羟基乙酸的含量测定 高效液相色谱法

一、摘要本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定客户样品中羟基乙酸的含量。色谱条件：C18 色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为0.8mL/min，柱温为25℃，进样量为10μL，检测波长为218nm。实验结果：羟基乙酸的理论塔板数为9748；羟基乙酸的仪器检出限为0.002 mg/mL，仪器定量限为0.005 mg/mL；羟基乙酸在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.9999；样品1中羟基乙酸的含量为0.11mg/mL，样品2中羟基乙酸的含量为17.75mg/mL，样品3中羟基乙酸的含量为1.93mg/mL，样品4中羟基乙酸的含量为70.10mg/mL，样品5中未检出羟基乙酸。对样品5进行加标实验，加标回收率为97.5%。二、实验过程1 原理羟基乙酸在218nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法测定，外标法定量。2 试剂与材料2.1水：符合GB/T 6682的一级水；2.2甲醇（CH3OH）：色谱纯；2.3磷酸（H3PO4）：色谱纯；2.4磷酸水溶液（pH=3.00）：量取1L水，用磷酸（2.3）调pH至3.00；2.5溶剂：甲醇+磷酸水溶液（pH=3.00）=20+80，将10mL甲醇（2.2）与40mL磷酸水溶液（pH=3.00）（2.4）混合，摇匀备用；2.6羟基乙酸标准品：客户提供；2.7样品1~样品5；客户提供。3 仪器与设备3.1高效液相色谱仪：具体配置包括：Wooking K2025 P2二元高压输液泵（脱气机、四通道溶剂切换阀、自动在线清洗系统）；Wooking K2025 AS自动进样器（脱气组件、50μL定量环）；Wooking K2025 CO柱温箱（室温以下10℃至85℃）；Wooking K2025 UVD紫外-可见光检测器；Wookinglab色谱工作站（中文版）。3.2涡旋振荡器；3.3超声波清洗机；3.4 pH计：精确到0.01 pH单位。LC-K2025-01-220908 K2025 C18 4.6×250m m 5pm 0.8mL/min 25 10pL 218nm 9748 0.002 mg/mL 0.005 mg/mL R 0.9999 1 0.11mg/mL 2 17.75mg/mL 3 1.93mg/mL 4 70.10mg/mL 5 5 97.5% 218nm 2 2.1 GB/T 6682 2.2 CH：OH 2.3 H3PO4 2.4 pH=3.00 1L 2.3 pH 3.00 2.5 十 pH=3.00 =20+80 10mL 2.2 40mL pH=3.00 2.4 2.6 2.7 1~ 5 3 3.1 Wooking K2025 P2 Wooking K2025 AS 50pL Wooking K2025 CO 10 85 Wooking K2025 UVD Wookinglab 3.2 3.3 3.4 pH 0.01 pH 4 4.1 4.1.1 2.6 2.5 10mg/mL 4.1.2 2 2.5 0.1mg/mL 0.2 mg/mL 0.5 mg/mL 1.0mg/mL 2.0 mg/mL 5.0 mg/mL 4.2 a ChromCore AQ C18 4.6×250mmn55um b 2.2 A pH=3 .00 2.4 B A：B=20：80； C 10pL d 25 e 218nm 5 5.1 4.1.2 4.21.0mg/mL 1 1 0.1 mg/mL 2 1 1.0mg/mL 1 1.0mg/mL 9748 2 mg/mL S/N LOQ LOD mg/mL mAU mAU mg/mL 0.1 2.850 0.015 190.0 0.002 0.005 2 0.002 mg/mL 0.005 mg/mL 3 3 4 5.2 1~ 4 2.5 10 52.5 1.0mg/mL 1~ 54.2 5 1~ 5 5 5~11 8 3 11 5 1~ 5 5 3 1~ 5 5 min mAU.s mAU / mg/mL 1 5.567 4.499 0.512 10279 1.20 0.011 2 5.550 413.111 49.567 10853 1.23 1.775 3 5.458 46.602 6.773 15896 1.33 0.193 4 5.517 1625.267 160.414 7054 1.12 7.010 5 NA NA NA NA NA NA 5 5.525 227.704 20.146 5468 1.12 0.975 9748 0.002mg/mL 0.005 mg/mL R²20.9999 1 0.11mg/mL 2 17.75mg/mL 3 1.93mg/mL 4 70.10mg/mL 5 5 97.5% K2025 A) Pump Unit 1 62Mpa 2 1L 3 4 5 B) Sample Injector 1 2 2mL 3 4 50pL C) Column Oven 1 10 85 2 ChromCore AQ C18 4.6x 250mm55um D) Detector 1 一 E) Workstation 1 Wookinglab Wooking K2025