涡旋振荡器在藻类脂肪酸的测定 气相色谱法试验中的作用

涡旋振荡器在藻类脂肪酸的测定 气相色谱法试验中的作用（根据中华人民共和国海洋行业标准HY/T 228-2018）一、原理脂肪酸是指一端含有一个羧基 的长的脂肪族碳氢链，是有机物，直链饱和脂肪酸的通式是C(n)H(2n+ 1)COOH，低级的脂肪酸是无色液体，有刺激性气味，高级的脂肪酸是蜡状固体，无可明显嗅到的气味。脂肪酸是最简单的一种脂，它是许多更复杂的脂的组成成分。脂肪酸在有充足氧 供给的情况下，可氧化分解为CO2和H2O，释放大量能量，因此脂肪酸是机体 主要能量来源之一。藻类样品中的脂肪酸，经氢氧化钠甲醇溶液皂化和盐酸甲醇溶液甲酯化，经正己烷提取后，用气相色谱法测定。二、使用试剂1. 氢氧化钾2. 盐酸3. 氯化钠4. 正己烷5. 甲醇6. 无水硫酸钠：400℃灼烧4h，冷却后密闭保存，有效期1个月三、试剂配制1. 饱和氢氧化钾甲醇溶液：称取40g氢氧化钾溶解在100ml甲醇中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2个月。2. 盐酸甲醇溶液：量取10ml盐酸溶解在110ml甲醇中，混匀，室温下可放置2个月。3. 饱和氯化钠溶液：称取360g氯化钠溶液在1L蒸馏水中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2个月。四、使用仪器1. 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器2. 电热恒温水浴锅3. 电子天平4. 粉碎机5. 具塞离心管6. 容量瓶                                          7. 研钵五、分析步骤1.藻粉的制备 藻类经冷冻干燥24h，干燥后大型藻经过粉碎机粉碎过80目筛2.皂化 用天平称取藻粉约20mg，放入研钵中，准确加入0.2ml十一碳酸甘油三酯内标溶液，加入液氮反复研磨2~3次，每次5min，用6ml饱和氢氧化钾甲醇溶液分2~3次将研磨后的藻粉转移至具塞离心管中，混匀。将离心管放入60℃JULABO PURA22通用水浴槽内加热处理60min，每隔10min取出振荡5~10s，处理结束后取出离心管冷却至室温。3.甲基化 皂化后的试样加入4ml 1mol/L盐酸甲醇溶液混匀，将离心管放入60℃水浴锅内加热处理20min，每隔10min取出振荡5~10s，处理结束后取出离心管冷却至室温。4.萃取 甲基化后的试样准确加入1ml正己烷，加入3ml饱和氯化钠溶液，将管盖拧紧，用WIGGENS Vortex 3000 Elite涡旋振荡器2min，静置3~5min待溶液分层后，取大约0.5ml上层正己烷，用无水硫酸钠脱水后进行气相色谱分析。六、仪器测试条件取单个脂肪酸甲酯标准溶液和脂肪酸甲酯混合标准溶液分别注入气相色谱仪，对色谱峰进行定性。色谱分析条件如下：1. 色谱柱：毛细管色谱柱涂层为键合/交联聚乙醇，涂层厚度0.25um，内径0.25mm，长度为30m。2. 载气：高纯度氢气 1.5mL/min3. 氢气：高纯 30mL/min4. 空气：高纯 300mL/min5. 尾吹：高纯氮气 35mL/min6. 检测器温度：300℃7. 进样口温度：250℃8. 进样量：1um9. 进样方式：无分流进样10. 升温程序：初温50℃，保持5min，25℃/min升到180℃，1℃/min升到190℃，保持10min，1℃/min升到205℃，保持10min，20℃/min升到240℃，保持5min。七、结果计算1.单个脂肪酸甲醇含量2.归一化法                                                                                      八、注意事项1. 十一碳酸甘油三酯内标溶液，冰箱4℃避光冷藏保存，有效期1个月2. 单个脂肪酸甲酯标准溶液，贮存于-20℃冰箱，有效期1个月3. 混合脂肪酸甲酯标准溶液，贮存于-20℃冰箱，有效期3个月涡旋振荡器在藻类脂肪酸的测定气相色谱法试验中的作用 (根据中华人民共和国海洋行业标准 HY/T 228-2018) 一、原理 脂肪酸是指一端含有一个羧基的长的脂肪族碳氢链，是有机物，直链饱和脂肪酸的通式是 C(n)H(2n+ 1)COOH， 低级的脂肪酸是无色液体，有刺激性气味，高级的脂肪酸是蜡状固 体，无可明显嗅到的气味。