非有机牛油果、西兰花和橙子中多残留农药检测方案(液质联用仪)

应用简报 AgilentTrusted Answers 使用 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统对复杂食品基质进行多残留农药筛查和定量分析 Dan-Hui Dorothy Yang， Mark Sartain，Theresa Sosienski，Patrick Batoon安捷伦科技有限公司 本应用简报介绍了一种基于 UHPLC/MS/MS的多残留分析方法，用于测定食品样品中250多种农药及其代谢物。该方法得益于： Santa Clara， CA Agilent 1290 Infinity II UHPLC 系统更高的色谱分离度安捷伦喷射流离子源的通用电离功能 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统的创新技术，在减小仪器体积的同时保持了高分析灵敏度 将该方法用于分析牛油果和红茶等复杂基质中的农药残留。 我们得到的结果表明，该方法能够对基质中浓度低于最大残留限量(MRL)的多数化合物进行高精密度的准确定量。Ultivo LC/TQ 体积小巧、易于维护，是能够满足农药残留常规测试需求的理想选择。 食品中农药残留的筛查和定量分析是食品安全领域最重要且最棘手的应用之一。监管机构规定了食品中数百种农药及其代谢物的最大残留限量(MRL)。多数 MRL 均规定为低 ppb (ng/g)级，为同时筛查和定量分析复杂基质中的数百种分析物带来了巨大挑战。因此，需要使用可靠的分析仪器和方法对农药残留进行可靠定量。通常使用基于 LC/MS/MS 或 GC/MS/MS的多残留方法。SANTE/11813/20172等指导文件中规定了农药残留的鉴定标准以及在定量分析时方法验证和质量控制流程的要求。 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统专门设计用于解决以环境和食品安全领域为代表的常规生产实验室所面临的诸多挑战。 Ultivo LC/TQ 采用的创新技术有助于减小其整体体积，同时保持与大型质谱系统相媲美的性能。Cyclone lon Guide 气旋离子导轨、Vortex Collision Cell 涡流並撞室和双曲面四极杆等创新技术不仅最大程度提高了小体积仪器的定量分析性能，而且改善了仪器的可靠性和稳定性，延长了正常运行时间。通过 VacShield 真空盾， Ultivo 减少了用户对系统维护的干预，使非专业用户也能顺利完成系统运行和维护。Agilent MassHunter 软件简化了 数据采集、方法设置、数据分析和报告，获得了从采集到报告的最短时间，提高了实验室分析效率。 本应用简报展示了对食品样品中251种农药的筛查和定量分析。将 Agilent 1290Infinity II UHPLC 系统与快速极性切换的动态MRM 模式下运行的 Ultivo LC/TQ 系统联用。 试剂与化学品 所有试剂和溶剂均为HPLC 或 LC/MS 级。乙腈和甲醇购自 Honeywell (Morristown，NJ， USA)。超纯水产自采用 LC-PakPolisher 和 0.22 pm 膜式终端过滤器滤芯的 Milli-Q Integral 系统 (EMD Millipore，Billerica， MA， USA)。，甲酸购自Fluka(Sigma-Aldrich 公司， St. Louis， MO，USA)，甲酸铵溶液(5 mol/L)来自安捷伦公司(部件号 G1946-85021)。农药包含在安捷伦农药全套测试混标(部件号5190-0551)中。将农药全套测试混标的八种子混合物混合，然后用乙腈稀释得到最终农药工作溶液，该溶液中含有251种浓度为 10 ug/mL 的农药。该溶液用于 QuEChERS 提取物加标。配制6个校准样品，浓度范围为1-100 ng/g (1、5、10、20、50和100ng/g)。 样品前处理 有机红茶、牛油果、西兰花和橙子购自当地杂货店。根据柠檬酸盐缓冲 QuEChERS方案， 使用 Agilent BondElut QuEChERS试剂盒(部件号5982-5650) 萃取样品。称取10 g均质水果和蔬菜或2g红茶至50mL 聚丙烯管中，然后加入10 mL乙腈，剧烈振摇进行萃取。在萃取前，用8mL超纯水将红茶样品润湿。通过含N-丙基乙二胺的分散式 SPE (dSPE)(部件号5982-5058)对橙子的粗提取物进行净化。使用通过石墨化炭黑去除色素的 dSPE 试剂盒(部件号5982-5256)对西兰花提取物进行净化。使用含石墨化炭黑、用于高色素样品的分散式试剂盒(部件号5982-5356CH)对红茶提取物进行净化。使用 Agilent EMR-Lipid(部件号5982-1010)对牛油果提取物进行净化，然后进行 Polish 净化盐析萃取(部件号5982-0101)。非有机西兰花、橙子和牛油果提取物的前处理方法与其对应的有机样品相同。 ( 仪器 ) ( 采用 Agilent 1290 I n finity II UHPLC 系统 进行分离，该系统包括： ) ( Agilent 1290 Infinity 高速泵 (G7120A) ) ( Agilent 1 290 Infinity I I Multisampler， 配备样品冷却装置 (G7167B) ) ( Agilent 1290 Infinity ll 高容量柱温箱 (G7116B) ) ( 该 UHPLC 系统与配备安捷伦喷射流电喷 雾离子源的 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统联用。 ) 方法 表1汇总了1290 Infinity II UHPLC 条件。 表2列出了 Ultivo 三重四极杆参数和安捷伦喷射流 (AJS) ESI 离子源参数。采用正离子和负离子电喷雾电离在动态多反应监测 (dMRM)模式下进行分析。 采用具有 Quant-My-Way 功能的 AgilentMassHunter 定量分析软件B.09对数据进行评估。使用1/x加权生成线性校准曲线。 