食品中农药残留，真菌毒素，兽药，微量金属元素检测方案(液相色谱仪)

谷物基质中4种苏丹红的总离子流图与 MRM 定量离子流图，见图2 2.2 lu Agilent 食品安全应用技术专集 LC-MS/MS 在食品安全分析中的解决方案 Our measure is your success. 产品 应用 软件 服务 Agilent Technologies 食品安全领域面临的严峻挑战 国以民为本，民以食为天，食以安为先。食物是人类赖以生存和发展的物质基础。随着世界贸易、国际旅游的不断增长，食品、人口在各国之间的流动不断增加，使得食品安全性问题越来越全球性。往往在世界一端发生的某类因食品安全问题而爆发的疾病，会很快蔓延到世界的另一端。食品安全已经成为全球关注的重要问题之一，食品安全问题不仅影响人民的生命安全和健康，还涉及到经济的发展、社会的稳定以及国际间的纠纷问题。 随着国内市场连续出现的“红心鸭蛋和鸡蛋中苏丹红事件"、"猪肉和多宝鱼中硝基呋喃抗生素超标事件"、"桂花鱼含孔雀石绿事件”、“酱油风波"、“月饼风波"、“瘦肉精事件"、“奶粉事件"，对食品生产厂商和食品的安全性信心不足。 近几年，我国出口日本的鳗鲡鱼及制品已经多次因抗生素超标而被日方退货或销毁出口欧盟的冻虾仁产品中检出氯霉素而被拒收；出口到美国、日本和欧盟等国有的茶叶、蘑菇、肉类等农产品和食品因出现食品卫生问题；纷纷被进口国退货我国的冻鸡长期因兽药残留出口欧盟受阻酱油也由于氯丙醇污染问题影响了向欧盟和其他国家的出口。这一形势依然严峻，货物被扣或被退货不仅使我国蒙受了巨大的经济损失，而且也使得我国食品丧失了良好的信誉。据据道，我国2003年我国因食品安全问题受贸易技术壁垒影响的出口额达95亿美元。随着日本新的肯定列表制和欧盟新的农副产品进口标准的出台，此类数据近年来还有增加。 目前，针对日益严重的食品安全问题，发达国家一般都制定有比较完善的农药残留限量标准和检验方法标准。如食品卫生组织 (FAO)、/世界卫生组织(WHO)已经正式颁布了200多种农药的3000多项 MRL (最大残留水平)值标准；欧盟已制定了17000多项农产品的 MRL 值标准；美国共制定了9000多项MRL值标准；德国已经制定了200种农药活性成分的3400项MRL值标准；日本也制定200多种农药的近10000项MRL值标准。德国科研联合会(DFG)制定的多种残留检测方法可检测325种农药；美国食品与药品安全管理局(FDA) 的多种残留检测方法可检测360种农药；加拿大多种残留分析方法可检测251种农药。与发达国家相比，我国农、兽药残留限量标准的制定工作相对滞后。 目前，液相色谱三重串联四极杆质谱联用 (LC-MS/MS)技术将高效分离和高灵敏的检测合二为一，成为业界公认的对复杂基质中痕量目标化合物的定量分析的首选仪器。该技术在全球食品分析领域，已被广泛地接受和运用。 安捷伦科技一直致力于分析技术及应用的开发，并始终坚持不懈地为用户提供分析解决方案。 本应用文集，涵盖了安捷伦1200LC/6410 QQQMS在涉及食品安全分析领域内的最新方法和数据，并籍此希望能为广大用户在食品分析方面提供参考和帮助。 提高食品安全分析的可靠性和通量——确保从农场到餐桌上的食品安全 食品安全是全球性问题。消费者想保证他们餐桌上的食品是质量最好而无污染的。很多法规机构，如欧盟、日本卫生劳动和福利省、美国食品和药品管理局，正在针对进口、出口和国产食品强化各种食品标准。 如果您感到有压力，您并不是孤立无援 如果您在食品行业或法规机构的测试实验室或研发部门工作，您可能需要检测、鉴定和定量整个生产线的食品中的痕量化学成份。随着允许限量的降低和每天需要分析的样品数量的增加，您会要求提高分析技术的灵敏度、准确度和分析速度。 安捷伦可以提供帮助 就像在您的实验室一样，安捷伦的仪器在最苛刻的操作条件下的可靠性和长时间正常运行的性能已经赢得了国际声誉。采用安捷伦行业领先的可靠仪器，质量认证的备件和容易使用的软件解决方案，我们能够使您对分析结果充满信心，提高您的工作效率，降低您的分析成本。我们还能帮助您解读对法规条款和法定方法的迷惑。 灵活、易用的软件包 安捷伦的软件能保证最高的性能和最大的工作效率，同时提供满足繁忙的实验室测试任务要求的使用方便、灵灵性和耐用性。 应用支持和深入的法规知识 安捷伦的技术支持人员与重要的食品实验室和法规机构密切合作，以预测快速变化的市场需求。这种丰富的经验也是您实验室的宝贵资源，能帮助您应对当今最严峻的分析和工作效率方面的挑战。 食品安全的分析解决方案 农药残留 我们购买的大部分水果和蔬菜是在保护植物免受病虫害的化学品的帮助下生产的。为了人类的安全，对于食品和水样中的农药残留要进行常规监测。 农残检测有两个挑战：目标农药的筛选和鉴定(世界范围内使用的农药有850多种)，以及对非目标未知物的鉴定。没有单一的技术可以有效监测如此种类繁多的化合物。但是，采用安捷伦的气相色谱、气相色谱/质谱、液夜色谱和.液相色谱/质谱系统，您可以可靠地进行常规筛选，对所有法规限定的痕量农药进行鉴定和定量分析。采用先进的技术，比如我们的GC微板流路控制技术、省时的软件工具和超快速高分离度RRLC，您可以比过去更快更容易地实现这些分析. 安捷伦的三重串联四极杆液质联用系统(QQQ)提供高的选择性，实现目标化合物的灵敏检测和定量分析。对于非目标化合物或未知农药的筛选和鉴定，我们的液相色谱/飞行时间质谱具有获得质量准确度优于2 ppm的全扫描谱图的功能和灵敏度；四极杆-飞行时间质谱系统提供MS/MS功能，还有用于微量检测和鉴定准确质量碎片离子的选择性和降噪声功能。 LC/MS：采用LC/MS/MS多反应监测(MRM)方法，单次运行筛选300种农药。食品提取物中加入300种农药的MRM色谱图显示每种化合物有两物tran-sitions，这显示了安捷伦LC/QQQMS的筛选和鉴定微量农药的能力。 GC/MS：单次运行，多检测器分析牛奶提取物。微板流路控制装置通过分流色谱柱流出物到多个检测器(质谱检测器、双通道火焰光度检测器和微池电子捕获检测器)提高了工作效率：全扫描总离子流图提供定量和确认；元素选择性气相信号明确显示了质谱鉴定的微量化合物。 安捷伦的微板流路装置还提供反吹功能，以显著缩短分析周期，防止记忆效应，延长色谱柱寿命。 采用安捷伦的解解积报告软件(DRS)农药库，在2分钟的数据处理时间内就鉴定了草莓提取物中的7种农药。如果没有DRS，分析人员就要用约30分钟的时间才能鉴定和确证样品中所有的农药。 真菌毒素 真菌毒素是真菌产生的强毒性化合物。当储存条件有利于真菌生长时，真菌毒素就会污染食品。 由于已知的真菌毒素有100种化合物，所以难以进行单一真菌毒素的分析；任何单一的毒素在复杂的有机介质中很可能以极低的浓度存在。安捷伦RRLC的快速和高分离能力，常常与质谱结合起来，已经被证明是检测和定量分析这些严格限制的污染物的快速而可靠的方法。 LC/MS：原始真菌提取物二次代谢物的快速分析。新的LC/TOF方法能够实现非目标未知化合物和二次代谢物分析、真菌毒素和从农产品中分离得到的其他感兴趣的化合物的鉴定。 由病毒、细菌、原生动物和真菌引起的动物疾病要用如抗生素这样的药物来预防和治疗。家禽家畜和农田养鱼也可能食用生长刺激药物。 由于这些兽药可能残留到食品中，如牛奶、鸡蛋、鱼、肉和蜂蜜，世界各国的政府机构都采取严格的监管和监测措施。安捷伦高灵敏的质谱解决方案提供复杂样品基质中兽药残留或其代谢物的快速而可靠的分析。 LC/MS：罗非鱼提取物中孔雀石绿和隐色孔雀绿的MRM分析。正模式电喷雾离子化(ES/+)和LC/MS/MS MRM方法实现了确认和定量，而不用费时的Pb02氧化处理。定量限为0.01 pg/Kg，很容易满足日本和欧盟设定的2 pg/Kg的进口要求。 