车前子中京尼平苷酸检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱明-企业QQ：40061 65163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 车前子分析 车前子的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为车前科植物车前Plantago asiatica L.或平车前Plantago depressa Willd 的干燥成熟种子。 【功能与主治】清热利尿通淋，渗湿止泻，明目，祛痰。用于热淋涩痛，水肿胀满，暑湿泄泻，目赤肿痛，痰热咳嗽。【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，0.5%醋酸为流动相B， 按下表中的规定进行梯度洗脱。检测波长为254 nm。理论板数按京尼平苷酸峰计算应不低于3000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~1 5 95 1~40 5→60 95→40 40~50 5 95 对照品溶液的制备：取京尼平苷酸对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，分别加60%甲醇制成每1 mL含0.1mg的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过二号筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇50 mL， 称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液容10uL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含京尼平苷酸(CH，2010)不得少于0.50%，毛蕊花糖苷(C，，H6015)不得少于0.40%。 2.车前子药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中车前子的含量测定以京尼平苷酸、毛蕊花糖苷为质量评价依据， 其在Inertsil ODS-3(4.6×150mm， 5uim)中的色谱特点为：在流动相组成为甲醇-0.5%醋酸系统时，流动相的比例对京尼平苷酸、毛蕊花糖苷及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相甲醇的比例在5%(0~1 min)、5%→55%(1~40 min)、5%(40.01~50 min)时，其分离度最好，车前子色谱图中杂质峰较少且与京尼平苷酸、毛蕊花糖苷相比含量很低，可以获得较好的分析效果；柱温对京尼平苷酸、毛蕊花糖苷的保留时间及与相邻色谱峰的分离度影响很小。经过考察，在流动相比例为甲醇-0.5%醋酸溶液5%：95%(0~1 min)、5%→55%：95%→45%(1~40 min)、5%：95%(40.01~50 min)， 柱温35℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。使用Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5pm)柱亦能得到较满意的分析效果。 车前子 ( 样品来源：本品 为 车前科植物车前Plantago asiatica L.的干燥成熟种子。产地：河 北 。 ) ( 对照品：京尼平苷酸(成都曼思特生物科技有限支司，批号：A0526，含量：98%)， ) 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 毛蕊花糖苷(上海同田生物技术有限公司，批号：00041424，含量：98%)。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过二号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇50mL， 称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取取京平苷酸对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密密定，至棕色量瓶中，分别加60%甲醇制成每1mL含0.1mg的混合溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 柱温：35℃ 检测波长：254nm 流 速： 1.0 mL/min 进样量：：10uL 流动相：甲醇-0.5%醋酸溶液 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~1 5 95 1~40 5-55 95-45 40.01~50 5 95 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 DGU-20A，脱气机 CTO-20AC柱温箱 CBM-20A系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 对照品 对照品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 京尼平苷酸 14.878 1423863 119994 34202 1.07 毛蕊花糖苷 32.570 1153726 89708 143051 1.12 京尼平苷酸的标准曲线 Area 重复性数据如下： 京尼平苷酸 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 14.878 1423863 14.869 1938156 2 14.904 1433597 14.840 1942350 3 14.930 1419314 14.818 1942327 Average 14.904 1425591 14.842 1940944 RSD% 0.18 0.52 0.18 0.13 毛蕊花糖苷标准曲线 毛蕊花糖苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 32.570 1189021 32.855 1763313 2 32.642 1190451 32.833 1787947 3 32.675 1193473 32.825 1778720 Average 32.629 1190982 32.838 1776660 RSD% 0.17 0.20 0.05 0.71 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6 x 150mm，5um)柱温：35 ℃检测波长：254 nm流速：1.0 mL/min进样：10ul流动相：甲醇-0.5%醋酸溶液