抗菌药物（乳酸左氧氟沙星）中三氯甲烷残留检测方案(顶空进样器)

AutoHS 自动顶空气相色谱法测定乳酸左氧氟沙星中三氯甲烷 乳酸左氧氟沙星是阳氟沙星的左聚体，是一种广泛用于人体各种革兰阳性和革兰阴性致病菌的人体抗菌药物，而乳酸左氧氟沙星中残留的三氯甲烷对人体有害需要控制其含量，我们采用自动顶空进样一毛细管气相色谱法测定三氯甲烷，操作简单，重现性好，结果准确可靠。 1仪器和试剂 1.1仪器： HP5890气相色谱仪； FID 检测器； AutoHs 自动顶空进样器 1.2试剂：：三氯甲烷乙醇均为分析纯 2气相色谱条件与自动顶空进样器条件 2.1色谱条件 色谱普： HP-5毛细管柱(30m*0.5mm)，载气(氮气)压力 8psi；进样口温度200℃，柱温：40℃，检测器温度250℃ 2.2自动顶空进样器条件： 载气压力120kpa；加压时间180s 进样时间3s；放空时间 20s；保温时间40min；循环时间为 5min 顶空瓶加热温度80℃，顶空瓶体积为20ml，进样针温度为105℃，传输管温度为105℃。 3方法与结果 3.1标样与样品制备 3.11标样制备 取三氯甲烷分析纯30ul，乙醇分析纯2.5ml混合后用纯水定容至 5ml，从中取1ml溶液加水定容至50ml，作为标样1(0.12ul/ml)，再从标样1中取25ml溶液用纯水定容至50ml作为标样2(0.06ul/ml)，最后从标样2中取26ml溶液用纯水定容至50ml 作为标样3(0.0312ul/ml)，待用。 3.12 样品制备 精确称取乳酸左氧氟沙星(样品编号为081201，081202)各10克，分别用30ml纯水溶解制得样品1和样品2，待用。 3.2标准珍线得制备与样品测试 3.21上机分析 分别取 5ml标样1，标样2，标样3及样品1，样品2于20ml顶空瓶中密封，标样1和标样2各做两个平行样，标样三做四个平行样(用于验证方法的重现性)，每个样品各做两个平行样，进行顶空气相色谱分析。以标样面积为横坐标，标样浓度为纵坐标做线性回归分析，并计算样品中三氯甲烷的含量(ul/g) 3.3结果分析 3.31经过上机分析后得到的各标样谱图及相关数据如下： 5 高 .三氯甲烷 888寸寸寸寸 儿 山山 时间6.029(min)，电压-133.613(mv) 时间(min) 分析结果表 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.057 42.182 157.550 0.0024 2 0.865 68.600 414.999 0.0063 3 1.307 394.120 999.660 0.0153 4 1.498 321.891 915.520 0.0140 5 1.665 255.454 500.560 0.0076 6 1.807 1065972.500 4487437.000 68.5540 7 2.165 3162.000 7763.800 0.1186 8 2.523 117.182 299.000 0.0046 9 2.632 546.614 1360.613 0.0208 10 2.723 5319.364 17362.107 0.2652 11 2.882 215.295 545.483 0.0083 12 3.065 1077.921 2767.268 0.0423 13 三氯甲烷 3.232 699246.000 2014508.500 30.7754 14 3.548 877.822 4518.090 0.0690 15 3.690 256.931 886.887 0.0135 16 3.765 723.812 2266.380 0.0346 17 4.073 179.296 942.900 0.0144 18 4.323 202.500 621.500 0.0095 19 4.432 134.222 519.933 0.0079 20 4.523 274.963 1050.616 0.0161 标样1-1的图谱及分析结果 注： 保留时间：乙醇——1.8min三氯甲烷——3.2min 时间 1.438(min)，电压413.655(mv) Z82Z00- 8 三氯甲烷 山 CT7寸寸：寸寸 山 分析结果表 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.232 268.860 2582.050 0.0406 2 0.673 60.204 742.700 0.0117 3 1.307 371.292 942.900 0.0148 4 1.507 339.760 1100.500 0.0173 5 1.807 1065567.500 4315692.000 67.7917 6 2.165 3183.455 7944.050 0.1248 7 2.632 524.200 1254.400 0.0197 8 2.732 5161.400 16608.699 0.2609 9 2.882 201.600 347.077 0.0055 10 3.065 1056.636 2706.700 0.0425 11 三氯甲烷 3.232 692764.438 2005936.500 31.5096 12 3.548 857.813 4193.038 0.0659 13 3.690 264.591 827.696 0.0130 14 3.765 680.477 1836.306 0.0288 15 4.073 213.222 1137.309 0.0179 16 4.323 202.556 632.388 0.0099 17 4.448 141.552 510.243 0.0080 18 4.523 286.690 1114.761 0.0175 标样1-2的图谱及分析结果 ( 注： 保留时间：乙醇——1.8min 三 氯甲烷——3.2min ) 8118 2ON 0O81 三氯甲烷 号 0CT寸寸寸 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.090 79.333 374.334 0.0076 2 0.223 251.467 2275.568 0.0460 3 0.732 22.500 631.600 0.0128 4 1.307 369.500 871.800 0.0176 5 1.507 205.575 1021.609 0.0206 6 1.665 66.503 253.815 0.0051 7 1.807 1065954.750 3937269.750 79.5094 8 2.165 1575.333 4031.400 0.0814 9 2.373 190.939 1081.725 0.0218 10 2.632 253.200 570.913 0.0115 11 2.732 2629.800 8410.637 0.1698 12 2.882 198.700 532.250 0.0107 13 3.065 509.636 1276.450 0.0258 14 三氯甲烷 3.240 334295.813 987466.500 19.9409 15 3.557 453.372 2209.046 0.0446 16 3.690 283.186 957.255 0.0193 17 3.765 331.081 950.852 0.0192 18 4.073 88.235 395.300 0.0080 19 4.323 109.500 351.000 0.0071 20 4.532 172.571 1025.200 0.0207 标样2一1的图谱及分析结果 ( 注： 保留时间：乙醇——1.8min三氯甲烷—— -3.2min ) 一1 9917Ni 业 三氯甲烷 07 CT7 寸 寸寸 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.240 185.093 2405.600 0.0488 2 0.898 238.467 4805.900 0.0975 3 1.307 393.600 1070.920 0.0217 4 1.490 220.840 1064.082 0.0216 5 1.807 1065804.500 3896767.250 79.0642 6 2.165 1522.400 3691.500 0.0749 7 2.632 282.000 859.900 0.0174 8 2.732 2520.000 8179.050 0.1660 9 2.882 309.000 841.150 0.0171 10 3.065 526.173 1436.717 0.0292 11 3.148 946.383 2397.346 0.0486 12 三氯甲烷 3.232 338669.594 998756.125 20.2645 13 3.557 430.111 2066.099 0.0419 14 3.698 358.667 1219.000 0.0247 15 3.765 353.333 1009.300 0.0205 16 4.082 134.243 838.400 0.0170 17 4.323 107.000 352.300 0.0071 18 4.448 65.880 264.940 0.0054 19 4.532 171.280 586.310 0.0119 总计 1413238.563 4928611.889 100.0000 标样2-2的图谱及分析结果 注： 保留时间：乙醇——1.8min三氯甲烷——3.2min 时间 3.385(min)，电压575.420(mv) 4 -三氯甲烷 8 -898 07寸门00 寸 寸 山 山 41 分析结果表 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.048 90.000 301.450 0.0079 2 0.215 179.000 1743.700 0.0455 3 0.432 28.400 69.200 0.0018 4 0.673 44.000 351.400 0.0092 5 1.307 351.611 829.400 0.0216 6 1.507 136.267 668.100 0.0174 7 1.798 1065883.875 3310075.500 86.2810 8 2.165 746.400 1828.600 0.0477 9 2.632 117.586 320.206 0.0083 10 2.740 1261.241 4019.048 0.1048 11 2.890 208.600 617.201 0.0161 12 3.065 264.640 738.821 0.0193 13 3.157 591.360 1650.560 0.0430 14 三氯甲烷 3.240 176198.563 509937.594 13.2921 15 3.557 228.320 1186.717 0.0309 16 3.698 280.143 966.387 0.0252 17 4.090 64.852 330.100 0.0086 18 4.323 50.077 179.350 0.0047 19 4.440 40.750 98.778 0.0026 20 4.532 115.929 475.721 0.0124 1246881.613 3836387.833 100.0000 标样3一1的图谱及分析结果 注： 保留时间：乙醇——1.8min三氯甲烷——3.2min Ot01Z900 -三氯甲烷 