全自动在线Folch提取和衍生鲑鱼中脂肪酸

导语代谢组学专注于研究特定途径中的小分子代谢产物谱（分子量<200 Da）的特征。代谢组学研究通常需要准备大量样品组，以明显区分生物基质中的不同样品类型。因此，分析数据质量（即低分析变异性）对于突出真实的生物变异性至关重要。典型的代谢组学工作流程包括样品提取、纯化、衍生化和预浓缩，然后根据代谢物的目标类别进行气相色谱-质谱（GC-MS）或液相色谱-质谱（LC-MS）分析。样品制备自动化可以提供所需的稳健性和重现性，以获得高质量的数据。自动化Folch提取+脂肪酸的转甲基化本应用说明介绍了全自动在线工作流程的开发，包括脂肪酸的提取、衍生化和GC-MS分析。使用Folch提取法从鲑鱼组织中提取脂质，并在注射到GC-MS系统之前对提取物进行直接甲基化衍生处理。Folch 提取需要彻底的组织提取。因此，将标准 Folch 提取与使用珠磨的 Folch 提取进行比较。珠磨是一种机械细胞破碎方法，用于从细胞内部释放生物分子。通过搅拌或摇动对样品和珠子进行高度搅拌；珠子碰撞导致细胞打开并释放细胞间成分。用于自动化Folch提取和自动化甲基化衍生的GERSTEL MPS双臂系统，配置了离心、蒸发、混合振荡和孵化加热等模块自动化 Folch 提取将50毫克鲑鱼组织转移至2毫升小瓶中。添加1毫升氯仿/甲醇作为有效的脂质提取溶剂。然后剧烈涡旋样品30分钟。离心10分钟后，将500微升上清液转移到干净的小瓶中，并加入200微升LC-MS级用水，通过液液萃取提取有机小分子。将含有脂质的下层有机层转移到干净的2毫升小瓶中，并在mVAP中蒸发至干。在进行水解/甲基转移之前，将干提取物重新溶解于100微升甲苯中。脂肪酸的甲基化衍生向鲑鱼提取物中加入500 μL 新配制的甲醇，在70°C下反应30分钟。然后添加各 500 μL LC-MS 级用水和己烷，并以2500 rpm的速度涡旋样品10 分钟。离心2分钟后，将1 μL顶部有机层直接注入 GC-MS。结果展示使用 (a) 标准 Folch 提取或 (b) 珠磨法 Folch 提取的鲑鱼组织提取物的 TIC-QTOF-MS 色谱图检测到的三种 Omega 3 脂肪酸的平均面积和标准差（Omega A：9,12,15-十八碳三烯酸甲酯，(Z,Z,Z)-，Omega B：,8,11,14， 17-二十碳五烯酸甲酯 (all-Z)- 和 Omega C: 4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯, (all-Z)-) 使用全自动 Folch 萃取 ( 标准提取与使用珠打浆的提取）。总结开发了一种全自动在线提取和衍生鲑鱼脂肪酸的方法。Folch 提取完全自动化，使用均质鲑鱼组织和珠磨。两种研究方法都成功提取和衍生了脂肪酸，并且具有非常好的重现性。