染发膏中对苯二胺等32种染发成分检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-349Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-505 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 岛津LCMS-8045 测定化妆品中对苯二胺等32种染发成分 LCMSMS-505 摘要：本文建立了岛津三重四重杆液质联用仪 LCMS-8045测定化妆品中对苯二胺等32种染发成分的分析方法。多数化合物的线性范围在 0.02-2 mg/L之间，中高点基质加标浓度的回收率范围在 50.4%-110.1%之间。并对实际样品进行测试，测试结果与标识吻合，经过验证， LC-MS/MS 作为32种染发组分定性确证方法，满足标准检测需要。 关键词：染发剂 对苯二胺 三重四极杆质谱 染发剂是给头发染色的一种化妆品。分为暂时性、半永久性、永久性染发剂。染发剂普遍含有对苯二胺类物质，对苯二胺类是染发剂中必须用到的一种着色剂；这类化合物是《化妆品安全技术规范(2015年版)》中规定准用组分，但是要求添加的组分要在化妆品成品上标识出来。如果产品中检测组分与标识组分不符合，国家药检局会通报处罚的。 2021年3月2日，国家药监局发布通告(2021年第17号)，公布了最新修订的《化妆品中对苯二 胺等32种组分检验方法》，并将检测方法纳入化妆品安全技术规范(2015年版)。在修订后的方法增加了LC-MS/MS 的确证方法，以解决目前面临的复杂样品缺少很有效的确证方法的问题。岛津参与了标准的修订工作。 本文参考国家药监局(2021年第17号)通告发布的《化妆品中对苯二胺等32种染发剂的检测方法》；采用岛津 LCMS-8045三重四极杆液质联用仪建立测定化妆品中32种染发组分的分析方法。 实验部分 1.1仪器 岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用系统。具体配置为： 系统控制器：CBM-20A 柱温箱： CTO-20AC 脱气机：DGU-20A，R检测器：：LCMS-8045输液泵： LC-30AD×2色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 SP2 自动进样器：SIL-30AC 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack Scepter C18 2.1 mml.D.× 100 mm L.， 3 um (P/N：227-31014-05，岛津(上海)实验器材有限公司) 流动相：A相-5mmol/L乙酸铵水溶液(正离子模式)，5 mmol/L 乙酸水溶液(负离子模式)；B相-乙腈。流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样体积：5uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，时间程序见表1。 表1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 4.00 泵 B.Conc 5 11.00 泵 B.Conc 20 16.00 泵 B.Conc 70 17.00 泵 B.Conc 95 19.00 泵 B.Conc 95 19.10 泵 B.Conc 5 23.00 控制器 Stop 质谱条件 离子化模式：ESI(+)接口温度：300℃DL温度：250C 雾化气流速：3.0 L/min 加热气流速： 10.0L/min干燥气流速：10.0L/min加热模块温度：400C碰撞气：氩气 MRM 参数：见表2 表2MRM参数 No. 中文名称 CAS No. 模式 前体离子 产物离子 Q1PreBias(V) CE(V) Q3PreBias(V) 1 109.10 65.10* -12 -24 -25 p-苯二胺 106-50-3 92.10 -12 -17 -18 65.10* -12 -22 -24 2 p-氨基苯酚 123-30-8 + 110.10 93.05 -12 -18 -17 39.10 -12 -31 -14 甲苯-2，5-二胺硫 615-50-9 + 123.10 123.10* 108.10 -13 -19 酸盐 123.10 77.05 -13 -30 65.10* -12 -23 -25 m-氨基苯酚 591-27-5 + 110.05 93.10 -12 -18 -17 39.10 -12 -33 -13 65.10* -12 -24 -24 o-苯二胺 95-54-5 + 109.10 92.05 -12 -18 -16 39.10 -12 -37 -13 6 2-氯-p-苯二胺硫 61702-44-1 + 143.00 108.10* -15 -18 -18 酸盐 80.10 -16 -26 -14 65.05* -12 -24 o-氨基苯酚 95-55-6 + 110.05 92.10 -12 -16 39.10 -14 8 间苯二酚 108-46-3 + 109.05 65.10* 14 12 41.05 13 22 119.05* -17 -16 2-硝基-p-苯二胺 5307-14-2 + 154.05 136.10 -17 -13 -12 10 甲苯-3，4-二胺 496-72-0 + 123.05 77.10* 3 -29 -28 106.05 -19 -19 LCMSMS-505 29 2，7-萘二酚 582-17-2 159.05 130.10* 19 26 13 102.05 19 28 18 + 30 N-苯基-p-苯二胺 101-54-2 185.10 108.10* -13 -23 -18 80.10 -13 -51 -29 115.05* 18 21 12 31 1，5-萘二酚 83-56-7 159.05 131.10 18 23 23 32 90-15-3 143.05 115.00* 16 26 20 1-萘酚 41.05 17 30 17 *定量离子对 样品前处理 2.1样品制备 参照国家药监局(2021年第17号)通告发布的《化妆品中对苯二胺等32种染发剂的检测方法》。 称取样品0.5g(精确到0.001g)于10mL塑料离心管中，加无水乙醇+水(1+1)的混合溶液至10 mL刻度，涡旋1 min，冰浴超声提取 15 min。如为浑浊溶液，可取适量离心(5000 rpm， 5 min)，取上清液经0.22um微孔滤膜过滤，滤液作为待测溶液，并尽快测定。 2.2混合标准溶液制备 以乙乙：水(1：1)做溶剂，配制不同浓度的校准曲线溶液，浓度分别为0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0和2.0mg/L(以p-苯二胺计)。 样品前处理 3.1MRM色谱图 分析32种染发组分的方法，由于正离子模式和负离子模式选用的流动相不同，因此是正负模式分开检测，图1(上图)为正离子模式，有24种化合物，图1(下图)为负离子模式，有8种化合物；具体化合物 ID 如图1所示。 图1 32种染发组分标准溶液 MRM色谱图(0.02mg/L， 峰ID号同表2；上图是正模式，下图是负模式) 3.2标准曲线 按1.2分析条件测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法校准曲线((部分化合物的校准曲线见图2)，32种染发组分在相应线性浓度范围内，相关系数在 0.9981~0.9999 之间，各浓度点的回读准确度在81.7%~112.7%之间，线性相关性良好，其线性方程、相关系数及仪器检出限见表3。 图2部分染发组分标准曲线 表332种染发组分标准曲线参数 3.3精密度 用不同浓度的混合标准溶液依次进样，每个浓度平行测定6次，考察仪器的精密度。结果显示，32种染发组分在各浓度下的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.02%~0.77%和0.95%~8.54%之间，结果表明仪器测试的精密度高(见表4)。 表4保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 3.4实际样品测试 测试某品牌染发剂，检测出3种化合物，其中m-氨基苯酚和2-氨基-3-羟基吡啶是产品上标识出添加的化合物，2-氨基-3-羟基吡啶是未标识出的，但是检出浓度为 1.64 ug/g， 小于标准规定的检出限(25ug/g)。因此，检测的成分与产品标识基本吻合。具体结果如图3和表5所示。 Q109.05>92.10 (+) 1.21e4 100.00 R185.33%(94.91) R2 25.15% (93.46) RT=2.464 % m-苯二胺 0.00 1.50 1.75 2.00 2.25 ·2.50 2.75 3.00 3.25 RT (min) 图3实际样品 MRM色谱图(正模式) 表5实际样品测试结果 编号 化合物名称 样品浓度(ug/g) 测定的定性离子比例 定性离子偏差范围 110.05>65.10 50.98 48.82-73.23 4 m-氨基苯酚 3783.7 110.05>39.10 32.79 24.83-41.38 21 2-氨基-3-羟基吡啶 7420.4 111.05>66.10 83.19 66.64-99.96 1.64 109.05>65.10 85.33 71.92-107.88 17 m-苯二胺 109.05>39.10 25.15 20.19-33.64 3.5基质加标实验 称取多份染发膏样品各0.5g，分别添加32种染发组分标准溶液，参考2.1前处理，制备出浓度为2 ug/g、10 ug/g的加标样品。