LC-MS/MS法测定化妆品中的16α-羟基泼尼松龙

本文使用岛津超高效液相色谱串联质谱联用仪，参照国家药监局化妆品补充检验规定《化妆品中16α-羟基泼尼松龙的测定》（BJH202203），建立了化妆品中16α-羟基泼尼松龙的检测方法。本方法灵敏度高、重复性好，能够应对化妆品中16α-羟基泼尼松龙的日常监测工作。SSL-CA23-210 Excellence in ScienceLCMSMS-787 LC-MS/MS 法测定化妆品中的16a-羟基泼 尼松龙 LCMSMS-787 摘要：本文参照国家药监局化妆品补充检验规定《化妆品中16α-羟基泼尼松龙的测定》 (BJH202203)建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定化妆品中16a-羟基泼尼松龙的方法。结果表明，在线性范围 内，线性相关系数 r=0.9997， 线性良好。基质标准溶液的保留时间RSD% 为 0.06~0.12%，峰面积RSD% 为 0.59%~1.34%，方法重复性良好。加标回收率为 89.55~103.28%。该方法快速，稳定，准确，可应对化妆品 中16α-羟基泼尼松龙快速定量分析。 关键词：三重四极杆液质联用仪化妆品 16a-羟基泼尼松龙 技术特点： 心应对国家药监局化妆品补充检验规定《化妆品中16a-羟基泼尼松龙的测定》。 小本方法实际测得检出限和定量限均优于标准要求。 16a-羟基泼尼松龙是一种化工中间体，与泼泥松 龙具有相似的结构，目前尚无相关的药理和毒理性研 究。但是长期使用激素会造成激素蓄积中毒，甚至产 生皮肤角质层变薄、红血丝、怕光、长毛等严重影响 健康和美观的后果，最终形成激素依赖性皮炎，进而 导致代谢紊乱甚至癌症，对人体造成严重伤害。 2022年11月，国家药监局发布2022年第107号公告《化妆品中16a-羟基泼尼松龙的测定》化妆品 补充检验方法。该标准的推出，为今后相关化妆品监 督执法提供了强有力的技术支撑，可有效、精准地打 击该领域违法犯罪行为，为捍卫公众身体健康将发挥 重要的作用。 本文参照国家药监局发布的方法，建立了LC-MS/MS 法测定化妆品中的16a-羟基泼尼松龙。该方法、准确，能够应对化妆品中16α-羟基泼尼松龙的快速筛 查和准确定量。 实验部分 1.1仪器 本文使用岛津 LCMS-8045 三重四极杆液质联用仪，具体配置为： 系统控制器：CBM-20A脱 气 机：：DGU-20A5R 输液泵：LC-30AD ×2自动进样器：SIL-30AC 柱温箱CTO-20AC质谱检测器：LCMS-8045 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.118 1.2分析条件 液相条件： 色谱柱：：Shim-pack Velox C18(100 mm x2.1mml.D.，2.7 um，岛津(上海)实验器材有限公司， P/N： 227-32009-03) 流动相目： A相-水；B相-乙腈 流速：：(0.3 mL/min进样羊量：5柱温品：：30℃ 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，洗脱程序见表1 表1 梯度洗脱程序 时间 (min) 单元 处理命令 值 1.00 泵 B.Conc 5 10.00 泵 B.Conc 95 13.00 泵 B.Conc 95 13.10 泵 B.Conc 5 16.00 控制器 Stop 质谱条件： 离子源：ESI(-)加热块温度：400°℃雾化气流速：3.0L/minDL温1度：200℃加热气流速：10.0 L/min接口温度：300°℃干燥气流速：10.0 L/min扫描模式： 多反应监测(MRM) MRM 参数： 见表2 表22化合物信息及 MRM 优化参数 化合物名称 CAS 号 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE (V) Q3 Pre Bias (V) 16a-羟基泼尼松龙 13951-70-7 375.40 327.00* 20 15 20 283.20 19 27 14 注：*表示定量离子 1.3供试品溶液的制备 称取样品0.2g(精确到0.0001g)，置于10mL具塞比色管中，加入50%乙腈约9mL， 涡旋振荡，使试 样与提取溶剂充分混匀。