5912 馨 00 寸寸寸寸 11L 分析结果表 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.240 118.047 1561.550 0.0405 2 0.640 21.737 320.300 0.0083 3 1.307 367.522 917.950 0.0238 4 1.507 131.742 647.450 0.0168 5 1.798 1065649.250 3317329.500 85.9535 6 2.165 782.000 1894.700 0.0491 7 2.632 136.216 388.879 0.0101 8 2.740 1303.177 3178.151 0.0823 9 2.882 197.510 584.921 0.0152 10 3.065 276.658 752.014 0.0195 11 三氯甲烷 3.240 182702.953 528306.063 13.6886 12 3.557 247.123 1176.639 0.0305 13 3.690 235.606 800.524 0.0207 14 3.773 189.364 560.583 0.0145 15 4.073 62.091 321.290 0.0083 16 4.323 57.000 192.200 0.0050 17 4.440 39.000 73.500 0.0019 18 4.540 102.000 440.400 0.0114 总计 1252618.994 3859446.613 100.0000 标样3一2的图谱及分析结果 注： 保留时间：乙醇——1.8min三氯甲烷——3.2min 时间-0.686(min)，电压1095.378(mv) o 三氯甲烷 O小寸 分析结果表 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.073 93.273 413.128 0.0107 2 0.215 132.727 1307.773 0.0339 3 1.307 369.579 905.450 0.0235 4 1.507 113.455 490.900 0.0127 5 1.798 1066197.250 3311621.250 85.8608 6 2.165 789.000 1925.800 0.0499 7 2.632 143.429 426.335 0.0111 8 2.740 1319.143 4542.849 0.1178 9 2.890 274.286 794.914 0.0206 10 3.065 260.514 735.699 0.0191 11 3.157 765.143 2134.157 0.0553 12 三氯甲烷 3.240 182874.719 527631.813 13.6800 13 3.557 242.886 1158.258 0.0300 14 3.690 342.800 1207.099 0.0313 15 3.765 182.314 521.485 0.0135 16 4.073 59.920 256.800 0.0067 17 4.323 65.286 237.177 0.0061 18 4.473 49.857 235.993 0.0061 19 4.532 120.190 417.831 0.0108 总计 1254395.770 3856964.710 100.0000 标样3一3的图谱及分析结果 注： 保留时间：乙醇——1.8min三氯甲烷——3.2min .三氯甲烷 切 9寸 O一0 寸寸寸8 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.048 88.545 304.609 0.0078 2 0.240 145.455 1751.189 0.0451 3 0.523 30.000 309.800 0.0080 4 1.307 359.000 863.450 0.0222 5 1.507 111.333 464.100 0.0119 6 1.798 1065872.625 3347702.000 86.1889 7 2.165 757.600 1842.800 0.0474 8 2.632 132.372 394.464 0.0102 9 2.740 1342.581 4249.569 0.1094 10 2.890 153.256 391.621 0.0101 11 3.065 266.622 745.755 0.0192 12 三氯甲烷 3.240 180457.484 522286.250 13.4466 13 3.557 256.432 1324.542 0.0341 14 3.698 175.929 481.100 0.0124 15 4.073 50.563 209.800 0.0054 16 4.315 82.778 304.500 0.0078 17 4.540 104.000 518.700 0.0134 总计 1250386.575 3884144.249 100.0000 标样3-4的图谱及分析结果 注： 保留时间：乙醇：1.8min三氯甲烷：33.2min 3.32样品测试情况如下： 时间 2.301(min)，电压-1.134(mv) 分析结果表 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.248 100.645 1416.702 12.7586 2 0.615 24.382 306.577 2.7610 3 1.307 373.848 1055.144 9.5024 4 1.507 91.717 533.255 4.8024 