微量金属元素 某些微量金属在人体营养中起着很重要的作用，而另一些金属则是强毒性的。因此，在食品生产的几乎每一步骤都要进行监测。元素含量还可以提供食品地理来源和真假的信息。 碰撞/反应池(CRC)技术消除了很多多原子干扰，拓宽了ICP-MS可以监测的元素范围。此外，采用惰性氦气反应池气体和安捷伦的八极杆反应池系统(ORS)可以筛选多种元素，比如ArC、OCI、ArCI和ArAr，这可能影响微量元素，如Cr、V、As和Se的测量。 ICP-MS：采用八极杆反应系统(ORS)采集的浓咖啡的质谱图。在氦气碰撞模式下操作ORS是一种消除对被分析离子的多原子干扰的简单而有效的方法。结果是简化的质谱图清楚地显示咖啡样品中存在各种微量元素。 Agilent 2100生物分析仪使从产品开发到QA/QC的工作流程顺畅如流 用于蛋白质和DNA分析的方便经济的芯片实验室技术将样品处理、混合、稀释、电泳、标记和检测集成到一个小型化系统中。灵活的分析平台很适合于各种食品安全应用，包括： ·食品过敏原 ·肉和鱼的真伪鉴别 ·遗传变异微生物的多元筛选 ·牛奶中蛋白质质量和含量 ·小麦品种的遗传识别和小麦蛋白的含量 ·Basmati水稻的真伪鉴别 过敏原 最近美国、欧盟、日本、加拿大和澳大利亚的法规和政策变化要求标注食品中多种过敏原。 由于所分析基质的复杂性，现行的方法在一次测试中一般只能检测单一过敏原。2100生物分析仪与标准多元PCR技术相结合，可以在一次运行中低成本地筛选多种过敏原。 单次运行同时检测三种坚果。2100生物分析仪的类似凝胶电永的数字输出显示下列坚果为阳性结果：阿月浑子果(条带4)，巴西坚果(条带5)和澳大利亚坚果(条带6)，以及小麦中这三种坚果的混合物(条带7)。资料来源： Campden and Chorleywood Food Research Association Group， Gloucestershire， UK. 我们提供当今最齐全的食品安全分析中目标化合物和非目标化合物分析的的决方案。采用安捷伦的各种高质量分析仪器，我们可以帮助您选择足能满足您的需求和预算的技术平台和方法，并且您还可以从单单可靠供货商享受到实验室管理的便利。我们的技术包括： 气相色谱和气-质联用仪更快的柱箱冷却速度、独有的微板流路控制技术、先进的自动化功能和更快的气相色谱/质谱柱箱升温速率能够使您以最低的样品分析成本在更短的时间内分析更多的样品。微量离子检测技术降低了复杂基质样品的检测限，而功能强大的解卷积报告软件(DRS)可节省数据分析时间。 液相色谱、液相色谱/质谱和液相色谱/质谱/质谱的分析速度快、分离能力强，简化了样品处理过程，，可可用于目标化合物的高灵敏度分析和未知物的准确鉴定。Agilent 1200高分离度快速液相色谱系统将运行时间缩短到以秒计， 飞行时间质谱、四四极杆-飞行时间质谱、、三重串联四极杆质谱和离子阱质谱系统具有行业领先的性能，可每周7天、每天24小时可靠地工作。 电感耦合等离子体质谱为高效元素分析设定了新的标准。痕量多元素快速分析具有无可比拟的基质耐受性和消除干扰的能力。 2100生物分析仪和芯片实验室生物分析系统可准确而重复地测定1pL样品中的蛋白质和核酸含量，用于食品形态分析、加工食品分析、食品鉴别、GMO测试和过敏测试。 功能齐全 强实分析 ·比 HPLC快20倍 ·比 HPLC 分离度高 60% 每天分析2000个样品 30分钟内峰容量高达500 ·与常规 HPLC 方法完全兼容 ·安捷伦智能化服务提供全面保障 世界上速度最快、效率最高、灵活性最大的液相色谱系统 提高效率、增强分析结果的置信度以及成本效率是当今分析实验室最至关重要的目标。 安捷伦1200系列高分离度快速液相色谱系统(1200系列 RRLC系统)的设计，旨在用一个通用系统满足上述所有要求。该系统在0.05-5 ml/min 的分析流速范围内工作，在兼具常规1200仪器系统所有能力的同时，又能够实现 RRLC 和 RRLC/MS的全新性能。不仅如此，安捷伦1200系列高分离度快速液相色谱系统使仪器的耐用性、运行时间和法规依从性达到了前所未有的新水平。 速度 安捷伦1200系列RRLC 系统采用第二代ZORBAX 快速分离高通量之1.8 pm 色谱柱(RRHT)， 在保持 HPLC 高质量分离度、精密度和灵敏度的同时，分析速度最快可比 HPLC 高20倍之多。 保障：仪器不仅可以完全满足当今的需求，而且能够随时面对未来的挑战。 可靠性和兼容性 60，000 余台安装系统已使1100系列液相色谱系统誉满全球。新的安捷伦1200系统基于成功的1100系统构建。该系统能够在实现最高分析速度和分离度的同时，将系统的压力控制到最低。因此，1200 RRLC 保持了常常 HPLC仪器和方法的耐用性、性能和操作原则。熟悉HPLC 操作的用户无需再进行培训就能很快接受 RRLC 系统。 灵活性达到新水平 -最大的方法自由度和最低的投资成本 两个任务- -个系统 1200 系列 RRLC 系统不仅适合新的 RRLC 应用，而且适用于传统 HPLC 方法。如此兼容性给予用户安全投资的信心——系统既能适应当前的需要，又可面对未来的挑战。系统可使用柱长10-300 mm 的窄柱和标准分析柱，其内径范围1-4.6mm、粒径范围1.5-10pm。1200二元泵延迟体积的可调节性、仪器流路和UV检测池的可优化能力，使系统具有适于任何分析条件的独特的灵活性和可扩展能力。 标准延迟体积配置使系统能够在单一仪器系统上运行使用标准色谱柱的 RRLC 和 HPLC方法——性能毫无折衷，且无需重新进行方法认证。 120 pL 的低延迟体积配置则为高速、LC 和LC/MS窄柱应用而优化。 方法开发的灵活性 ZORBAX 1.8 pm RRHT 色谱主有 80多个规格，其中涵盖不同种类的键合相，柱长由20mm 到150 mm， 内径从1 mm 到4.6mm。 上述为方法开发的最大灵活性提供了选择性和效率保证。 RRHT 使用与 ZORBAX 3.5 和5 pm粒径色谱柱相同的填料。故所有相同品牌不同粒径(1.8，3.5，5 pm)皆具有完全相同的选择性，使得从 HPLC 与 RRLC 之间方法的相互转换快速、简便、且有保障。 1200 RRLC 系统的标准延迟体积配置在运行HPLC方法时，其保留时间仅比HPLC 仪器相差小于2%，这不仅使色谱峰追踪和鉴定准确无误，而且无需重新认证HPLC 方法。 安捷伦 1200 系列 RRLC 系统为标准色谱柱与窄柱的 RRLC 和 HPLC 方 法提供了毫无折衷的保障 窄柱 标准柱 内径 1mmID 2.1 mm ID 3.0 mm ID 4.6 mm ID 高分离度 150 150 1200RRLC 超快 不同系统对亚-2pm 不同规格色谱柱的兼容性。安捷伦 1200 系列RRLC系统全面支持柱长 20mm 到150 mm 的 RRHT标准分析柱与窄柱 标准延迟体积配置不仅使系统能够运行 RRLC， 而且能够使用传统 HPLC方法，且毫无性能折衷和色谱分离模式的变化 液-质联用家族的扩展 全新的 Agilent 6000 系列液-质联用系统的推出表达了安捷伦对液-质联用客户的承诺：设计生产出具有出色分析性能同时可靠易用的液-质联用系统。 液-质联用系统 6000系列液-质联用系统包括全新的单四极杆质谱、三重串联四极质谱(QQQ)及四极杆-飞行时间串联质谱(QTOF)， 和已被业界认可的安捷伦飞行时间质谱和离子阱质谱仪。 ·6510四极杆-飞行时间串联质谱 (QTOF)一具有出色的 QTOF 灵敏度，可以获得所有离子的精确质量数，大大提高结果的可靠性。