LC-MS/MS测定化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺

本文利用岛津公司的三重四极杆液质联用仪，参照GB/T 41683-2022《化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺的测定 高效液相色谱-串联质谱法》，建立了化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺的测定方法。本方法灵敏度较高、重现性较好，能有效检测化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺含量。SSL-CA23-170Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-775 LC-MS/MS 测定化妆品中秋水仙碱及其衍 生物秋水仙胺 LCMSMS-775 摘要：本文采用岛津三重四极杆液质联用仪，建立了 一 种化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺的测定方法 。结果表明，秋水仙碱及秋水仙胺的线性关系良好，秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺的检测限为 3 ug/kg (低 于 标准 要求的检测限 10 ug/kg)， 定量限为 10 ug/kg。标准溶液重复进样6针，保留时间和 峰 面积重复性良好。加标 回收实验 中，各组分回收及精密度良好，可满足检测要求。 关键词：三重四极杆液质联用仪秋水仙碱 秋水仙胺 化妆品 技术特点： 必可应对 GB/T 41683-2022《化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺的测 定 》必检出限优于标准要求。 秋水仙碱，是从百合科秋水仙的秋茎和种子中提 取的一种卓酚酮类生物碱，具有抑制作用和抗炎作用，为高效抗痛风药，临床应用已有200多年历史，用于 治疗关节疼痛和痛风。秋水仙碱的刺激性及 毒 性 较大，具有恶心、呕吐、食欲减退、腹痛、发热、心悸、脱发、重症肌无力、及骨髓抑制等毒副作用。秋水仙胺，是秋 水仙碱的衍生物，其作用机制与秋水仙碱相似，毒 性比 秋水仙碱低。我国在《化妆品安全技术规范》中将秋水 仙碱及其盐类和衍生物列为化妆品的禁用成分。目前， 市场上宣称纯天然植物提取的化妆品越来越多，很多化 妆品中都含有草本萃取液，，可能引入秋水仙碱类物质。因此对化妆品中的秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺进行监 测 是必要的。 本文根据 GB/T 41683-2022《化妆品中秋水仙碱及 其衍生物秋水仙胺的测定》，使用岛津三重四极杆液质 联用仪 LCMS-8060，通过液体超声提取法，建立了化 妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺 的 检测方法，供检 测人员参考。 1.1仪器配置 本文使用岛津 LCMS-8060 三 重四极杆液质联用仪，配置信息如下： 系统控制器：CBM-20A 脱 气 机 1：DGU-20A5R 输液 泵 Q：：LC-30AD×2自动进样器 ：SIL -30ACMP 柱温 箱：CTO-20AC 质谱检测器 LCMS-8060 色谱工作站： LabSolutions Ver. 6.102 1.2分析条件 本文使用岛津 LCMS-8060 三重四极杆液质联用仪，配置信息如下： 色 谱 柱： Shim-pack Velox C18(100 mm x2.1 mm l.D.，2.7 um， 岛津(上海)实验器材有 限公司， P/N： 227-32009-03) 流 动 相 目： A 相 -5mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸))：；B相-甲醇 流 柱 速： 0.3 mL/min 进 样 量： 5pL 温 品： 40℃ 洗脱方式： 梯度洗脱，B相初始浓度为10%，详见表1 表 1 梯度洗脱程序 时间 (min) 单元 处理命令 值 0.00 泵 B Conc 10 6.00 泵 B Conc 95 6.5 泵 B Conc 10 10.00 泵 B Conc 10 10.00 控制器 STOP 质谱条件： 扫描模式：多反应监测(MRM) 离 子 源：ESI(+) 接口电压：4.0kV 雾化气流速：33 L/min 加热模块 温 度：3350℃加热气流速：5.0 L/min DL温 度：250℃干燥气流速：55.0 L/min 接口温度：300°℃MRM 参 数： 详见表2 表2 MRM 参数 NO. 