饲料中硝基呋喃类药物检测方案(液相色谱仪)

Acchrom·Tech华谱科仪华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪 S6000 液相色谱测定饲料中硝基呋喃类药物 方案优势 1) -次进样实现饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林的分析测定； 2) 分析时间短，分析效率高； 3) 待测物质附近无杂峰干扰； 4) 方案符合农业部1486号公告-8-2010标准要求 前言 硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素，常见的有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林，结构式见图1。该类药物对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体均有杀灭作用。因其价格较低且效果好，曾广泛应用于畜禽及水产养殖业，以治疗由大肠杆菌或沙门氏菌所引起的肠炎、疥疮、赤鳍病、溃疡病等。但是硝基呋喃类药物是一类具有致畸致癌致突变作用的物质，大剂量或长时间使用硝基呋喃类药物会对动物体产生毒性作用。中华人民共和国农业部于2002年12月24日发布的公告第235号及于2005年10月28日发布的公告第560号，硝基呋喃类药物为在饲养过程中禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。自此，在动物饲养过程中使用硝基呋喃类药物成为非法行为，饲料中硝基呋喃类药物的检测也成为各检测机构的必测项目。 本项目参考《农业部 1486号公告-8-2010饲料中硝基呋喃类药物的测定高效液相色谱法》，使用华谱科仪仪器和色谱柱，开发硝基呋喃类药物的液相色谱方法，检测饲料中的硝基呋喃类药物。 图1 硝基呋喃类药物的结构式 实验部分 样品的制备 称取1g样品于50 mL 离心管中，加25 mL 乙腈，涡动1 min， 65℃超声提取 15min， 每隔5 min 手摇一次；3800 r/min 离心15 min， 移取2mL 至10mL小管中，50℃氮吹吹干；往小管中加2%甲酸，超声2 min， 接着涡动1 min， 使其充分溶解；将混合型阳离子交换柱安装于固相萃取装置上，依次用甲醇3mL、2%甲酸溶液3mL活化，将样品液通过固相萃取柱，用水3mL淋洗，抽真空1 min；用3mL固相萃取液洗脱；上样溶液、淋洗液和洗脱液的流速均控制在不超过1 mL/min。50℃氮气吹干，加2%甲酸1mL溶解残余物，过0.2 um滤膜，供高效液相色谱测定。 仪器配置与分析方法 液相条件 仪器配置 Acchrom S6000 组织器S6110 四元泵 S6210 进样器 S6310 柱温箱 S6420 紫外可见检测器 色谱柱 Tnature C18，4.6×150 mm， 5 um 流动相 A： 乙； B： 0.05%乙酸铵 流速 1.0ml/min 进样量 10 pl 柱温 30℃ 检测波长 365nm 结果与讨论 1.标准品的测定 图2为硝基呋喃类药物色谱图，由图可得，四种硝基呋硝类药物在 15 min 内完全出峰，并能达到良好的分离效果。出峰顺序为呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃它酮。对其进行线性测定，在 0.05 ug/mL--20 ug/mL 范围内，四个样品的相关系数均可达到0.999。 分钟 图2 硝基呋喃类药物色谱图 2.样品测定 图3~5为饲料样品经过前处理后测得的色谱图，硝基呋喃类药物峰与杂质峰分离度良好，样品中硝基呋喃类药物含量见表2。 图331号样品色谱图 图4 2号样品色谱图 图533号样品色谱图 表2样品中硝基呋喃类药物含量 样品 项目 保留时间 峰面积 浓度 含量 (min) (uV.s) (ug/mL) (mg/kg) 1号羊品 呋喃西林 6.916 13414 0.518 1.295 呋喃妥因 7.686 9433 0.314 0.785 呋喃唑酮 / / / 呋喃它酮 10.133 6542 0.272 0.680 2号样品 呋喃西林 6.921 4910 0.285 0.713 呋喃妥因 / 呋喃唑酮 / 呋喃它酮 / 呋喃西林 / / / 3号样品 呋喃妥因 7.692 3135 0.163 0.408 呋喃唑酮 / / / 喃它酮 / / 3..回收率测定 取阴性样品分别加5倍定量限、10倍定量限、20倍定量限混标溶液，再进行前处理步骤，得到回收率见表3，由表可知，回收率在85.6%-104.2%之间，符合标准要求。 表3 样品回收率表 样品名称 项目 浓度 ug/ml 质量浓度 加标量 回收率(%) mg/kg (mg/kg) 5倍定量限-1 呋喃西林 1.041 4.852 4.731 102.6 呋喃妥因 0.981 4.573 4.778 95.7 呋喃唑酮 1.017 4.74 4.754 99.7 呋喃它酮 1.028 4.792 4.824 99.3 5倍定量限-2 呋喃西林 1.058 5.093 4.886 104.2 呋喃妥因 1.025 4.935 4.935 100.0 呋喃唑酮 1.032 4.968 4.91 101.2 呋喃它酮 1.03 4.959 4.983 99.5 10倍定量限-1 呋喃西林 1.913 9.026 9.578 94.2 呋喃妥因 1.872 8.833 9.673 91.3 呋喃唑酮 1.877 8.856 9.625 92.0 呋喃它酮 1.893 8.932 9.767 91.4 10倍定量限-2 呋喃西林 1.937 9.234 9.678 95.4 呋喃妥因 1.903 9.072 9.725 93.3 呋喃唑酮 1.903 9.072 9.725 93.3 呋喃它酮 1.931 9.206 9.868 93.3 20倍定量限-1 喃西林 3.698 18.334 20.129 91.1 呋喃妥因 3.511 17.407 20.327 85.6 呋喃唑酮 3.615 17.923 20.228 88.6 呋喃它酮 3.712 18.404 20.526 89.7 呋喃西林 3.873 18.593 19.491 95.3 20倍定量限-2 呋喃妥因 3.69 17.715 19.683 90.0 呋喃唑酮 3.772 18.108 19.587 92.5 呋喃它酮 3.856 18.512 19.875 93.1 4.检出限/定量限 取阴性样品加标后进行前处理步骤，测得检出限和定量限均符合标准要求，详见表4。 表4 硝基呋喃类药物检出限、定量限 检出限 标准检出限 定量限 标准定量限 (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) 呋喃西林 0.26 0.3 0.86 1.0 呋喃妥因 0.15 0.51 呋喃唑酮 0.18 0.61 呋喃它酮 0.16 0.54 结论 从上述结果可知，使用 Tnature C18(4.6x150 mm， 5 um)色谱柱，，可以实现饲料样品中硝基呋喃类药物的良好分离，且目标物质附近无杂峰干扰，符合标准要求；样品加标回收率在85.6%-104.2%之间，且检出限、定量限低于标准要求。 联系我们 关注我们 www.acchrom-tech.com 热线电话：010-8410-9313 邮箱： marketing@acchrom-tech.com