整体设计紧凑，为台式质谱类型 ·6410三重串联四极质谱(QQQ)在三重串联四极质谱的价值方面建立了新的标准：出色的灵敏度，操作简单以及高可靠性和性能价格比 ·6300系列离子阱系统一超高灵敏度和可靠性 XCT ultra 还可以配备全新的电子转移裂解(ETD)功能，可以大大提高后转移修饰蛋白质的分析结果的质量 ·6210飞行时间质谱一出色的质量精度、质量分辨率和动态范围， 除此之外，还具有全自动调谐，全自动质量轴校正，和自动倒入 共享已被证明的和创新的技术 6000系列液-质联用系统通过采用成熟的技术和新发明来提高整体的性能。全新的 6510 QTOF 具有出色的质量精度、分辨率和动态范围。64100QQ和6510 QTOF都采用创新的高压，线性加速碰撞反应池设计，因此可以获得最优化的 MS/MS 解离能量，而且消除记忆效应。安捷伦的离子源在6000系列液-质联用仪之间可以方便转换。 多种离子源适合每一种应用 在6000系列液-质联用上，安捷伦提供最广泛的离子化技术以满足更宽的应用。安捷伦的离子源采用交叉直角喷雾和可控温反吹干燥气设计，这样最大程度地提高分析性能，可靠性和 使用方便性。最近，安捷伦又推出了革命性 的组合离子源，它可以同时进行电喷雾 (ESI) 和大气压化学电离源 (APCI) 离子 化，而不损失灵敏度。 液-质联用仪用于食品安全分析 安捷伦是化学分析领域中液相色谱，气相色谱和气-质联用仪的最大厂商。随着包括液-质联用仪分析市场的发展，安捷伦的液-质联用解决方案将为用户提供更高的分析效率和更高的性能可靠性。 6300 系列离子阱质普系统 自动的和数据相关的 MS/MS功能，6300系列质谱是用于未知化合物鉴定和结构解析的可靠手段。 6210飞行时间质谱 6210飞行时间质谱的质量数测量精度小于3 ppm，是小分子化合物分析的理想技术。6210飞行时间质谱是食品、环境法医分析中未知化合物鉴定的首选技术。 6410三重串联四极质谱 (QQQ) 对于复杂基体样品中目标化合物的确认定量，三重串联四极质谱的多反应监测分析(MRM) 是黄金标准。6410三重串联四极质谱具有出色的灵敏度和可靠性，可以保证快速而准确地分析大量的样品。 6100 系列四极杆液-质系统 全新的6100系列液-质具有更高的性能，出色的可靠性和操作简单性，以及更小的外观尺寸。组合源为多种离子源之一，使6100系列可以同时采集电喷雾、大气压化学电离、正离子模式、负离子模式的质谱数据，同时不损失灵敏度。 目录 食品安全领域面临的严峻挑战···.... 2 Agilent 1200液相色谱/6410串联四极质谱联用测定苹果、谷类、蜂蜜、肉类中403种多农药残留量·... .13 Agilent 6410串联四极杆质谱分析罗非鱼中的硝基呋喃代谢物…. 29 Agilent 6410 串联四极质谱检测食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿…..... 32 乳制品中双氯青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素G、青霉素V残留量检测方法·... .36 Agilent 6410 串联四极质谱检测食品中的丙烯酰胺·..... 39 Agilent 6410 串联四极杆质谱检测食品中的β，受体激动剂… 43 Agilent 6410 LC/MS 串联四极质谱分析蜂蜜中的氯霉素·... .51 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极质谱联用测定饲料中苏丹红 (Sudan Red) 含量….. 58 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极质谱仪测定二甘醇 (Diethylene Glycol，DEG)含量· 61 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极质谱仪测定邻苯二甲酸酯 (Phathalate， DIDP 和DINP)含量… 63 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极杆质谱仪测定湖水中的微囊藻素 (Microcystein， RR、YR和LR)· 65 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四级杆质谱仪测定三聚氰胺 (Melamine) 和氰尿酸 (Cyanuric Acid) 含量….....69 液相色谱/串联质谱法 (LC/MS/MS)分析宠物食品中三聚氰胺··... 71 Agilent 食品安全应用信息·..... 74 食品安全相关法规资料及网址…..... ..75 中国有关食品安全的部分国家标准…· 76 Agilent 1200 液相色谱/6410串联四极质谱联用测定苹果、谷类、蜂蜜、肉类中403种多农药残留量 本方法介绍了谷物、蜂蜜、苹果、肉类等食品介质中403种多农药残留量液相色谱-串联四极质谱测定方法。 2.试剂 2.1所有试剂均为色谱纯； C18 SPE柱(Supelclean LC-18，83 ml Tubes， Supelco)；；微微孔滤膜过滤：0.45 om。 2.2标准溶液 2.2.1标准储备溶液 分别称取适量(精确至0.1mg)每种农药标准物质分别至于10mL容量瓶中，根据标准物质的溶解度选甲醇、乙腈等溶剂溶解并定溶至刻度。 2.2.2混合标准溶液(混合标准溶液A、B、CD、E和F) 按照农药及相关化学品的性质和保留时间，将403种农药及相关化学品分成A、B、C、D、E、F六个组。并根据每种农药在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。 依据每种农药的分组、及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药的标准储备液于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液避光4℃保存，可使用一个月。 3.仪器 Agilent 1200 RRLC (Rapid resolution liquidchromatography，高分离度快速液相色谱)； Agilent 6410 QQQ(三重串联四极杆质谱)。 震荡仪；旋转蒸发仪；氮气吹干仪；梨形瓶；分液漏斗。 4.1提取与净化 称取10g样品(谷物、肉类、苹果或蜂蜜)至300 mL 三角瓶中，加入100 mL乙腈并震摇30分钟，过滤乙腈提取液至100 mL梨形瓶中，于40℃水浴浓缩至 5mL左右。100mL4%氯化钠水溶液分三次溶解浓缩液，并将其全部转移至分液漏斗中，加入 50 mL二氯甲烷震荡提取10分钟(重复二次)。下层有机相过装有无水硫酸钠的漏斗于 100 mL梨形瓶中，40℃水浴旋转浓缩蒸干后用 5 mL 甲醇溶解，上C18 SPE 柱 (Supelclean LC-18， 3 mL Tubes，Supelco； SPE 柱预先用5 mL甲醇洗脱，然后用5 mL洗脱进行预处理)，用5mL甲醇洗脱，全部甲醇洗脱液在氮气下吹干，残留物用甲醇：水(15：85)定容至1mL， 0.45 cm 微孔滤膜过滤后供LC-MS/MS分析。 4.2测定 4.2.1色谱条件 a)谱柱： Agilent SB-C18， 2.1 x 100 mm， 1.8 om； b)柱温：50℃； c)进样量：20cL； d) 流动相及流速见表 1； e)后运行时间：8min； 4.2.2质谱条件 a)电离源模式：电喷雾离子化； b)电离源极性：：正模式； c)雾化气：氮气； d)雾化气压力：40 psi； e) 离子喷雾电压：4000V； f)干燥气温度：350℃； g)干燥气流速：10 L/min； 步骤 总时间/min A：水(0.1%甲酸+10mM乙酸铵)/(%) B：乙腈/(%) 流速/(ml/min) 0 99 0.3 2 4 50 50 0.3 3 15 40 60 0.3 4 20 20 80 0.3 5 25 99 0.3 6 30 99 0.3 7 30.1 99 0.3 4.