动物性食品中氨基甲酸酯类杀虫剂残留检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-754Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-598 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMSMS 测定动物性食品中22种氨基甲酸酯类杀虫剂残留 LCMSMS-598 摘要：本文使用岛津三重四极杆液质联用系统建立了一种 LCMSMS 测定动物性食品中22种氨基甲酸酯类杀 虫剂含量的方法。动物性食品样品经过提取、净化后进样，22种杀虫剂在2~100 ug/L浓度范围内均具有较好的线性关系，线性相关系数均>0.997，检出限在 0.01~0.36 ug/L， 定量限在 0.03~1.10 ug/L 之间。选5、20 ug/L 两个浓度水平标准工作液，连续6次进样，保留时间和峰面积的相对标准偏差在 0.038~0.394%和0.386~4.675%之间，系统精密度良好。同时还考察了空白牛肉基质加标，回收率在62.2~108.1%之间。方法准确可靠，可用于实际样品的检测。 关键词：三重四极杆串联质谱氨基甲酸酯类杀虫剂动物类食品 氨基甲酸酯类农药是一类高效、广谱杀虫剂，在对农作物保护中发挥着重要作用。随着近年来使用率的提高，其在环境和食品中的残留累积和危害已经成为亟待解决的问题。人体在大量摄入后急性中毒时可出现流泪、肌肉颤动、瞳孔缩小等胆碱酯酶抑制症状。因此，需要对食品中氨基甲酸酯类杀虫剂的残留进行检测。目前研究较多的检测方法是采用液相色谱-柱后衍生荧光法或气相色谱法。前者操作繁琐，且定性能力有限；由于大部分氨基甲酸酯农药具有热不稳定性，气相色谱法应用范围有限。高效液相色谱-串联质谱联 用分析技术是近些年来快速发展的分析技术，具有很高的选择性和灵敏度，对复杂基质中的氨基甲酸酯类农药残留具有很强的定性和定量能力，准确度高，是目前痕量残留定量分析的首选方法。 本文参考《食品安全国家标准动物性食品中氨基甲酸酯类杀虫剂残留量的测定液液色谱-串联质谱法》报批稿中规定的方法，使用岛津超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱联用系统，建立了一种可以准确测定动物性食品中22种氨基甲酸酯类杀虫剂的方法，能够完全满足标准对实际样品的检测要求。 脱气机： DGU-20A5R 检测器：LCMS-8060三重四极杆质谱仪 自动进样器：SIL-30AC 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.97 柱温箱：CTO-20A 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱： UPLC-BEH C18 (100 mmx2.1 mml.D.， 1.7 um) 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液 B相-乙腈 流速：0.3 mL/min 进样体积：1uL 柱温：35℃ 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为25%，时间程序见表1。 表1时间程序 Time(min) Module Command Value 1.5 Pumps Pump B Conc. 25 7.5 Pumps Pump B Conc. 85 9.00 Pumps Pump B Conc. 85 9.10 Pumps Pump B Conc. 25 12.00 Controller Stop 质谱条件 离子源： ESI (+/-)离子源接口压： 4 kV/-3 kV雾化气：氮气3.0 L/min干燥气：氮气10.0 L/min DL 温度：300℃ 加热块温度：400℃ 接口温度：300℃ 扫描模式：MRM 加热气：空气10.0 L/min MRM 参数：见表2 碰撞气：氩气 表2 MRM优化参数 序号 中文名 CAS号 监测离子对 Q1 Pre (V) CE Q3 Pre (V) 1 1646-87-3 207.00>89.00* -10.0 -14.0 -10.0 涕灭威亚砜 207.00>132.00 -10.0 -9.0 -14.0 2 30614-22-3 225.00>72.15* -18.0 -24.0 -27.0 去甲基抗蚜威 225.00>168.15 -10.0 -15.0 -11.0 3 涕灭威砜 