参数 值 色谱柱 Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18，3.0×150 mm，1.8 pm (部件号959759-302) 柱温 45°C 进样量 2pL 自动进样器温度 流动相 A) 4.5 mmol/L 甲酸铵+0.5mmol/L氟化铵+0.1%甲酸的水溶液B) 4.5 mmol/L 甲酸铵 +0.5 mmol/L 氟化铵+0.1%甲酸的甲醇溶液 流速 0.45mL/min 梯度程序 时间 (min) B% 0 20.5 21 5065 416 10018 100 18 12 停止时间 20 后运行时间 1.5 表2. Agilent Ultivo三重四极杆和安捷伦喷射流离子源参数 参数 值 离子模式 采用安捷伦喷射流技术的正离子和负离子 ESI 扫描类型 动态 MRM 干燥气温度 250°℃ 干燥气流速 11 L/min 鞘气温度 350°℃ 鞘气流速 12L/min 雾化器压力 40 psi 毛细管电压 3500(正离子/负离子) 喷嘴电压 300V(正离子)；1000V(负离子) 循环时间 650 ms MRM 总数 883 最短驻留时间 5.45 ms 最长驻留时间 215.84 ms MS1 和 MS2分辨率 单位 方法灵敏度 利用 Agilent MassHunter Source Optimizer软件对 AJS 离子源参数进行优化，以获得大多数目标化合物的最高丰度。在本研究中，碎裂电压和碰撞能量等化合物相关的参数直接从 Agilent 6460 LC/TQ的现有方法中转移到 Ultivo LC/TQ， 不进行进一步优化。 图1显示红茶提取物中251种浓度为5 ng/g 的农药信号响应良孔。在此浓度(相当于12 MRL 或 1 ng/mL)下可检测到大多数化合物。Ultivo 中的创新技术对于获得高灵敏度检测至关重要。 由于信号响应良好，基质中的大多数化合物可在1 ng/g (相当于1/10MRL) 浓度下得到检测，并且至少四次重复测定的准确度为 80%-120%。其余分析物可在更高的浓度下检测到(图2)。其中一种化合物可在正离子和负离子两种模式下得到检测，并作为两次单独的测量进行计数。 方法精度 Cyclone lon Guide 气旋离子导轨、VortexCollision Cell 涡流碰撞室和双曲面四极杆能够使离子在宽 m/z 范围内的传输保持一致。这种一致性成就了出色的分析精度。在每个浓度下进行六次重复进样。计算每一种化合物在可定量的最低浓度下的%RSD， 在该浓度下，六次重复测定中至少四次测定结果的准确度为80%-120%。多数化合物的%RSD<10%(图3)。 图1.以5ng/g (相当于1ng/mL)的浓度加标到红茶中的251种农药的色谱图 西兰花 牛油果 图2.在浓度为1 ng/g 时可准确定量的化合物数量。其余化合物可在更高的浓度下定量 红茶 西兰花 橙子 牛油果 图3.不同基质的%RSD 分布。在能准确定量分析物的最低浓度下计算%RSD 实际样品 非有机牛油果、西兰花和橙子样品的前处理方式与其对应的有机样品相同。多数校准曲线的R²>0.99，足以实现样品的准确定量分析。在牛油果中未检出农药，而在橙子和西兰花中分别检测到3种和7种农药，浓度等于或高于 MRL(图4和图5)。西兰花中检测到的烯酰吗啉、嘧菌酯和双炔酰菌胺浓度分别为592 ng/g、 493 ng/g 和 154 ng/g， 超出了校准曲线范围。虚线表示根据图4和图5中的校准标样所确定的预期定性离子响应范围。样品中的所有农药均得到了可靠检测。很明显，一些受污染的食品已经到达消费者手中。对于食品行业和食品检测实验室来说，通过技术创新来共同确保食品安全是一项艰巨的任务。 浓度 (ng/mL) ( Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统适用于复杂食品基质中的农药多残留分析。 Ultivo 三重四液杆液质联用系统的技术创新可实现稳定的检测且易于维护，非常适合常规生产实验室，以提高非专业LC/MS 用户的分析能力。Quant-My-Way 可根据用户需求简化数据分析，大幅缩短从样品到报告的时间。此外，安捷伦全套 工作流程解决方案包括样品前处理、数据库和报告，有利于在食品安全分析中实现快速方法开发和验证。 ) ( 参考文献 ) ( 1. R egulation (EC) No 396/2005 of the European Parliament and ofthe Council of 23 February 2005 on maximum residue levels of pesticides in or on food and feed of plant and a nimal origin (including amendments as of 1 8 March 2008) and c omplying with regulation (EC) 1107/2009 ) ( Guidance document on analyticalquality control and methodvalidation procedures for pesticidesresidues and analysis i n food and feed， SAN T E/11813/2017，21-22 November 2017. https：//ec.europa.eu/food/sites/food/files/plant/docs/pesticides_mrl_guidelines_wrkdoc_2017-11813.pdf ) 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2017 ( 5991-8820ZHCN ) Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统适用于复杂食品基质中的农药多残留分析。Ultivo 三重四极杆液质联用系统的技术创新可实现稳定的检测且易于维护，非常适合常规生产实验室，以提高非专业LC/MS 用户的分析能力。Quant-My-Way 可根据用户需求简化数据分析，大幅缩短从样品到报告的时间。此外，安捷伦全套工作流程解决方案包括样品前处理、数据库和报告，有利于在食品安全分析中实现快速方法开发和验证。