微生物中多酚氧化酶（PPO）活性检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 分光光度法(PPO活性测定) 引言 PPO与抗病性的关系人们已进行了广泛的研究。植物在抵御病原微生物的侵染过程中，抗性相关酶发挥了重要作用，这主要包括了酚类代谢系统中的一些酶和病原相关蛋白家族PPO 通过催化木质素及醌类化合物形成，构成保护性屏蔽而使细胞免受病菌的侵害，也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。由于自然界中存在着大量结构不同的多酚类物质，而催化这些酚类物质氧化的多酚氧化酶也是不同的。如果从微生物中筛选出有效的酶源或者利用酶修饰、基因异源表达和基因工程菌的构建等技术创造出有效的微生物酶源，这将着深远意义。 关键词，分光光度 PPO 原理 PPO催化各种酚与02氧化为醌。本实验是采用邻苯邻酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液 PH5.8的反应体系中， PPO 催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计 410nm处使反应体系的 OD 值产生变化，通过 OD 值上升的读数变化确定 PPO 的酶活大小。 材料与仪器 美析 UV1300分光光度计 多酚氧化酶粗酶液 邻苯二酚溶液柠檬酸缓冲液邻酸二氢钠硫酸铵沉淀组分 DE-52洗脱组分葡聚糖凝胶洗脱组分试管恒温水浴 步骤 在含有 4mIPH5.8 的 0.2M 磷酸氢二钠-0.1M 柠檬酸缓冲液试管中加入 0.05ml0.05M 邻苯二酚溶液，在30℃恒温水浴中预热后加入0.05ml酶液，反应5分钟，在分光光度计410nm 处读取吸光值。在上述条件下，以A410 读数，以每分钟增加 0.01O.D.值定义为一个酶活性单位(U)。 注意事项 1.反应混合液必须现配现用，否则会因邻苯二酚自动氧化而失效； 上海美析仪器有限公司 2..1加样时，先加缓冲溶液，再加底物邻苯二酚，摇匀，在测量之前最后加酶提取液。 3.在试验中加入一种酚结合剂--聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)，它能与酚类化合物强烈地发生缔合作用，从而消去酶反应体系中的底物，使 PPO 活性的测定更接近其真值 仪器参数 上海美析仪器有限公司 上海美析仪器有限公司 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发发光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 上海美析仪器有限公司 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) EL：http：//www.macylab.com 上海美析仪器有限公司 PPO与抗病性的关系人们已进行了广泛的研究。植物在抵御病原微生物的侵染过程中，抗性相关酶发挥了重要作用，这主要包括了酚类代谢系统中的一些酶和病原相关蛋白家族PPO通过催化木质素及醌类化合物形成，构成保护性屏蔽而使细胞免受病菌的侵害，也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。由于自然界中存在着大量结构不同的多酚类物质，而催化这些酚类物质氧化的多酚氧化酶也是不同的。如果从微生物中筛选出有效的酶源或者利用酶修饰、基因异源表达和基因工程菌的构建等技术创造出有效的微生物酶源，这将着深远意义。