1646-88-4 240.00>86.00 -10.0 -12.0 -14.0 240.00>148.00* -12.0 -14.0 -15.0 4 灭多威 16752-77-5 162.70>106.00 -14.0 -11.0 -21.0 162.70>88.10* -15.0 -11.0 -17.0 5 灭虫威亚砜 2635-10-1 242.10>185.10* -10.0 -15.0 -12.0 242.10>122.10 -10.0 -29.0 -22.0 6 抗蚜威 23103-98-2 239.00>182.10 -10.0 -17.0 -19.0 239.00>72.15* -10.0 -24.0 -28.0 7 3-羟基克百威 16655-82-6 220.00>163.00* -11.0 -11.0 -17.0 220.00>107.00 -11.0 -28.0 -24.0 8 灭虫威砜 2179-25-1 257.80>201.10 -10.0 -10.0 -22.0 257.80>122.00* -10.0 -22.0 -12.0 9 涕灭威 116-06-3 208.00>89.00 -10.0 -17.0 -20.0 208.00>116.00* -17.0 -10.0 -12.0 10 速灭威 1129-41-5 166.00>94.00 -14.0 -30.0 -18.0 166.00>109.10* -11.0 -12.0 -21.0 11 残杀威 114-26-1 210.00>111.05* -10.0 -16.0 -11.0 210.00>168.00 -16.0 -9.0 -11.0 12 恶虫威 22781-23-3 223.70>109.00* -20.0 -18.0 -21.0 223.70>167.00 -10.0 -9.0 -18.0 13 克百威 1563-66-2 221.80>123.10* -11.0 -22.0 -12.0 221.80>165.05 -10.0 -13.0 -17.0 14 西维因 63-25-2 202.10>127.00 -10.0 -27.0 -28.0 202.10>145.10* -16.0 -12.0 -26.0 15 灭除威 2655-14-3 179.80>123.10* -12.0 -13.0 -12.0 179.80>95.10 -15.0 -24.0 -19.0 16 乙硫苯威 29973-13-5 225.80>107.00* -10.0 -19.0 -11.0 225.80>77.10 -19.0 -45.0 -14.0 17 异丙威 2631-40-5 194.00>95.00* -21.0 -14.0 -19.0 194.00>152.00 -15.0 -13.0 -24.0 18 3，4，5-混杀威 2686-99-9 193.80>122.00 -10.0 -27.0 -12.0 193.80>137.10* -13.0 -13.0 -13.0 19 灭虫威 2032-65-7 225.90>169.10* -18.0 -10.0 -18.0 225.90>121.10 -10.0 -19.0 -24.0 20 仲丁威 3766-81-2 208.00>95.00* -18.0 -17.0 -21.0 208.00>152.00 -10.0 -11.0 -27.0 21 苯氧威 72490-01-8 302.10>88.10* -12.0 -23.0 -17.0 302.10>116.15 -11.0 -12.0 -11.0 144171-61-9 528.00>203.00* -20.0 -42.0 -20.0 22 茚虫威 528.00>150.00 -20.0 -42.0 -20.0 注：*表示定量离子 1.3标准品与试剂 标准品：购于上海安谱，于-20℃冰箱保存，备用。 二氯甲烷-甲醇溶液：取二氯甲烷99 mL， 甲醇1mL，摇匀。 1.4标准系列工作液： 精密量取22种标准品适量，用乙腈稀释成浓度为1000 ug/L 的混合标准储备液，避光冷冻保存。取混合标准储备液用25%乙腈水稀释，配制成浓度为2、5、10、20、50、100 pg/L 六个浓度的混合标准溶液，现用现配。 1.5样品前处理 根据《食品安全国家标准动物性食品中氨基甲酸酯类杀虫剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法》报批稿中7测定步骤中7.1和7.2对样品进行前处理。 