每个浓度平行3个，计算32种染发组分在各浓度下的平均加标回收率(见表6)。结果显示，不同基质加标浓度的回收率范围在50.4%-110.1%之间，相对标准偏差在0.14%-11.85%。 图4 10ug/g样品加标样的MRM色谱图(峰ID号同表6，上图是正模式，下图是负模式) 表632种染发组分加标回收率((rn=3) 编号 化合物名称 加标2ug/g 加标10 ug/g 回收率% RSD% 回收率% RSD% p-苯二胺 90.0 4.60 101.5 5.11 p-氨基苯酚 78.5 3.13 95.7 2.67 甲苯-2，5-二胺硫酸盐 89.5 4.79 104.6 4.60 m-氨基苯酚 110.5 3.41 106.9 3.91 5 o-苯二胺 98.4 4.88 100.2 4.19 6 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 98.1 5.39 110.8 5.41 ( o-氨基苯酚 110.1 1.32 108.6 3.48 间苯二酚 88.1 4.16 95.9 4.22 2-硝基-p-苯二胺 102.2 2.22 122.8 5.13 10 甲苯-3，4-二胺 95.7 1.90 105.8 1.51 11 4-氨基-2-羟基甲苯 88.8 1.99 95.8 8.49 12 2-甲基雷琐辛 96.3 2.32 97.5 8.66 13 6-氨基-m-甲酚 94.0 5.62 96.1 13.07 14 苯基甲基吡唑啉酮 93.8 7.62 94.4 11.85 15 N，N- 二乙基甲苯-2，5-二胺HCI 99.2 0.14 106.7 2.37 16 4-氨基-3-硝基苯酚 83.2 1.55 94.8 5.87 17 m-苯二胺 102.3 3.32 103.0 4.27 18 2，4-二氨基苯氧基乙醇 HCl 93.4 1.49 103.5 3.90 19 氢醌 -- -- 82.2 5.84 20 4-氨基-m-甲酚 94.6 1.99 101.0 6.18 21 2-氨基-3-羟基吡啶 105.9 1.81 106.9 1.23 22 N，N-双(2-羟乙基)-p-苯二胺硫酸盐 93.0 1.45 95.2 3.55 23 p-甲基氨基苯酚硫酸盐 97.5 1.47 101.6 10.36 24 4-硝基-0-苯二胺 85.9 8.22 104.5 7.18 25 2，6-二氨基吡啶 95.5 2.21 103.5 3.81 26 N，N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐 99.9 0.70 105.0 1.68 27 6-羟基吲哚 96.3 4.54 95.8 5.89 28 4-氯雷琐辛 81.6 5.07 88.6 14.73 29 2，7-萘二酚 67.9 3.09 93.2 10.46 30 N-苯基-p-苯二胺 82.4 1.23 98.5 4.34 31 1，5-萘二酚 50.0 7.58 63.4 11.10 32 1-萘酚 62.4 1.27 76.2 12.21 结论 本文使用岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8045 建立测定化妆品中对苯二胺等32种染发组分的分析方法。该方法中32种染发组分标准曲线，其相关系数在0.9981~0.9999 之间，各浓度点的回读准确度在81.7%~112.7%之间，线性相关性良好。稳定性考察中，32种组分的保留时间相和峰面积的相对标准偏差分别在 0.02%~0.77%和0.95%~8.54%之间，仪器精密度良好。2 ug/g、10 ug/g 基质加标浓度的回收率范率在50.4%-110.1% 之间，相对标准偏差在0.14%-11.85%，符合化妆品实际测试情况。经过验证， LC-MS/MS 作为32种染发组分定性确证方法，满足标准检测需要，可为化妆品质量监测等相关行业的从业业员参考使用。 岛津应用云 本文使用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8045建立测定化妆品中对苯二胺等32种染发组分的分析方法。该方法中32种染发组分标准曲线，其相关系数在0.9981~0.9999之间，各浓度点的回读准确度在81.7%~112.7%之间，线性相关性良好。稳定性考察中，32种组分的保留时间相和峰面积的相对标准偏差分别在0.02%~0.77%和0.95%~8.54%之间，仪器精密度良好。2 μg/g、10 μg/g基质加标浓度的回收率范围在50.4%-110.1%之间，相对标准偏差在0.14 %-11.85%，符合化妆品实际测试情况。经过验证，LC-MS/MS作为32种染发组分定性确证方法，满足标准检测需要，可为化妆品质量监测等相关行业的从业人员参考使用。