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种农药及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的二对离子及丰度比也一致，则可判定为样品中存在这种农药残留。 4.2.4定量测定 本方法中 LC-MS/MS 采用外标校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液采用基质混合标准工作溶液绘制，并且所测样品中农药残留的响应值均在线性范围内。 4.2.4平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 4.2.4空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 5.结果计算 LC-MS/MS 测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由 Mass Hunter 定量软件 Quantita-tive Analysis 计算生成。线性浓度范围0.5-500 ng/mL，R>0.99. 403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差，见表2。 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差 /min 电压/V能量/V 偏差(%) (og/kg) A组 1 烯啶虫胺 nitenpyram 5.99 271/237 271/237：271/224 100 15；15 2.29 0.07 2 丁酮威亚砜 butocarboxim sulfoxide 5.34 207/75 207/75：207/132 80 5；10 1.47 0.03 3 砜吸磷 demefon-S-methl sulfoxide 5.87 247/169 247/169：247109 100 10；30 1.20 0.03 4 久效磷 monocrotophos 5.97 224/127 224/127：224/193 100 205 2.76 0.03 5 砜吸磷 demeton-S-methyl sulfone 6.20 263/169 263/169；263/125 80 15：20 4.08 0.04 6 乙硫苯威亚砜 ethiofencarb sulfoxide 6.35 242/107 242/107；242/185 80 15；5 2.11 0.07 7 抗蚜威 pirimicarb 7.96 239/72 239/72；239/182 120 20；15 1.51 0.07 8 速灭磷 mevinphos 6.69 225/193 225/193；225/127 80 1；15 1.96 0.08 9 磺噻隆 ethidimuron 6.63 265/208 265/208；265/162 80 10；25 2.97 0.08 10 吡虫啉 imidacloprid 6.73 256/209 256/209；256/175 80 10；10 3.21 0.13 11 密草通 secbumeton 8.34 226/170 226/170；226/142 120 20；25 1.27 0.03 12 西草净 simetryn 8.20 214/124 214/124；214/96 120 20；25 1.22 0.03 13 噻虫啉 thiacloprid 7.35 253/126 253/126；253/186 120 20；10 1.67 0.08 14 盖草津 methoprotryne 9.07 272/170 272/170：272/198 140 30；25 1.52 0.02 15 对氧磷 paraoxon methyl 7.67 248/202 248/202；248/90 120 20；30 1.83 0.12 16 螺环菌胺 spiroxamine 10.89 298/100 298/100；298/144 120 35；20 1.98 0.12 17 氰草津 cyanazine 7.80 241/214 241/214；241/174 120 15；15 2.66 0.06 18 甲基硫菌灵 thiophanate methyl 7.87 343/151 343/151；343/311 120 20；10 2.83 0.15 19 马拉氧磷 malaoxon 8.10 315/99 315/99：315/127 80 20；10 1.26 0.04 20 倍硫磷亚砜 fenthion sulfoxide 8.21 295/280 295/280；295/109 140 20/35 1.16 0.03 21 环莠隆 cycluron 8.68 199.4/72 199.4/72；199.4/89 120 25；15 1.17 0.09 22 扑草净 prometryne 10.60 242/158 242/158；242/200 120 20；20 1.41 0.03 23 甲基毒死蜱 chlorpyrifos methyl 15.75 322/125 322/125：322/290 80 15；15 5.3—5 1.7— 24 吡咪唑 rabenzazole 8.64 213/172 213/172：213/118 120 25；25 1.68 0.03 25 绿谷隆 monolinuron 8.62 215/126 215/126；215/148 100 15；10 3.58 0.08 26 异丙威 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气： 相对标准 检出限 /min 电压/V 能量/V 偏差(%)( (og/kg) 35 甜菜胺 desmedipham 9.79 301/182 301/182；301/136 80 5：20 3.12 0.16 36 伐灭磷 famphur 9.84 326/217 326/217；326281/ 100 20；10 1.59 0.07 37 杀扑磷 methidathion 9.94 303/85 303/85；303/145 80 10；5 0.76 0.12 38 氯苯嘧啶醇 fenarimol 10.76 331/268 331/268：331/81 120 25；30 3.09 0.33 39 丙森锌 iprovalicarb 10.68 321/119 321/119：321/203 100 25：5 2.20 0.05 40 二甲酚草胺 dimethenamid 10.46 276/244 276/244；276/168 120 10；15 1.93 0.03 41 腈菌唑 myclobutanil 10.57 289/70 289/70；289/125 120 15；20 3.19 0.07 42 异噁氟草 isoxaflutole 10.40 360/251 360/251；360/220 120 10；45 4.54 0.08 43 乙环唑 etaconazole 10.97 328/159 328/159：328/205 80 25：20 1.61 0.16 44 苄氯三唑醇 diclobutrazole 11.45 328/70 328/70；328/159 120 30；35 