干辣椒中天然辣椒素、二氢辣椒素含量检测方案(氨基酸分析仪)

SSL-CA22-113Excellence in Science Excellence in ScienceLC-288 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 液相色谱法测定干辣椒中天然辣椒素和二氢辣椒素含量 LC-288 摘要：本文参照食品国家标准 GB/T 21266-2007，利用岛津液相色谱仪 LC-16分析了干辣椒制品中辣椒素类物质(天然辣椒素和二氢辣椒素)含量。标准品在10~200 pg/mL浓度范围内线性良好，相关系数大于0.999。天然辣椒素、二氢辣椒素检出限分别为：0.148 ug/mL、0.215 ug/mL(标准规定≤1ug/mL)。标准品溶液连续进样6针，保留时间和峰面积RSD 均小于2%，精密度良好。样品加标回收率在95.2~102.2%，方法可靠。 关键词：HPLC干辣椒 辣椒素 二氢辣椒素 辣椒 (pepper) 是茄科 (Solanaceae) 辣椒属，能结辣味浆果的一年生或者多年生的草本植物，辣椒对口腔及胃肠有刺激作用，能增强肠胃蠕动，促进消化液分泌，改善食欲等。辣椒果实所含辛辣成分主要有：辣椒素、二氢辣椒素、降二氢辣椒素、高辣椒素、高二氢辣椒素。天然辣椒素和二氢辣椒素的含量约占 辣椒素类物质总量的90%，是影响辣度最主要的成分。本文参照食品国家标准 GB/T 21266-2007，利用岛津液相色谱仪LC-16 建立了干辣椒中辣椒素类物质(天然辣椒素和二氢辣椒素)含量测定方法，并测定了市售干辣椒样品。结果显示，该方法操作方便，稳定可靠，供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 LC-16 高效液相色谱系统，具体配置： 自动进样器： SIL-16 输液泵：LC-16×2 检测器：SPD-16 木温箱：CTO-16色谱工作站： LabSolutions Version 5.106 SP1 脱气机： DGU-20A5R 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 250×4.6 mml.D.， 5 um， 岛津(上海)实验器材有限公司， P/N：227-30017-08 流动相：甲醇：水(65：35，V/V) 流速： 1.0 mL/min 柱温：30C 进样体积：10uL 波 长 ： 2 8 0 n m 波长：280nm 1.3标准品配制和样品前处理 1.3.1标准溶液配制 辣椒素类物质标准储备液：精密称取天然辣椒素0.0196 g(含量为99.94 %)、二氢辣椒素 0.0185 g( 含量为99.18%)，以甲醇溶解并定容至100mL， 具体配制浓度见表1。 表1 标准溶液配制表((ug/mL) 化合物 浓度1 浓度2 浓度3 浓度4 浓度5 浓度6 浓度7 天然辣椒素 9.794 19.588 39.176 58.764 78.352 97.940 195.880 二氢辣椒素 9.174 18.348 36.696 55.044 73.393 91.740 183.480 1.3.2样品前处理 结果 2.1标准品谱图 按照1.2中分析条件进行测定，标准品色谱图如图1所示。 图1 标准品色谱图(天然辣椒素 0.9794 ug/mL，二氢辣椒素0.9174 ug/mL) 2.2线性关系 按表1配制标准系列溶液，按1.2色谱条件上机分析。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，外标法绘制校准曲线。校准曲线线性关系良好，相关系数大于0.999，准确度在98.0~103.7%之间。检出限、定量限使用LabSolutions 软件计算，结果如表2所示。 表2 校准曲线、检出限和定量限结果 化合物 线性范围 校准曲线 准确度 相关系数 检出限 定量限 (ug/mL) (%) (ug/mL) (ug/mL) 天然辣椒素 9.794-195.88 Y=(6229.64)X+(-7125.04) 98.0-101.4 0.9999 0.148 0.493 二氢辣椒素 9.174-183.48 Y=(5880.58)X+(-8193.31) 98.1-103.7 0.9999 0.215 0.716 图225天然辣椒素校准曲线图 图3 二氢辣椒素校准曲线图 2.3精密度 取校准曲线最低浓度点，重复进6针，精密度结果见表3。目标物保留时间和峰面积的 RSD 均小于2%，仪器精密度良好。 表3 精密度结果 序号 化合物 保留时间RSD(%) 面积RSD (%) 天然辣椒素 0.72 1.55 2 二氢辣椒素 0.74 0.74 2.4回收率 取干辣椒样品适量，添加加准样品，按照1.3.2进行样品前处理，配制成三个不同浓度的加标样品，各加标样品平行测定2次，天然辣椒素加标回收率在98.1~102.2%之间，二氢辣椒素加标回收率在 95.2~100.8%之间，方法可靠。加标回收结果如表4所示。 表4 样品加标回收结果 序号 化合物名称 样品浓度 (ug/mL) 加标浓度 (ug/mL) 加标样品浓度均 值(ug/mL) 加标回收率 (%) 19.588 29.591 102.2 1 天然辣椒素 9.563 39.176 48.743 100 97.94 105.666 98.1 18.348 24.741 100.8 2 二氢辣椒素 6.246 36.696 41.178 95.2 91.74 94.51 96.2 2.5实际样品分析 按照1.3.2前处理方法，分别对六份市售干辣椒样本进行测定，结果见图4和表5所示。 mV(x10) 图4 某辣椒样本中天然辣椒素和二氢辣椒素 HPLC 色谱图 表56份实际辣椒样本分析结果((ug/g) 序号 化合物 样品1 样品2 样品3 样品4 样品5 样品6 1 天然辣椒素 418.65 464.64 646.94 679.79 609.46 574.50 2 二氢辣椒素 354.74 319.63 393.82 444.01 440.18 400.18 结论 本文参考 GB/T 21266-2007 采用高效液相色谱仪建立了干辣椒制品中辣椒素类物质(天然辣椒素和二氢辣椒素)含量测定方法。天然辣椒素、二氢辣椒素采用外标法定量，标准曲线相关系数大于0.999， 准确度在98.0~103.7%之间，检出限分别为：0.148 ug/mL、0.215 ug/mL(标准规定≤1 ug/mL)。目标物保留时间和峰面积的 RSD 均小于2%，精密度良好。天然辣椒素加标回收率在98.1~102.2%之间，二二氢辣椒素加标回收率在95.2~100.8%之间，本方法适合用于干辣椒制品中天然辣椒素和二氢辣椒素的含量测定。 岛津应用云 本文参考GB/T 21266-2007采用高效液相色谱仪建立了干辣椒制品中辣椒素类物质（天然辣椒素和二氢辣椒素）含量测定方法。天然辣椒素、二氢辣椒素采用外标法定量，标准曲线相关系数大于0.999，准确度在98.0~103.7 %之间，检出限分别为：0.148 μg/mL、0.215 μg/mL（标准规定≤1 μg/mL）。目标物保留时间和峰面积的RSD均小于2 %，精密度良好。天然辣椒素加标回收率在98.1 ~102.2 %之间，二氢辣椒素加标回收率在95.2 ~100.8 %之间，本方法适合用于干辣椒制品中天然辣椒素和二氢辣椒素的含量测定。