结果与讨论 2.1标准样品的 MRM 色谱图 按照1.2中的液相色谱条件进行测定，22种标准样品的 MRM 色谱图如图1所示。 Q207.00>8...9.00e3Q225.00>7... 1.75e5Q 240.00>8... 2.84e3Q162.70>1...1.28e4Q 242.10>1... 4.89e4 1.0e4- ·4.0e4· 2.0e3B- 5.0e3· 1.0e5· 1.0e3- 5.0e3- 2.0e4 0.0e0- 0.0e0- 0.0e0 T丁1T 0.0e0-C T1 0.0e0- 1.0 1.0 1.5 1.0 1.5 1.5 1.5 2.0 RT (min) RT (min) RT (min) RT (min) RT (min) 涕灭威亚砜 去甲基抗蚜威 涕灭威砜 灭多威 灭虫威亚砜 S/N=48 S/N=432 S/N=11 S/N=30 S/N=78 Q 239.00>1... 1.05e5 1Q 220.00>1... 2.22e4 Q 257.80>2... 7.56e2Q208.00>8... 7.45e22Q 166.00>9... 4.75e3 5.0e2- 1M0.0e0-1 4.0e3· 2.0e3- SMAM0.0e0- Q210.00>1...66.12e4 Q223.70>1... 3.61e4Q 221.80>1...9.88e4Q 202.10>1... 6.35e3 Q 179.80>1... 3.76e4 1.0e5- Q225.80>1...11.93e5Q 194.00>9... 2.16e4Q 193.80>1... 2.35e4Q225.90>1... 1.35e4Q208.00>9... 2.60e4 2.0e4- 2.0e4- 1.0e4- 2.0e4- 1.0e5- 1.0e4· 1.0e4- 5.0e3- 1.0e4- W~ 0.0e0-TTTT T111TT丁 一年TT 0.0e0-t 0.0e0- 5.5 6.0 6.0 6.0 6.5 6.5 RT (min) RT (min) RT (min) RT (min) RT (min) 乙硫苯威(2 ug/L) 异丙威 混杀威 灭虫威 仲丁威 S/N=21 S/N=13 S/N=40 S/N=35 S/N=23 图1122种杀虫剂标准品的 MRM 色谱图 (1 ug/L) 2.2线性 将不同浓度的混合标准溶液，参考报批稿的浓度进行稀释后，按1.2中的分析条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立标准曲线，结果如图2所示。22种杀虫剂上机浓度在 2-100 ug/L浓度范围内，均具有较好的线性关系，线性相关系数均>0.997，具体结果见表3。 Area Area Are3 Area 速灭威 残杀威 1恶虫威 ly=3465.432x+4724.933 y=65720.65x+3639.574 20e7- y=111337.9x+66814.98 3.0e5-1R2=0.9990752 R=0.9995375 6.0e6·R7=0.9999274R=0.9999637 ]R3=0.9999609 R=0.9999805 1.0e7R=0.9999268 R=0.9999634 liniCurve Fit： Default (Linear) 1.8e7- 5.0e6Curve Fit： Default (Linear) Curve Fit Default (Linear) Curve Fit： Default (Linear) 2.5e5-1Weighting： Default (None) Weighting： Default (None) 1.5e7Weighting： Default (None) 8.0e6Weighting：Default (None) Zero： Default (Not Forced) 40e6 Zero： Default (Not Forced) ：Zero： Default (Not Forced) Zero： Default (Not Forced) 2.0e5 13e7 6.0e6 30e6 1.0e7 7.5e6- 4.0e6 20e6 5.0e6- 20e6 1.0e6- 25e6- 0.0el 00e0 0.0e0 20 20 100 0.0e0+ 100 20 60 80 100 40 100 Conc.(ppb) Conc. [ppbj Conc.