1.61 1.7 45 敌草胺 napropamide 11.51 272/171 272/171；272/129 120 15：15 1.76 0.07 46 氟硅唑 flusilazole 11.74 316/165 316/165：316/247 120 20；15 1.37 0.03 47 联苯三唑醇 bitertanol 12.12 338/70 338/70；338/269 60 5；1 4.23 0.17 48 戊菌唑 penconazole 12.11 284/159 284/159；284/70 120 20；15 3.75 0.03 49 氟酰胺 flutolanil 12.08 324/262 324/262；324282 120 20；10 2.71 0.03 50 乙草胺 acetochlor 12.24 270/224 270/224；270/148 80 5：20 3.73 0.09 51 杀螟硫磷 fenitrothion 10.43 278/246 278/246；278/125 140 15；15 2.42 0.14 52 益棉磷 azinphos ethyl 12.54 346/233 346/233；346/261 120 10；5 3.70 0.15 53 敌瘟磷 edifenphos 13.03 311/109 311/109；331/283 100 35；10 3.12 0.03 54 丁嗪草酮 isomethiozin 13.20 269/200 269/200；269/172 120 15；25 4.28 0.17 55 溴苯烯磷 bromfenvinfos 13.66 403/170 403/170；403/127 100 35；20 4.37 0.06 56 苯霜灵 benalaxyl 13.70 326/148 326/148；326/294 120 10；5 5.06 0.03 57 苯氟磺胺 dichofluanid 13.41 333/123 333/123；333/224 80 20；10 1.7 58 杀铃脲 triflumuron 13.77 359/139 359/139；359/156 120 30；15 3.14 0.13 59 吡草醚 pyraflufen ethyl 14.57 413/339 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 i 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气： 相对标准 检出限 /min 电压/V能量/V 偏差(%)( (og/kg) 70 氯亚胺硫磷 dialifos 17.12 394/208 394/208；394/187 100 5；20 6.32 0.14 71 喹禾灵 7quizalofop ethyl 17.64 373/299 373/299：373/271 120 15；25 1.11 0.03 72 胺菊酯 tetramethirn 19.25 332/135 332/135：332/164 100 15；15 4.93 0.08 73 吡氟禾草灵 fluazifop butyl 20.47 384/282 384/282；384/328 120 20；15 0.70 0.04 74 敌噁磷 dioxathion 21.04 479/97 479/97；479125 100 15；10 8.16 3.0 75 烯丙菊酯 allethrin 19.77 303/135 303/135；303123 60 10；20 5.30 0.13 76 氟虫脲 flufenoxuron 20.85 489/158 489/158；489/141 80 10；15 4.13 0.25 77 噻螨酮 hexythiazox 20.44 353/168 353/168：353/228 120 20；10 2.64 0.04 78 野麦畏 triallate 21.20 304/143 304/143；304/86 120 25；15 4.78 0.3 79 酞酸二环己基酯 phthalic acid， dicyclohexyl ester 17.65 313/149 313/149；313/205 100 5；1 1.84 0.16 80 丙硫磷 prothiophos 23.57 345/241 345/241；345/269 60 20；10 4.12 0.3 B组 81 矮壮素 chlormequat 0.86 122/58 122/58；122/63 100 35；20 1.5 0.13 82 烟碱 nicotine 1.17 163/130 163/130：163/117 100 25；30 6.3 0.4 83 脱甲基抗蚜威 oirmicarb-desmethyl 5.70 225/72 225/72；225/168 100 25；10 1.5 0.13 84 乙酰甲胺磷 acephate 1.46 184/143 184/143：184/95 60 5；20 1.8 0.14 85 多菌灵 carbendazim 3.86 192/160 192/160；192/132 80 15；20 3.1 0.13 86 蚜灭多砜 vamidothion sulfone 1.44 178/87 178/87；1178/60 100 15；10 0.17 87 甲氟磷 dimefox 5.00 155/110 155/110；155/135 120 20；10 2.2 0.17 88 噻虫嗪 thiamethoxam 4.89 292/181 292/181；292/211 80 20；10 3.7 0.084 89 噻虫胺 clothianidin 5.63 250/169 250/169；250/132 80 10；15 2.2 0.047 90 非草隆 tenuron 5.78 165/72 165/72；165/120 120 15；15 0.54 0.057 91 野燕枯 difenzoquat-methyl sulfate 7.25 249/193 249/193；249/130 140 30；40 2.0 0.084 92 安硫磷 formothion 6.03 230([M+H- H，0]+)/199 230/199；230/125 80 5：20 3.5 0.05 93 特普 TEPP-A 7.03 291/179 291/179：291/99 100 20；35 6.0 0.4 94 脱乙基另丁津 desethyl sebuthylazine 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气 相对标准 检出限 /min 电压/V能量/V 偏差(%) ( (og/kg) 103粉唑醇 flutriafol 8.08 302/70 302/70；302/123 120 15：20 1.4 0.084 104久效威 thiofanox 8.23 241/57 241/57；241/184 120 15；5 3.5 1.7 105精甲霜灵 mefenoxam 8.44 280/192 280/192；280/220 100 10；15 4.6 0.04 106敌草隆 diuron 8.30 233/72 233/72；233/160 120 20；20 0.65 0.05 107枯莠隆 difenoxuron 8.49 287/72 287/72；287/123 120 20；15 1.3 0.057 108溴谷隆 methobromuron 8.54 259/148 