超声提取 10 min， 静置至室温，用50%乙腈定容至刻度，摇匀，以10000 r/min 转 速离心10 min， 取上清液经 0.22 um 有机滤膜过滤，滤液作为供试品溶液备用。 1.4基质标准溶液的制备 精密量取 16α-羟基泼尼松龙标准溶液0.1 mL， 置于10mL容量瓶中，用1.3方式制备得到的空白基质提取 液稀释至刻度，摇匀，制成16a-羟基泼尼松龙浓度为 100 ng/mL 的基质标准溶液，现用现配。 ■结果与讨论 2.1化合物 MRM 色谱图 RT (min) 图12.0 ng/mL 16a-羟基泼尼松龙标准溶液 MRM 色谱图 2.2线性范围 取1.4中的基质标准溶液，用1.3前处理方式制备得到的空白基质提取液稀释配制成浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 ng/mL 的基质标准系列溶液，上机测试。以化合物浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归分析。结果表明，16a-羟基泼尼松龙在线性范围内相关系数为 0.9997， 准确度为93.8-104.3%，线性良好。 Conc.(ug/L) 图216a-羟基泼尼松龙校准曲线 2.3检出限及定量限 取1.4中的基质标准溶液，用1.3前处理制备得到的空白基质，稀释至浓度为 0.2 ng/mL 的基质检出限溶液，以线性最低点为基质定量限溶液，分别进行上机分析。结果表明，16a-羟基泼尼松龙的检出限为 0.065 ug/kg，定量限为 0.32 ug/kg， 满足标准规定检出限 10 pg/kg 和定量限25 ug/kg 的要求。 2.4重复性考察 取0.5、2.0、10.0 ng/mL 基质标准溶液，按照1.2分析条件进行上机分析，分别连续进样6针，计算重复性。结果表明，16a-羟基泼尼松龙的保留时间 RSD% 为 0.06~0.12%，峰面积 RSD% 为 0.59%~1.34%，方法重复性 良好，仪器精密度良好。结果见表3。 表316a-羟基泼尼松龙重复性结果(n=6) 化合物名称 低浓度(0.5ng/mL) 中浓度(2.0 ng/mL) 高浓度 (10.0 ng/mL) 保留时间(RSD%) 峰面积(RSD%) 保留时间(RSD%) 峰面积(RSD%) 保留时间(RSD%) 峰面积(RSD%) 16a-羟基泼尼松龙 0.12 1.34 0.08 1.30 0.06 0.59 2.5加标回收率试验 按照1.3前处理方式制备样品和加标样品，三个水平加标浓度如下表4所示。结果表明，样品中未检出 16a-羟基泼尼松龙，各水平的加标平均回收率在89.55~103.28%之间，相对标准偏差RSD%在1.11~2.13%之间。 图3 实际样品(左图)、2.0 ng/mL 加标样品(右图) MRM色谱图 LCMSMS-787 表4 加标回收和精密度结果((n=6) 化合物名称 样品浓度 (ug/kg) 35.0 ug/kg 100.0 ug/kg 350.0 ug/kg 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 16a-羟基泼尼松龙 N.D. 89.55 2.13 103.28 1.87 101.41 1.11 注：N.D.表示未检出。 结论 本文使用岛津超高效液相色谱串联质谱联用仪，参照国家药监局化妆品补充检验规定《化妆品中16a-羟基泼 尼松龙的测定》 (BJH202203)，建立了化妆品中16a-羟基泼尼松龙的检测方法。本方法灵敏度高、重复性好，能够应对化妆品中160-羟基泼尼松龙的日常监测工作。 岛津应用云