(ppb Conc(ppb) Are . Area Area Area 克百威 4.5e5-西维因 1Ae7灭除威 23e7乙硫苯威 3.0e7\y=324845.8x+230610.0 40e6 y=43707.76x+17282.86 y=138991.1x+34155.94 3 2.0e7 y=218986.5x+103984.8 R2=0.9998946 R=0.9999473 R1=0.9999490 R=0.9999745 12e7R=0.9998413 R=0.9999206 R2=0.9998576 R=0.9999288 2.5e7-1 Curve Fit： Default (Linear) 3.5e5 Curve Fit： Default (Linear) Curve Fit： Default (Linear) 1.8e73(Curve Fit： Default (Linear) Weighting： Default (None) 3.0e6Weighting： Default (None) 1.0e7：Weighting： Default (None) 7-Zero： Default (Not Forced) Zero：Default (Not Forced) 1.5e7- 2.0e7 1Zero： Default (Not Forced) Zero： Default (Not Forced) 2.5e5- 8.0e6- 1.3e7 1.5e7 2.0e6- 60e6- 1.0e7- 1.0e7 1.5e5- 7.5e6 40e6- 1.0e6- 5.0e6 5.0e6 5.0e5- 20e6- 2.5e6 0.Deel0-- 100 100 Conc. (ppiplb) Conc.(ppb Conc.(ppb Conc (ppt Conc.(ppb) Conc. ippb 图2 22种杀虫剂的校准曲线 表3 校准曲线参数 序号 化合物名称 标准曲线 相关系数r 精确度((%) 检出限(ug/L) 定量限(ug/L) 涕灭威亚砜 Y=26927.4X+56715.6 0.9994 88 0.02 0.06 2 去甲基抗蚜威 Y=726293X-137592 0.9998 103 0.02 0.07 3 涕灭威砜 Y=44438.6X+162548 0.9970 86 0.01 0.04 灭多威 Y=69929.4X+35454.1 0.9999 99 0.04 0.11 灭虫威亚砜 Y=231293X-242769 0.9994 109 0.03 0.09 6 抗蚜威 Y=595160X-429182 0.9994 107 0.01 0.03 3-羟基克百威 Y=91902.9X+80091.8 0.9999 95 0.03 0.08 灭虫威砜 Y=3621.38X-3793.19 0.9998 105 0.36 1.10 涕灭威 Y=3465.43X+4724.93 0.9995 94 0.23 0.70 10 速灭威 Y=65720.7X+3639.57 0.9999 100 0.07 0.21 11 残杀威 Y=214861X+75345.3 0.9999 98 0.05 0.14 12 恶虫威 Y=111338X+66815.0 0.9999 0.05 0.15 13 克百威 Y=324846X+230610 0.9999 0.02 0.06 14 西维因 Y=43707.8X+17282.9 0.9999 97 0.11 0.32 15 灭除威 Y=138991X+34155.9 0.9999 99 0.03 0.08 16 乙硫苯威 Y=218987X+103985 0.9999 97 0.17 0.52 17 异丙威 Y=48608.5X+4537.08 0.9999 100 0.24 0.72 18 混杀威 Y=212834X-5150.19 0.9997 98 0.07 0.20 19 灭虫威 Y=46378.5X+2708.13 0.9998 100 0.05 0.14 20 仲丁威 Y=68761.0X+4204.49 0.9998 101 0.22 0.67 21 苯氧威 Y=207847X-128445 0.9995 105 0.01 0.05 22 茚虫威 Y=59733.7X-33610.0 0.9998 99 0.03 0.09 2.3精密度实验 不同浓度的混合标准工作液参照各自分析条件连续进样6次，用于考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表4所示。