5 1.815 1380.059 4143.700 37.3174 6 1.982 34.571 135.600 1.2212 7 2.682 80.143 224.600 2.0227 8 2.882 163.129 665.650 5.9947 9 3.148 236.441 731.189 6.5850 10 三氯甲烷 3.248 162.618 478.410 4.3085 11 3.690 201.353 654.900 5.8979 12 3.923 41.000 758.200 6.8282 2889.905 11103.927 100.0000 样品1-1测试图谱及分析结果 时间 1.110(min)，电压15.693(mv) 峰号 分析结果表 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.073 32.600 170.600 1.9016 2 1.290 356.077 867.700 9.6721 3 1.507 86.667 293.200 3.2682 4 1.815 909.500 2588.900 28.8579 5 1.973 32.000 62.700 0.6989 6 2.390 45.222 425.347 4.7413 7 三氯甲烷 2.682 142.000 510.792 5.6937 8 2.882 240.333 821.200 9.1537 9 3.148 482.767 1455.992 16.2296 10 3.240 140.800 377.309 4.2058 11 3.682 306.000 1140.300 12.7107 12 4.523 65.040 257.150 2.8664 2839.006 8971.191 100.0000 样品1-2测试图谱及分析结果 三氯甲烷 2寸如88 2.寸 时间 0.193(min)，电压29.284(mv) 2 3时间(min) 分析结果表 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.098 73.790 403.799 4.1207 2 0.515 8.565 74.497 0.7602 3 1.298 383.600 950.200 9.6967 4 1.507 89.222 364.400 3.7187 5 1.815 976.083 2821.100 28.7891 6 2.682 156.500 478.900 4.8871 7 2.882 281.130 885.700 9.0385 8 3.148 606.400 1771.701 18.0801 9 三氯甲烷 3.240 136.200 420.301 4.2891 10 3.690 385.750 1329.500 13.5674 11 4.523 65.500 299.100 3.0523 总计 3162.741 9799.197 100.0000 样品2-1测试图谱及分析结果 时间 1.873(min)，电压10.610(mv) 时间(min) 峰号 峰名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 0.273 117.476 1875.498 14.6963 2 0.465 47.131 289.834 2.2711 3 0.682 27.393 52.962 0.4150 4 1.307 370.538 953.000 7.4676 5 1.507 73.250 331.200 2.5953 6 1.815 915.973 3023.000 23.6880 7 2.282 46.276 103.944 0.8145 8 2.440 64.586 542.632 4.2520 9 2.682 144.586 966.028 7.5697 10 2.882 266.667 943.850 7.3959 11 3.148 568.677 1812.943 14.2061 12 三氯甲烷 3.240 118.097 406.154 3.1826 13 3.690 343.781 1280.300 10.0323 14 4.523 53.000 180.400 1.4136 总计 3157.432 12761.744 100.0000 样品2-2测试图谱及分析结果 3.33数据处理 3.331样品中三氯甲烷含量的计算 校正曲线 方法：面积外标法方程： y=ax；a=5.98E-008 b=0.00E+000 相关系数：R=0.9999 样品的含量计算如下： 样品1(样品编号：081201) 样品2(样品编号：081202) 峰面积 浓度(ul/l) 峰面积 浓度(ul/l) 478.410 0.028 420.301 0.025 377.309 0.023 406.154 0.024 分别对样品1和样品2两组平行样取平均值得到样品1的浓度为0.0255ul/1，样品2的浓度为 0.0245ul/1 样品1(编号：081201)的三氯甲烷含量为：(0.0255u1/1*0.031)/10g=0.0000765ul/g 样品2 (编号： 081202) 的三氯甲烷含量为(0.0245ul/1*0.031)/10g=0.0000735ul/g 3.332重现性分析 编号 三氯甲烷 509937.594 2 528306.063 527631.813 4 522286.250 平均峰面积 522040.430 RSD 0.53% 注：乙醇浓度过高已超过仪器检测上限，所以不不做精密度分析。 4讨论 用自动顶空进样气相色谱法分析乳酸左氧氟沙星中的三氯甲烷，该方法经验证灵敏度高，重现性好，适于进行药业生产过程中的质量控制.