保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定

 1. 实验部分 1.1 实验仪器及耗材 Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪； 色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×150 mm，5 μm；P/N：380-01230-02)； 纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器） SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）； LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）； SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）； SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）； SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。  1.2 混合对照品溶液的制备  分别准确称取5种组分标准品适量，加水溶解并稀释至1.0 mg/mL的单标溶液，然后分别量取各组分单标溶液适量，加甲醇-水-磷酸（100：400：0.5）溶液稀释得到如下浓度的混合对照品溶液：盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇0.05 mg/mL，烟酸和烟酰胺0.1 mg/mL，咖啡因浓度为0.5 mg/mL，混匀，备用。 1.3 试样溶液的制备  取液体试样适量，过0.22 μm滤膜，备用。 1.4 分析条件 色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×150 mm，5 μm；P/N：380-01230-02) 柱温：25℃ 检测波长：280 nm（盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺咖啡因）/260nm（盐酸硫胺素） 流速：1.0 mL/min 进样量：10 μL 流动相： 1） 盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因： A：癸烷磺酸钠溶液（1.22g→850mL）+乙腈+磷酸=850+150+1 B：乙腈 A：B=95：5 2）盐酸硫胺素： 硫酸月桂酯钠溶液（5g→530mL）+乙腈+磷酸=530+470+1 2. 实验结果 按照上述色谱条件（1.4）进行采集，混合对照品溶液和供试品溶液色谱图如下： 混合对照品溶液（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 混合对照品溶液放大图（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 序号* 目标物 保留时间 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子 分离度 1 咖啡因 3.332 8587879 1450859 5954 1.174 -- 2 烟酸 6.707 169721 15978 8440 1.364 14.523 3 烟酰胺 9.474 179009 13140 10636 1.174 8.392 4 盐酸吡哆醇 17.632 928489 37509 11490 1.007 15.913 试样溶液（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 试样溶液放大图（280nm：盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因） 序号* 目标物 保留时间 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子 分离度 1 咖啡因 3.332 4789115 850969 6474 1.190 -- 2 烟酰胺 9.489 64908 4621 10008 1.106 22.593 3 盐酸吡哆醇 17.603 69678 2855 11661 1.078 15.732 混合对照品溶液（260nm：盐酸硫胺素） 序号* 目标物 保留时间 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子 分离度 1 盐酸硫胺素 23.190 1188162 36833 11817 1.083 -- 试样溶液（260nm：盐酸硫胺素） 重现性 混合对照品溶液重现性 目标物 保留时间（min, n=3） 峰面积（Area, n=3） 数据1 数据2 数据3 RSD （%） 数据1 数据2 数据3 RSD （%） 咖啡因 3.328 3.332 3.328 0.07 8588415 8587879 8542389 0.30 烟酸 6.697 6.707 6.705 0.07 169720 169721 168552 0.40 烟酰胺 9.459 9.474 9.478 0.10 179344 179009 177253 0.63 盐酸吡哆醇 17.597 17.632 17.642 0.13 929749 928489 923208 0.37 盐酸硫胺素 23.177 23.190 23.213 0.07 1189700 1188162 1189436 0.07 试样溶液重现性 目标物 保留时间（min, n=3） 峰面积（Area, n=3） 数据1 数据2 数据3 RSD （%） 数据1 数据2 数据3 RSD （%） 咖啡因 3.332 3.335 3.334 0.04 4789115 4786557 4785730 0.04 烟酰胺 9.489 9.494 9.499 0.05 64908 64210 64455 0.54 盐酸吡哆醇 17.603 17.63 17.632 0.09 69678 70030 69779 0.25 3. 结论 本文建立了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的HPLC测定方法。参照国标GB/T 5009.197-2003中色谱条件并进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18（4.6*150mm，5μm）分析保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5种组分，5个化合物峰形良好，分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因等5组分的HPLC分析提供参考。