用电热恒温水浴锅做牛乳中酪蛋白的分离提取

【实验要求】练习并掌握常见化学实验仪器的使用方法；蛋白质的性质；练习用沉淀法提取分离牛奶中的酪蛋白。【实验器材】分析天平，电热恒温水浴锅，离心机，干燥箱，脱脂乳或脱脂奶粉，醋酸﹣醋酸钠缓冲溶液（ PH =4.7),95％乙醇，乙醚等。【实验原理】牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/ l 。酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙磷酸钙复合体胶粒存在，胶粒直径约为20~800纳米，平均为100纳米。在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点 PH =4.7时，酪蛋白沉淀。【实验内容】将牛奶至于电热恒温水浴锅中加热至40℃，在烧杯中加入10ml牛奶，再加入10ml40℃, PH =4.7的醋酸﹣醋酸钠缓冲溶液，用 PH 精密试纸检验液体的 PH 值。静置冷却至室温，将悬浮液分别装入两支离心试管中，用转速为3000转／分离心分离10分钟，倾出上层清液，（合并于上一清液中），得酪蛋白粗品。于离心管中加入5ml蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），离心后弃去上层液，再用蒸馏水洗一次。于试管中加入15ml95％乙醇，充分搅拌，离心后弃去乙醇溶液，用乙醇洗涤主要是除去磷脂类物质。最后再用15ml乙醚以同样方法洗涤，以除去脂肪类物质。将酪蛋白沉淀物凉干，称重、并计算得率。【注意事项】1、用醋酸缓冲液进行调节 pH 时，醋酸不可加过量；2、使用乙醚进行洗涤时应选通风橱内进行操作。