25/148；259/170 80 15；15 1.5 0.084 109硫赶内吸磷 demeton-(S) 8.90 259/89 259/89；259/61 60 10；35 2.4 0.04 110二甲草胺 dimethachlor 9.05 256/224 256/224；256/148 120 10：20 4.7 0.037 111发硫磷 Prothoate 9.03 286/227 286/227；286/199 100 5：15 3.1 0.12 112扑灭津 propazine 9.38 230/146 230/146；230/188 120 20；15 0.69 0.084 113乙拌磷砜 disulfoton sulfone 9.19 307/97 307/97：307/125 100 30；10 0.69 0.17 114甜菜宁 phenmedipham 9.47 301/136 301/136；301/168 80 20；5 3.4 0.13 115呋霜灵 furalaxyl 9.82 302/242 302/242：302/270 100 15；5 4.5 0.04 116特丁津 terbuthylazine 9.71 230/174 230/174；230/132 120 15：20 1.8 0.019 117呋草酮 tlurtamone 9.87 334/247 334/247；334/303 120 30；20 4.3 0.13 118糠菌唑 bromuconazole I&ll 10.36 11.04 376/159 376/70 376/159；376/70 80 20；20 2.9 0.11 119禾草敌 molinate 10.51 188/83 188/83；188/126 120 15；10 3.7 1.7 120环酯草醚 pyriftalid 10.31 319/139 319/139；319/179 140 35；35 1.8 0.14 121氯炔灵 chlorbufam 10.27 224/154 224/154；224/172 120 15；5 7.9 1.7 122异噁酰草胺 isoxaben 11.21 333/165 333/165；333/150 120 15；50 1.1 0.054 123乙氧酰草黄 ethofume sate 10.91 287/121 287/121；287/161 80 10；20 7.6 0.09 124联苯阱脂 bifenazate 11.26 301/170 301/170；301/198 60 20；5 6.7 0.24 125联苯二胺 diphenylamin 11.43 170/93 170/93：170/152 120 30；30 7.5 0.16 126麦草氟甲酯 flamprop methyl 11.30 336/105 336/105：336/304 80 20 1.0 0.044 127异稻瘟净 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 i 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞撞 ： 相对标准 检出限 /min 电压/V能量/V 偏差(%)( (og/kg) 137对硫磷 parathion ethyl 13.90 292/236 292/236；292/264 120 10；5 4.4 0.06 138乙嘧硫磷 Etrimfos 13.97 293/125 293/125：293/265 120 20；15 7.1 0.023 139麦草氟异丙酯 flamprop isopropyl 14.68 364/105 364/105：364/304 80 20；5 1.7 0.030 140甲基嘧啶磷 pirimiphos methyl 16.16 306/164 306/164；306/108 120 20；30 4.2 0.09 141苯腈磷 cyanofenphos 15.12 304/276 304/276；304/157 100 10；20 4.7 0.13 142甲拌磷 phorate 15.41 261/75 261/75；261/199 80 10；5 3.8 0.4 143氟铃脲 1hexaflumuron 15.98 461/144 461/144；461/158 120 35；20 2.6 0.4 144噻草酮 cycloxydim 16.62 326/180 326/180：326/280 120 15；10 4.3 0.12 145我肟菌治 trifloxystrobin 17.77 409/186 409/186；409/206 120 15；10 3.3 0.04 146氟酰脲 novaluron 17.52 493/141 493/141；493/158 80 35/15 2.6 0.87 147烯草酮 clethodim 18.06 360/164 360/164；360/268 120 20；10 2.7 0.17 148氟吡酰草胺 picolinafen 18.57 377/238 377/238；377/359 120 20：20 4.9 0.037 149生物烯丙菊酯 bioallethrin 19.64 303/135 303/135；303/107 80 10；20 2.2 0.1 150吡丙醚 pyriproxyfen 19.89 322/96 322/96：322/227 120 15；10 1.9 0.04 151喹螨醚 fenazaquin 20.11 307/57 307/57；307161 120 20；15 2.3 0.14 152炔螨特 propargite 21.96 368/175 368/175；368/231 100 15；15 5.3 0.47 153脱叶磷 DEF 22.91 315/169 315/169：315/113 100 10；20 1.2 0.054 154生物苄呋菊酯 bioresmethrin 23.78 339/143 339/143；339/171 100 25；15 4.2 0.17 155氟胺氰菊酯 tau fluvalinate 24.72 503/181 503/181；503/208 80 25；15 4.6 1.2 C组 156 甲胺磷 Methamidophos 2.48 142/94 142/94；142/125 80 15；10 0.89 0.13 157杀线威 0xamyl 5.91 242/72 242/72；242/121 120 15；10 0.99 0.3 158西玛通 Simeton 7.04 198/100 198/100；198/128 120 25：20 1.6 0.08 159敌百虫 Trichlorphon 6.44 257/109 257/109：257/221 120 20；10 5.8 0.4 160 甲拌磷亚砜 phorate sulfoxide 8.46 277/143 277/143；277199 80 5；15 2.6 0.17 161溴莠敏 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间J)定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气： 相对标准 检出限 /min 电压/V 能量/V 偏差(%)((og/kg) 171灭藻醌 quinoclamine 7.75 208/105 1208/105；208154 120 30：20 0.6 1.7 172乙拌磷亚砜 