结果显示，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.038~0.394%和0.386~4.675%之间，仪器精密度良好。 表4 保留时间和峰面积重复性结果R((n=6) 序号 名称 RSD% (5ug/L) RSD%(20ug/L) R.T. Area R.T. Area 涕灭威亚砜 0.106 1.628 0.146 1.309 去甲基抗蚜威 0.216 0.386 0.131 0.793 3 涕灭威砜 0.196 1.028 0.089 1.324 4 灭多威 0.223 1.031 0.116 1.312 5 灭虫威亚砜 0.273 1.147 0.171 0.502 6 抗蚜威 0.225 0.392 0.125 0.586 3-羟基克百威 0.265 0.586 0.170 0.617 8 灭虫威砜 0.394 3.454 0.220 2.029 9 涕灭威 0.152 1.482 0.086 4.675 10 速灭威 0.129 1.006 0.047 1.169 11 残杀威 0.087 1.604 0.045 0.920 12 恶虫威 0.088 1.630 0.043 1.041 13 克百威 0.083 1.069 0.045 0.570 14 西维因 0.062 2.020 0.050 1.643 15 灭除威 0.062 1.017 0.047 1.464 16 乙硫苯威 0.056 1.254 0.050 1.140 17 异丙威 0.051 2.422 0.053 0.870 18 混杀威 0.055 1.403 0.046 1.865 19 灭虫威 0.048 1.540 0.060 0.947 20 仲丁威 0.050 1.612 0.049 0.527 21 苯氧威 0.044 0.577 0.049 0.525 22 茚虫威 0.038 1.596 0.041 1.094 2.4回收率实验 以精牛肉样品按1.5的方法提取净化后进行加标回收实验，添加浓度为1 ug/kg 和5 ug/kg 的22种杀虫剂标准品混合溶液，按照1.2中的条件分别进行测试，计算平均回收率。空白样品色谱图见图3，空白基质中未检出杀虫剂。加标样品的回收色谱图见图4，22种杀虫剂的回收率见表5。 图3牛肉空白基质色谱图 图4 基质加标回收色谱图(5ug/L) 表5回收率结果 序号 名称 加标水平(ug/L) 回收率% 加标水平(ug/L) 回收率% 1 涕灭威亚砜 5 74.3 25 87.4 2 去甲基抗蚜威 5 103.2 25 84.1 3 涕灭威砜 5 62.2 25 91.7 4 灭多威 5 94.3 25 83.7 灭虫威亚砜 5 108.1 25 83.0 6 抗蚜威 5 107.8 25 83.1 7 3-羟基克百威 5 97.1 25 87.9 8 灭虫威砜 5 89.6 25 93.1 9 涕灭威 5 86.5 25 96.0 10 速灭威 5 97.0 25 83.5 11 残杀威 5 94.1 25 85.3 12 恶虫威 5 87.7 25 85.3 13 克百威 5 85.3 25 85.1 14 西维因 84.6 25 79.8 15 灭除威 87.5 25 81.7 16 乙硫苯威 5 78.2 25 84.3 17 异丙威 5 90.2 25 82.2 18 混杀威 5 98.7 25 76.7 19 灭虫威 5 90.7 25 79.6 20 仲丁威 5 92.9 25 81.0 21 苯氧威 5 96.1 25 81.5 22 茚虫威 5 71.5 25 79.9 结论 本文使用岛津三重四极杆液质联用系统建立了一种 LC-MS/MS 测定动物性食品中22种氨基甲酸酯类杀虫剂含量的方法。22种杀虫剂在2~100 ug/L浓度范围内均具有较好的线性关系，线性相关系数均>0.997，检出限在0.01~0.36 ug/L，定量限在0.03~1.10 ug/L，样品经过提取净化后进行检测，空白基质加标回收率在62.2~108.1%之间，满足标准报批稿60%~110%的要求。该方法准确可靠，可用于实际样品的检测。 岛津应用云 本文使用岛津三重四极杆液质联用系统建立了一种LC-MS/MS测定动物性食品中22种氨基甲酸酯类杀虫剂含量的方法。22种杀虫剂在2~100 µg/L浓度范围内均具有较好的线性关系，线性相关系数均＞0.997，检出限在0.01~0.36 µg/L，定量限在0.03~1.10 µg/L，样品经过提取净化后进行检测，空白基质加标回收率在62.2~108.1%之间，满足标准报批稿60%~110%的要求。该方法准确可靠，可用于实际样品的检测。