蛋白质中去折叠现象检测方案(紫外分光光度计)

使用紫外/可见光光谱法监测蛋白质去折叠版权所有◎2020珀金埃尔默公司。保留所有权力。 PerkinElmer@是珀金埃尔默公司的注册商标。所有其他商标属于相应所有者的财产。 使用紫外/可见光光谱法监测蛋白质去折叠 本应用指南展示了带珀金埃尔默附件的珀金埃矣默LAMBDA 365+和UVWinLab监测温度升高和降低时蛋白质去折叠与折叠的能力。 简介 α-胰凝乳蛋白酶原是胰凝乳蛋白酶的前本或酶原。胰凝乳蛋白酶的作用是在消化道中将蛋白质分解成更小的肽。胰凝乳蛋白酶还具有一种有趣的特性，即当因热变性而去折叠时，它能够在冷却回室温后再折叠。 实验 用10 mM NaCl缓冲液稀释a-胰凝乳蛋白酶原，获得0.5 mg/mL溶液(用1M HCI调至pH 3.0)。然后，使用带珀金埃尔默附件的珀金埃尔默LAMBDA@365+进行测量。为了确定监测变性阶段的正确波长，在25℃和85℃下， 在200-500 nm之间测量两份样品溶液。将得到的两个光谱相减，以确定差异最大的波长。使用该波长监测一定温度范围内的变性。所用的温度升降条件如表1所示。 表1：用于胰凝乳蛋白酶原分析的温度升降条件。 温度范围(C) 升温速率 (C/min) 25-45 5 45-65 1 65-85 5 结果和讨论 珀金埃尔默UV WinLab TM允许对珀金埃尔默附件进行软件控制，包括使用多吸收池转换器的选项。UV WinLab还能提供实时温度与吸光度数据的关系曲线。胰凝乳蛋白酶原的加热和冷却结果如图1所示。 总结 带珀金埃尔默附件的紫外/可见光谱仪可用于监测生物和生物制药样品随温度的变化。UV WinLab允许对附件进行完全的软件控制，并且便于数据分析。 ( 参考 ) ( 1. S. T . Freer， J. Kraut， J . D. Robertus， H . T. Wright，N . H.Xuong， Biochemistry， 1970，9，1997-2009 ) 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司地址：上海张江高科技园区张衡路1670号邮编：201203电话：021-60645888传真：021-60645999 www.perkinelmer.com.cn 欲获悉全球办事处的完整清单，请登录www.perkinelmer.com/ContactUs 带珀金埃尔默附件的紫外/可见光谱仪可用于监测生物和生物制药样品随温度的变化。UV WinLab允许对附件进行完全的软件控制，并且便于数据分析。