面包中有机酸检测方案

面包中7种有机酸的提取与检测 背景 有机酸是分子结构中含有羧基的一类化合物，食品中常见的有机酸有柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸等。常见食品例如果汁、水果罐头中有机酸的测定，经过简单的提取即可使用仪器进行检测，但是例如蜂蜜、面包、糕点、果冻等基质较为复杂的样品则需要使用 SelectCore SAX 强阴离子交换固相萃取柱去除基质干扰后，才能进行仪器分析。在液相色谱分析时，参考国标方法，常见的 C18分析柱针对丁二酸和富马酸的分离度不够，而纳谱分析的 ChromCore AR C18是一款侧链护护的C18分析柱，不仅可以耐受较低pH的流动相，而且针对有机酸的分离也较为出色，保证了实验数据的准确性。同时本文优化了固相萃取步骤中的洗脱液条件，由原来的蒸发至近干再复溶优化为洗脱后直接定容，极大缩短了实验操作时间，提高实验效率。 适用范围 参照 GB 5009.157-2016食品安全国家标准食品有机酸的测定，本方法适用于果汁及果汁饮料、碳酸饮料、固体饮料、胶基糖果、饼干、糕点、果冻、水果罐头、生湿面制品和烘焙食品馅料中7种有机酸的测定。 实验步骤 1、试剂的准备 0.1%磷酸水溶液：7准确量取磷酸 1.0 mL， 加水至1000mL，混匀。 洗脱液：准确量取磷酸2mL，加水至100mL， 混匀。 2、样品的制备 称取5g(精确至0.01g)均匀面包试样，放入50 mL离心管中，向其中加入20 mL 水后在15000 r/min 均质提取2min， 在 4000 r/min 下离心3 min 后，将上清液转移至100 mL 容量瓶中，向残渣加入20 mL 水重复提取1次，合并提取液于同一容量瓶中，用无水乙醇定容至刻线，摇匀。准确移取上清液 10 mL于100 mL鸡心瓶中，向鸡心瓶中加入10 mL 无水乙醇，在80°℃±2℃下旋转浓缩至近干时，再加入5 mL 无水乙醇继续浓缩至彻底干燥后，用1mL×1mL水洗涤鸡心瓶2次，作为待净化液。 3、固相萃取方法 活舌： SelectCore SAX 1000mg/6mL固相萃取柱，依次使用 5.0 mL 甲醇、5.0 mL 水活化； 上样：取步骤2中制备好的待净化液上样至固相萃取柱上，弃去流出液； 淋洗：使用5.0mL水淋洗，弃去淋洗液； 洗脱：用5.0mL 洗脱液洗脱，收集全部洗脱液，并用水定容至10.0mL，混匀后使用液相色谱仪进行测定。 4、液相色谱仪器条件 酒石酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、丁二酸和富马酸的测定 Column： ChromCore AR C18， 5 um Dimension：4.6×250 mm Mobile Phase： A) 0.1%磷酸水溶液 B)甲醇Gradient：t(min) AB 0 97.5 2.5 10 97.5 2.5 11 0 100 16 0 100 17 97.5 2.5 22 97.5 2.5 Flow rate： 11.0mL/min Temperature： 40°C Injection： 20 pL Detection： UV 210 nm 己二酸的测定 Column： ChromCore AR C18， 5 pm Dimension： 4.6×250 mm Mobile Phase： 0-10 min：：775/25 v/v 0.1%磷酸水溶液/甲醇 Flow rate： 11.0 mL/min Temperature： 40°C Injection： 20 pL Detection： UV 210 nm 实验谱图 Time [min] 图16种有机酸标准品、面包样品、面包样品加标对比图 Time [min] 图2己二酸标准品、面包样品、面包样品加标对比图 加标回收 率 化合物 加标量 SelectCore SAX 加标回收率 Competitor A SAX 加标回收率 酒石酸 5000 mg/kg 98.14% 91.43% 苹果酸 10000 mg/kg 97.93% 87.52% 乳酸 5000 mg/kg 96.58% 39.57% 柠檬酸 5000 mg/kg 95.37% 105.28% 丁二酸 25000 mg/kg 101.03% 79.12% 富马酸 25 mg/kg 98.55% 115.95% 己二酸 2500 mg/kg 109.51% 74.32% 实验过程中也对比了其他厂家 Competitor A SAX 固相萃取柱回收率结果，其中乳酸的回收率不足 40%，，丁二酸和己二酸回收率不足80%，无法满足检测要求。 实验结论 由实验谱图和加标回收率结果可以看出， SelectCore SAX 固相萃取柱可以有效去除面包样品基质干尤，并且 7种有机酸的回收率均符合检测要求， ChromCore AR C18在分析有机酸时，峰型良好、杂质与目标物分离度良好，其中丁二酸与富马酸可以达到完全分离的效果。国标 GB 5009.157-2016中固相萃取洗脱步骤为2%磷酸甲醇洗脱，收集洗无脱脱光液后旋转蒸发至近干，照此方法进行操作时，由于磷酸属于不挥发性酸，因此蒸发至近干所需时间过长，对于近干的状态很难控制，并且在复溶时容易出现复溶不完全导致回收率偏低的问题，故而将洗脱液优化为2%磷酸水洗脱，洗脱液直接用水定容，缩短了实验操作时间，回收率得以保证。综合以上实验结论，选择纳谱分析的 SelectCore SAX 固相萃取柱和 ChromCore AR C18 可以快速、准确的进行食品中7种有机酸项目的检测。 纳谱分析NanoChrom纳分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 化合物加标量SelectCore SAX加标回收率Competitor A SAX加标回收率酒石酸5000 mg/kg98.14%91.43%苹果酸10000 mg/kg97.93%87.52%乳酸5000 mg/kg96.58%39.57%柠檬酸5000 mg/kg95.37%105.28%丁二酸25000 mg/kg101.03%79.12%富马酸25 mg/kg98.55%115.95%己二酸2500 mg/kg109.51%74.32%