食品中蔗糖检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 美析仪器MACYLAB INSTRUMENTTEL-400-616-4686 酶一比色法测定食品中的蔗糖 引言在食品生产中，测定蔗糖的含量可以判断食品加工原料的成熟度，鉴别白糖、蜂蜜等食品原料的品质，以及控制糖果、果脯、加糖乳制品等产品的质量指标。但蔗糖是葡萄糖和果糖组成的双糖，没有还原性，不能用碱性铜盐直接测定，通过一定条件处理，蔗糖水解为具有还原性的葡萄糖和果糖，可以用还原糖测定方法测定蔗糖含量。食品中蔗糖的测定方法除酸水解方法外，还有酶比色法。 酶一比色法的原理 在β一D一果糖苷酶(β一FS)催化下，蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催化β一D一葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D一葡萄糖酸一0内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4一氨基安替吡啉和苯酚生成红色醌亚胺。在波长 505nm 处测定醌亚胺的吸光度，计算食品中蔗糖的含量。本法适用于各类食品中蔗糖的测定，由于β一D一果糖苷酶具有专一性，只能催化蔗糖水解，，不受其他糖干扰，因此比盐酸水解法准确，最低检出限量为 0.04ug/mL。 仪器及试剂 ①分析筛。 ②研或粉碎机。 ③组织捣碎机。 ④恒温水浴锅。 ⑤美析 V1500CPC可见光分光光度计 ⑥微量移液管。 (1)组合试剂 1号瓶：内含β一D一果糖苷酶400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠。 2号瓶：内含0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH-7.0)l00mL，其中含4一氨基安替吡啉 0.00154mol/L。3号瓶：内含0.022mol/L苯酚溶液 200mL。4号瓶：内含葡萄糖氧化酶800U(活力单位)、过氧化物酶2000U(活力单位)。1~4号瓶须在4℃左右保存。 (2)酶试剂溶液 ①将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为66mL， 轻轻摇动，‘使酶完全溶解，此溶液即为β-D果糖苷酶试剂，其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为 0.1mol/L， pH=4.6，在4℃左右保 上海美析仪器有限公司 存，有效期1个月。 ②将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。 ③将4号瓶中的酶溶解在上述混合液中，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解，，即为葡萄糖氧化酶过氧化物酶试剂溶液，在4℃左右保存，有效期1个月。 (3)0.85mOL/L亚铁氰化钾溶液称取3.7g亚铁氰化钾，溶于100mL。重蒸馏水中，摇匀。(4)0.25mOL/L硫酸锌溶液称取 7.7g硫酸锌(ZnSO4-7H2O)， 溶于I00mL 重蒸馏水中，摇匀。(5)氢氧化钠溶液 0.1mOL/L。 (6)蔗糖标准溶液称取经(100±2)℃烘烤 2h 的蔗糖0.4000g，溶于重蒸馏水中，定容至100mL，摇匀。将此溶液 10mL用重蒸馏水稀释至100mL， 即为400g/ mL 蔗糖标准溶液。 标准曲线的绘制 用微量移液管取0、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL蔗糖标准溶液，·分别置于10mL比色管中，各加入 ImLB-D 果糖苷酶试剂溶液，摇匀，在(36±1)℃的水浴锅中恒温20min，取出后加入3mL葡萄糖氧化酶--过氧化物酶试剂溶液，在(36±1)℃的水浴锅中恒温 40min，冷却至室温，用重蒸馏水定容，摇匀。用 1cm比色皿， 以蔗糖标准溶液含量为0的试剂溶液调整分光光度计的零点，在波长505nm处，测定各比色管中溶液的吸光度，以蔗糖含量为纵坐标，下，咖吸光度为横坐标，绘制标准曲线。 试液吸光度的测定 0.20~5.00mL试液(依试液中蔗糖的含量而定)，置于10mL比色管中，加入1mL-BD一果糖苷酶试剂溶液，摇匀，在(36±1)℃的水浴锅中恒温 20min， 取出后加入3mL葡萄糖氧化酶一过氧化物酶试剂溶液，在(36±1)℃的水浴锅中恒温40min， 冷却至室温，用重蒸馏水定容，摇匀。用lcm比色皿，l以等量试液调整分光光度计的零点，在波长505nm处，测定比色管中溶液的吸光度。测出试液吸光度后，以蔗糖含量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线，在标准曲线上查出对应的蔗糖含量。 结果计算 X=C/m*V2/V1*1/1000*1000*100 式中x——样品中蔗糖的质量分数，%； c——在标准曲线上查出的试液中蔗糖的含量，ug； m——试样的质量，g； V1——试液的定容体积， mL。； 上海美析仪器有限公司 V2——-测定时吸取试液的体积， mL。 注意事项 ①本方法对β-D一果糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶有严格的技术要求。酶活力要求如下：β一D果糖苷酶酶活力(U/mg)≥100；葡萄糖氧化酶酶活力(u/mg)≥20；过氧化物酶酶每力(U/mg)≥50。 ②各种酶都不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶和过氧化氢酶。 仪器参数 V-1500CPC 可见分光光度计 仪器特点 *主机中文操作系统，7英寸彩色触摸屏显示 *宽大的触摸屏可显示多组数据，菜单显示，可直接显示图谱 *巨大的内存空间，，可存储多组数据和曲线 *自动调0、调100%功能 *波长自动调节 *滤色片自动切换 *宽大样品池(5mm~100mm) *具有最多十点标样建标准曲线测量功能 *可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量 *可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量 *可断电保存测量设置的标准曲线参数 *配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线 *支持外接U盘存储及传输实验数据 *可通过 PC 软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求 技术指标及基本参数 *光路结构：C-T式 *波长范围： 320~1100nm *光谱带宽： 2nm *波长准确度： ±0.5nm 上海美析仪器有限公 *波长重现性：≤0.2nm *透射比准确度：±0.3%T *透射比重复性：0.15%T *杂散光：≤0.04%T (340nm NaNO2) *稳定性： 0.001A/h (500nm 预热后) *测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量 *波长调节：自动调节 *光度范围：-0.3~3A *显示方式：7英寸彩色触摸屏 *检测器：进口硅光二极管 *光源：进口钨灯 *电源： AC 220V/50Hz 或 110V/60Hz *功率： 120W *仪器尺寸：480×350×220mm *主机净重： 11Kg 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念"科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 上海美析仪器有限公司 在食品生产中，测定蔗糖的含量可以判断食品加工原料的成熟度，鉴别白糖、蜂蜜等食品原料的品质，以及控制糖果、果脯、加糖乳制品等产品的质量指标。但蔗糖是葡萄糖和果糖组成的双糖，没有还原性，不能用碱性铜盐直接测定，通过一定条件处理，蔗糖水解为具有还原性的葡萄糖和果糖，可以用还原糖测定方法测定蔗糖含量。食品中蔗糖的测定方法除酸水解方法外，还有酶比色法。