disulfoton-sulfoxide 8.44 291/185 291/185；291/157 80 10；20 2.5 0.17 173嘧霉胺 pyrimethanil 9.74 200/107 200/107；200/183 120 25：25 2.5 0.1 174甲基乙拌磷 thiometon 8.51 247/89 247/89：247/171 100 10；10 1.7 175 甲霜灵 metalaxyl 8.77 280/192 280/192；280/220 120 15：20 4.0 0.03 176呋酰胺 ofurace 8.61 282/160 282/160；280/254 120 20；10 2.1 0.017 177丰索磷 fensulfothion 9.04 309/157 309/157；309/253 120 25；15 3.0 0.17 178异戊乙净 dimethametryn 11.91 256/186 256/186；256/96 140 20；35 2.1 0.017 179 内吸磷 demeton (0+S) 9.23 259/89 259/89：259/61 100 5；30 3.8 0.08 180 敌蜱 propanil 9.43 218/127 218/127：218/162 120 20；15 2.4 0.3 181 灭菌唑 triticonazole 10.18 318/70 318/70；318/125 120 15：35 2.6 0.04 182呋啶草酮 fluridone 9.92 330/309 330/309：330/259 160 40；55 3.6 0.017 183嘧鲜胺 prochloraz 13.33 376/266 376/266：36/308 80 10；10 7.1 0.17 184甲硫威 methiocarb 9.84 226/121 226/121：226/169 80 10；5 3.1 0.08 185咯菌腈 fludioxonil 9.97 266/185 266/185；266/229 80 25；5 11.5 1.7 186解草嗪 benoxacor 10.34 260/149 260/149；260/134 120 15：20 4.1 0.8 187氯硫磷 chlorthion 8.81 298/109 298/109；298/125 100 20；15 0.8 188氟环唑 epoxiconazole 10.93 330/121 330/121；330/141 120 20：20 2.3 0.17 189 氟喹唑 fluquinconazole 11.13 376/307 376/307：376/272 140 25：35 11.7 0.7 190嘧菌胺 mepanipyrim 11.37 224/106 224/106：224/77 120 25；30 1.7 0.09 191 甲氧虫酰阱 methoxyfenozide 11.86 313/149 313/149；313/91 100 10：35 2.6 0.09 192灭锈胺 mepronil 11.70 270/119 270/119；270/228 100 30；15 5.0 0.017 193胺磺乐灵 oryzalin 11.80 347/198 347/198；347288 120 25：20 0.33 194苯氧威 fenoxycarb 20.02 362/288 362/288；362/244 120 20；20 — 195噻吩草胺 thenylchlor 12.40 324/127 324/127；324/59 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 i 定量离子 定性离子 源内碎裂碰碰撞 相对标准 检出限 /min 电压/V能量/V 偏差(%)( (og/kg) 205新燕灵 benzoylprop-ethyl 15.08 366/105 366/105；366/77 80 15；35 1.8 0.06 206地虫硫磷 fonofos 15.12 247/109 247/109；247/137 80 15；5 4.7 0.3 207蝇毒磷 coumaphos 15.49 363/227 363/227；363/307 120 20；15 1.7 0.09 208伏杀硫磷 phosalone 16.16 368/182 363/182；363/322 80 10；5 2.1 0.03 209辛硫磷 phoxim 16.23 299/77 299/77：299/129 80 20；10 2.4 0.07 210哌草磷 piperophos 16.91 354/143 354/143；354/171 100 30；20 2.2 0.07 211氯辛硫磷 chlorphoxim 17.06 333/125 333/125；333/163 80 5；5 4.2 0.17 2-甲-4-氯丁 212 氧乙基酯 MCPA-butoxyethyl ester 17.84 301/227 301/227；301/59 80 5；15 213乙羧氟草醚 fluoroglycofen-ethyl 19.15 344/300 344/300；344/233 120 15；20 214增效醚 piperonly butoxide 19.00 356/177 356/177；356/119 100 10：35 2.3 0.02 215氟硫草定 dithiopyr 19.28 402/354 402/354；402/272 120 20：30 4.2 0.7 216胺氟草酯 flumiclorac-pentyl 20.13 441/308 441/308；441/354 100 25：10 5.8 0.03 217乙氧氟草醚 oxyfluorfen 20.01 362/237 362/237；362/316 120 25；10 一 218丁草胺 butachlor 19.90 312/162 312/162；362/238 80 20；10 5.5 0.3 219碘硫磷 iodofenphos 19.74 413/125 413/125；413/381 100 20：20 220双硫磷 temephos 20.90 467/125 467/125；467/155 160 30；30 2.9 0.2 221二甲戊灵 pendimethalin 20.34 282/212 282/212；282/194 80 5；10 4.8 0.1 222除虫菊素 pyrethrin 22.14 329/161 329/161；329/133 100 5；15 5.0 0.3 223甲氰菊酯 fenpropathrin 22.92 350/125 350/125；350/97 120 5：20 4.4 3.0 224丙硫特普 aspon 23.41 379/115 379/115；379/210 80 30；15 2.1 0.03 225螺螨酯 spirodiclofen 23.47 411/71 411/71：411/313 100 10；5 226溴苯磷 leptophos 23.36 411/171 411/171；411/379 100 20；15 5.7 1.0 227苯醚菊酯 phenothrin 24.54 351/183 351/183；351/237 100 15；5 D组 228灭蝇胺 cyromazine 2.74 167/85 167/85；167/125 120 25；20 2.8 1.7 229久效威亚砜 thiofanox-sulfoxide 6.44 235/104 