饲料中聚醚类抗生素检测方案(液相色谱仪)

HPLC柱后衍生法分析饲料中聚醚类抗生素 根据日本农林水产省告示第750号，盐霉素等5种聚醚类抗生素被指定为饲料添加剂，目的是有效利用饲料所含有的营养成分促进家畜、家禽的生长而添加在饲料中。关于饲料中这些成分的分析法，在「饲料分析标准」中收录了微生物学定量法以及HPLC法。 检测法的原理 聚醚类抗生素4成分(图1)以反相色谱法分离后，在硫酸-甲醇中，通过与香草醛(3-甲氧基-4-羟基苯甲醛)进行加热反应(Komarowsky反应)，使这些成分显色，以520nm进行检测。 图2表示本方法的系统流路图，表1表示分析条件。SL·MN·NR使用5m的反应管，SD使用10m的反应管。 图1 聚醚抗生素4成分的结构式 HPLC法与微生物学定量法相比分析迅速。根据目标物，规定有柱后衍生化紫外检测法和荧光检测法。本文介绍柱后衍生化紫外检测法的盐霉素((SL)， 莫能菌素钠(MN)，甲基盐霉素(NR)，赛杜霉素钠(SD)分析例。 图2 流路图 表1 分析条件 色谱柱 ： Shim-pack VP-ODS(4.6mmI.D. ×150mmL.) 流动相 ：水/甲醇/醋酸=60mL /940mL/ 1mL(v/v/v) 流速 ：0.6mL/min 柱温 ：40℃ 衍生反应流动相： 甲醇/硫酸/香草醛=95mL /2mL/3g(v/v/w) 流速 ：0.6mL/min 反应温度：95℃ 反应管 ：5m(SL.MNNR)或 10m(SD)x0.5 mmI.D. 检测器 ： SPD-20AV， 520nm(W 灯) 线性和重现性 图3表示在「饲料分析标准」记述的浓度范围内制作的各成分的工作曲线(横轴： ug/mL)，以及各标准液(0.5ug/mL)的峰面积值重现性(n=6)。 图3线性和峰面积值重现性 标准样品的分析 图4表示SL， MN， NR的标准液(各1ug/mL) 的20uL进样分析结果。反应管长5m。 图5表示SD的标准液(2.5ug/mL)的20uL进样分析的结果。此处使用10m长的反应管。 图4 莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素的色谱图(各1ug/mL， 20uL进样) 图5 赛杜霉素的色谱图 (2.5ug/mL， 20uL进样) ( 注：数据出自日本CSC )