脂肪酸是最简单的一种脂，它是许多更复杂的脂的组成成分。脂 肪酸在有充足氧供给的情况下，可氧化分解为 CO2和H2O， 释放大量能量，因此脂肪酸是 机体主要能量来源之一。 藻类样品中的脂肪酸，经氢氧化钠甲醇溶液皂化和盐酸甲醇溶液甲酯化，经正己烷提取后，用气相色谱法测定。 二、使用试剂 1.氢氧化钾 2.盐酸 3.氯化钠 4正己烷 甲醇 6.无水硫酸钠：400℃灼烧4h，冷却后密闭保存，有效期1个月 三、试剂配制 1.饱和氢氧化钾甲醇溶液：称取40g 氢氧化钾溶解在100ml甲醇中，搅拌溶解，澄清备 用，室温下可放置2个月。 2.盐酸甲醇溶液：量取10ml盐酸溶解在110ml甲醇中，混匀，室温下可放置2个月。 3.饱和氯化钠溶液：称取360g氯化钠溶液在 1L蒸馏水中，搅拌溶解，澄清备用，室温下 可放置2个月。 四、使用仪器 1.气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器 2.电热恒温水浴锅 3.电子天平 4.粉碎机 5.具塞离心管 6.容量瓶 五、分析步骤 1.藻粉的制备藻类经冷冻干燥 24h，干燥后大型藻经过粉碎机粉碎过80目筛 2.皂化用天平称取藻粉约20mg， 放入研钵中，准确加入0.2ml 十一碳酸甘油三酯内标溶 液，加入液氮反复研磨2~3次，每次 5min， 用6ml饱和氢氧化钾甲醇溶液分2~3次将研 磨后的藻粉转移至具塞离心管中，混匀。将离心管放入 60℃JULABO PURA22 通用水浴 槽内加热处理 60min， 每隔10min 取出振荡5~10s，处理结束后取出离心管冷却至室温。 3.甲基化皂化后的试样加入 4ml 1mol/L盐酸甲醇溶液混匀，将离心管放入60℃水浴锅内 加热处理 20min， 每隔 10min 取出振荡5~10s， 处理结束后取出离心管冷却至室温。 4.萃取甲基化后的试样准确加入1ml正己烷，加入3ml 饱和氯化钠溶液，将管盖拧紧，用 WIGGENS Vortex 3000 Elite 涡旋振荡器 2min， 静置3~5min 待溶液分层后，取大约 0.5ml上层正己烷，用无水硫酸钠脱水后进行气相色谱分析。 六、仪器测试条件 取单个脂肪酸甲酯标准溶液和脂肪酸甲酯混合标准溶液分别注入气相色谱仪，对色谱峰进行 定性。色谱分析条件如下： 1. 色谱柱：毛细管色谱柱涂层为键合/交联聚乙醇，涂层厚度 0.25um， 内径0.25mm，长度为 30m。 2. 载气：高纯度氢气 1.5mL/min 3. 氢气：高纯 30mL/min 4. 空气：高纯300mL/min 5. 尾吹：高纯氮气 35mL/min 6. 检测器温度：300℃ 7. 进样口温度：250℃ 8. 进样量：1um 9. 进样方式：无分流进样 10.升温程序：初温50℃，保持5min， 25℃/min 升到180℃， 1℃/min 升到190℃，保 持 10min， 1℃/min 升到205℃， 保持10min， 20℃/min 升到240℃， 保持5min。 七、结果计算 1.单个脂肪酸甲醇含量 藻类 样 品中某个脂肪酸甲 酯 组 分 的百分比 按 式(3)计 算，通 过测定相应峰面 积 对所 有 成分峰面 积 总 和 的百 分数来 计 算给定组分i 的 含量。 用归一化法计算出脂肪酸甲酯 组 分的百分含量，以 占脂肪酸甲酯总量的 百 分 比表 示，按式(3)计算： 式中： Y ，——藻类 中脂 肪酸甲酯i组分的百分含量； A，——藻类 中 脂肪酸甲酯i组分 的 峰面 积 。 2.归一化法 根 据 被测物 和 内 标 物的质量及在色谱图上 相 应的 峰面 积 比，由 校 正因 子 按式(1)计 算单 个 脂肪酸甲 酯的含量： 式中： X ——藻类中脂肪酸甲酯：组分的含量，单位为毫克/克 (m g /g)；W A A F ——藻类的质量，单 位为毫克 (m g)； ——样品 中 加 人 内 标 物的质量 ，单位为微克(pg)； ——内 标 物的峰面积 ； ——藻类 中 脂肪酸甲酯：组分的峰面 积： ——相对校 正 因子。 1.0067—十一碳酸甘油三酯转 化成 十一碳酸甲 酯 的 转 换系数。 八、注意事项 1.十一碳酸甘油三酯内标溶液，冰箱4℃避光冷藏保存，有效期1个月 2.单个脂肪酸甲酯标准溶液，贮存于-20℃冰箱，有效期1个月 3.混合脂肪酸甲酯标准溶液，贮存于-20℃冰箱，有效期3个月