至2ml。添加10mL丙酮2次，每次添加后将样品浓缩至2mL，使得溶剂变换为丙酮。 10.将定量的样品转移至洁净的15mL小管中。添加50pL内标(丙酮中顺式氯丹浓度为50ng/pL)，之后用丙酮定容体积至2.5mL(终浓度=2g/mL提取物， 1.0ng/pL顺式氯丹)。 GC/MS检测(有机氯、有机磷、含氮农药) 1. 预留0.5mL最终提取物用于气相/质谱检测分析。 色谱条件见参考文献1。 高效液相色谱/柱后衍生/荧光检测(用于氨基甲酸盐) 将剩余的2.0mL提取物最终浓缩至0.2mL。 2添加20pL内标(甲醇中异丙威含量为40ng/pL)，然后用水定容至0.8mL(用36.5-38%的盐酸/水 (1：4)调节pH至3.0)，用0.45pm的微孔滤膜过滤(终浓度=1.0ng/pL异丙威)。 色谱条件见参考文献2。 在步骤2之后，还需进行例行的C18处理步骤。用乙腈活化C18 SPE小柱(500mg/6ml)，然后取2ml少量乙腈层(丢弃).然后将13ml上层乙腈层转移至15ml带刻度离心管中，再进行步骤4 ^对于加急样品，不需进行氨基甲酸盐分析，取少量4ml样品分析。 在常规步骤中，将氨基SPE小柱接在ENVI-Carb萃取小柱的出口位置。 ◆如果样品不包括以下任一物质：高灭磷、乙基溴硫磷、克菌丹、虫螨螨、蝇毒磷、抑菌灵、六氯苯、碘硫磷、对溴磷、定菌磷、五氯硝基苯、甲苯氟磺胺，则洗脱剂可减少至5mL。 水果和蔬菜提取物多残留物分析的制备工作可能需要进行额外的纯化工作来减少色谱图的背景。额外增加C18净化步骤(见表3脚注)可以去除样品基质中的极性干扰。除灭蚁灵外，回收率与单独使用 ENVI-Carb萃取小柱得到的回收率相当。使用氨基硅胶基质填料和Envi-carb萃取小柱联用，可以消除极性物质的干扰。除灭菌丹之外，其其物质的回收率都与单独使用ENVI-Carb萃取小柱相当。 图A.苹果中的农药(总离子色谱图) 含有农药的样品 (相对丰度比例是空白的5倍) 色谱图由加拿大安大略省渥太华农业和鲜活农产品(农药研究所，实验室服务部门)的J.Fillion提供。 在加拿大组的样品筛选应用中，有机氯、有机磷和含氮类农药(超过200种化合物)通过GC/MS检测进行分析，其中残留物由保留时间和离子比例来定性。10种氨基甲酸盐是通过高效液相色谱紫外检测来分析的。下表列出了各种分析物在气相运行程序中的检测值(大约115种化合物和80种化合物)，同时在(1)中列出了回收率和检测限，(2)中描述了柱后衍生法和高效液相色谱柱的条件。与液/液萃取或者硅胶基质填料的固相萃取相比，通过ENVI-Carb萃取小柱对环境样品进行固相萃取具有若干显著优势。与液/液萃取相比， SPE无需昂贵的玻璃器皿、大量溶剂以及长时间的制备工作。VisiprepTM固相萃取装置可自动化完成整个操作过程，并同时处理1一12或者1-24个样品。与硅胶基质填料的SPE相比， ENVI-Carb萃取小柱可以更出色地大范围处理有机污染物，回收率更加稳定。 品 (O 表4.使用ENVI-Carb SPE萃取小柱的农药回收率(续) ( *6 mL ENVI-Carb SPE萃取小柱(500mg 填 充)；洗脱液：20mL乙腈/甲苯3：1；基质 ： 香蕉， 梨 ；n = 6. ) **2g活性炭/硅藻土(1：4)；洗脱液：50mL乙腈/甲苯3：1；基质：香蕉，梨，胡萝卜； n=9 or 12。 NA-暂无数据 ( ND-未检出 ) SUPELCO 订购信息： ( 参考文献 ) 产品名称 货号 ( 1 . F illion， J ， R . Hindle， M. Lacroix， and J. S elwyn， Journal AOAC Inter n ational， 78：1252- 1 266(1995). ) ENVI-Carb固相萃取小柱 3mL， 250mg， 每盒54支 57088 6mL， 250mg， 每盒30支 57092 6mL， 500mg， 每盒30支 57094 ( 2. C haput， D.， J. Assoc. Official Analytical Chemists ， 71： 542-546(1988). ) ( 这些参考文献不能从Supelco获得。 ) ( 鸣谢 ) ( 表3中的萃取过程和表4中的数据由J. Fillion和J.C.Selwyn 提 供，图A中的色谱图由安大 略省渥太太农业与农业食品部(实验室服务部，农药实验室)J.Fillion提供。 ) AutoTrace SPE萃取小柱连接头 AutoTraceSPE小柱连接头 3mL， 每包6支 571236mL， 每包6支 57126 商标 ( ENVI， V isiprep- S igma-Aldrich Co. ) VisiprepTM固相萃取装置 ( Zymark-Zymark ) Celite-Celite Corp. 用于同时处理1-12或1-24个样品。详细信息以及其他型号的说明，请参见Supelco公司的最新目录 以及编号为495121的文献。 12位标准型 57030-U 24沐标准型 57250-U 12位防交叉污染型 57044 24位防交叉污染型 57265 固相萃取小柱的完整清单，请参见编号为412130的文献 ( 订购/客服800-247-6628，800-325-3010(仅 限 美国)●传真800-325-5052(仅限 美 国)● 邮 箱supelco@sial.com ) ( SUPELCO· 595 North Ha r rison Road， Bellefonte， PA 16823-0048·814-359-3441 ) 我们致力于通过领先的生命科学、高科技及服务携手广大客户、员工和股东共创辉煌。 SIGMA-ALDRICH家族 Z SIGMA A ALDRICH AFluka Riedel deHaen SSUPELCO° SSUPELCOsigma-aldrich.com/supelco UPELCO技术公告