化合物名称 前体离子 产物离子 Q1PreBias(V) CE(V) Q3PreBias(V) 1 秋水仙碱 400.0 358.0* -19.0 -23.0 -23.0 310.0 -11.0 -29.0 -19.0 2 秋水仙胺 372.0 310.0* 341.0 -10.0 -23.0 -19.0 -23.0 -19.0 -21.0 注：*表示定 量离 子 1.3标准溶液的配置 1.3.1标准储备液 (1000ug/mL) 准确称取秋水仙碱和秋水仙胺各10.0 mg， 置于10mL容量瓶中，分别用无水乙 醇 溶解并定容至刻度，-30℃保存于密封棕色瓶中。 1.3.2混合标准储备液(1000ng/mL) 准确吸取各标准储备液(1.3.1) 0.1 mL于 100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，-30℃保存于密封 棕色瓶中。 1.3.3混合标准使用液 准确吸取混合标准中间液(1.3.2)适量，于5个10 mL容量瓶中，分别用按照1.4样品前处理方法得到的 空白样品提取液进行定容，此混合标准使用液系列中秋水仙碱及秋水仙胺的浓度分别为：0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、3.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL 。 1.4样品前处理方法 参照《化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺的测定高效液相色谱-串 联 质谱法》 (征求 意 见稿 高 )) 图 1 前处理流程图 ■结果与讨论 2.1标准溶液色谱图 秋水仙碱和秋水仙胺的标准溶液 MRM 色谱图如图2所示，相关化合物信息见表3。 图2秋水仙碱和秋水仙胺标准溶液MRM色谱图) 表3秋 水 仙 碱和秋水仙胺信息 NO. 中文名称 英文名称 CAS 号 保留时间 (min) 1 秋水仙碱 Colchicine 64-86-8 4.160 2 秋水仙胺 Demecolcine 477-30-5 3.301 2.2线性范围、检测限和定量限 按照1.3配 制 成各浓度标准溶液，以各目标物浓度为横坐标，目标物峰面积为纵坐标，以外标法绘制 标 准曲线，所得校准曲线线性关系良好，线性 相 关系数r大于0.999。曲线结果如下图3，线性方程及相关系数如下表4所示。 表4 校准曲线参数 NO. 化合物名称 线性范围 (ng/mL) 相关系数(r) 准确度 (%) 检测限 (ug/kg) 定量限 (ug/kg) 1 秋水仙碱 0.5~10 0.9998 83.2-102.6 3 10 2 秋水仙胺 0.5~10 0.9998 97.7-112.0 3 10 图3 秋水仙碱和秋水仙胺校正曲线 2.3重复性考察 配 制浓度为 0.5 ng/mL的标准溶液，连续进样6次，考察分析方法保留时间和峰面积的重复性 。结果表明：保留时间的RSD% 均小于1.0%；峰面积的RSD%均小于10.0%，方法重复性良好，仪器精密度良好。结果见表5。 表5 重 复性 测 试(n =6) NO. 化合物名称 峰面积RSD(%6)) 保留时间 RSD(%) 1 秋水仙碱 2.81 0.06 2 秋水仙胺 3.09 0.07 2.4加标回收实验 按照1.4步骤中制备样品和加标样品，三个水平加标浓度(10 ug/kg、20 ug/kg、100 ug/kg) 如下表6所示。测试结果显 示 ：各水 平 的加标回收率在96.7%~118.9%之间，相对标准偏差 RSD%在1.44%~6.85%之间。 表6样品加标实验结果(n=6) NO. 化合物名称 样品量 (ng/mL) 10 pg/kg 20 ug/kg 100 ug/kg 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 1 秋水仙碱 N.D. 104.8 6.85 103.1 4.29 115.1 1.80 2 秋水仙胺 N.D. 115.8 1.44 112.9 2.98 116.5 2.00 N.D .：表示未检出。 结论 本文利用岛津公司的三重四极杆液质联用仪，参照 GB/T 41683-2022《化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺 的测定高效液相色谱 -串联质谱法》，建立了化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺 的 测定方法。本方法灵敏度 较高、重 现性较好，能有效检测化妆品中秋水仙碱及其衍生物秋水仙胺含量。 岛津应用云