235/104；235/57 60 5；20 7.9 0.024 230乙嘧酚 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气： 相对标准 检出限 /min 电压/V 能量/V 偏差(%) ( (og/kg) 238丁噻隆 tebuthiuron 7.50 229/172 229/172；229/116 120 15：20 2.4 0.05 239环嗪酮 hexazinone 7.56 253/171 253/171；253/71 120 15：20 1.6 0.04 240双酰草胺 carbetamide 7.46 237/118 237/118；237/192 80 10；5 3.1 0.17 241十二环吗啉 dodemorph 10.43 282/116 282/116；282/98 120 20；30 1.1 0.08 242威菌啉 triamiphos 8.04 295/135 295/135；295/92 100 25；35 243甲基内吸磷 demeton-S-methyl 7.89 253/89 253/89；253/61 80 10：35 2.5 0.4 244绿麦隆 chlorotoluron 8.36 213/72 213/72；213/140 80 25；25 1.9 0.07 245甲萘威 carbaryl 8.40 202/145 202/145；202/117 80 5/10 1.8 0.03 246氟草隆 tluometuron 8.43 233/72 233/72；233/160 120 20；20 1.7 0.09 247噻唑啉 fosthiazate 8.55 284/104 284/104；284/228 80 20；5 1.2 0.06 2484，4'-二溴二苯甲酮 4，4'-dibromobenzophenone 11.22 341/155 341/155：341/185 80 25/35 1.7 249异丙隆 Isoproturon 8.71 207/72 207/72；207/165 120 15；15 1.8 0.019 250莠锈灵 carboxin 8.60 236/143 236/143：236/87 120 15；20 0.9 0.008 251甲呋酰胺 fenfuram 8.66 202/109 202/109；202/83 120 20：20 2.7 0.08 252氟草敏 Norflurazon 8.91 304/284 304/284；304/160 140 25；35 4.4 0.029 2533，4，5-混杀威 3，4，5-trimethacarb 9.03 194/137 194/137；194/122 80 5：25 2.4 0.09 254丙苯磺隆 propoxyoarbazone-sodium 7.54 421/180 421/180；421/138 80 15；30 7.7 0.17 255氟苯嘧啶醇 nuarimol 9.55 315/252 315/252；315/81 120 25/30 4.9 0.4 256双苯酰草胺 diphenamid 9.47 240/134 240/134；240/167 120 20：25 1.2 0.05 257炔草隆 buturon 9.32 237/126 237/126；237/84 120 30；15 4.3 0.04 258虫线磷 thionazin 9.54 249/97 249/97；249/193 80 30；10 0.06 259麦锈灵 benodanil 9.54 324/231 324/231；324/203 120 40；25 0.017 260拌种咯 fenpiclonil 9.58 237/202 237/202；237/167 140 15；35 0.1 261环丙唑醇 cyproconazole 10.09 292/70 292/70：292/125 120 15；15 2.3 0.17 262仲丁威 fenobucarb 9.93 208/95 208/95：208/152 80 10；5 4.0 0.06 263 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 i 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞撞 i 相对标准 检出限 /min 电压/V能量/V 偏差(%)( (og/kg) 273草达津 trietazine 11.62 230/202 230/202；230132 160 20：20 6.0 0.07 274炔醚菊酯 imiprothrin 11.69 319/123 319/123：319/151 80 15；5 4.7 0.4 275稻瘟灵 isoprothiolane 11.86 291/189 291/189：291/231 80 20；5 2.2 0.01 276牧草胺 tebutam 12.29 234/91 234/91；234/192 120 20；15 1.1 0.07 277氟菌唑 triflumizole 15.33 346/73 346/73：346/278 80 10；5 6.7 0.023 278氟噻草胺 flufenacet 12.49 364/152 364/152；364/194 80 10；5 2.7 0.019 279胺丙畏 propetamphos 12.33 282/138 282/138；282/156 80 15；10 7.4 0.17 280茵草敌 EPTC 12.97 190/128 190/128：190/86 100 10；10 10.3 1.7 281 虫酰阱 Tebufenozide 13.49 297/133 297/133；197/105 80 15；35 3.4 0.07 282毒虫畏 chlorfenvinphos 13.27 359//127 359/127；359/155 120 15；10 5.2 0.14 283苯醚甲环唑 difenoconazole (I&II) 14.37 406/251 406/251：406/337 160 20；15 8.2 0.1 284氟虫腈 tipronil 13.61 437/263 437/263；437/368 120 40；30 22.4 17 285三异丁基磷酸盐 tri-iso-butyl phosphate 14.43 267/99 267/99：267/155 80 20；5 2.1 0.17 286吡唑硫磷 Pyraclofos(10ug/ml) 14.39 361/257 361/257：361/138 120 25；35 2.9 0.015 287地散磷 bensulide 14.73 398/158 398/158；398/314 80 20；5 7.6 4 288菜草畏 sulfallate 14.37 224/116 224/116：224/88 100 10；20 10.9 4 289敌草素 thiobencarb 15.23 258/125 258/125：258/89 80 20；55 0.8 0.09 290 吡唑解草酯 mefenpyr-diethyl 15.71 373/327 373/327；373/160 80 15；35 7.6 0.09 291 戊菌隆 pencycuron 15.94 329/125 329/125：329/218 120 20；15 2.7 0.006 292灭草敌 vernolate 15.58 204/128 204/128：204/175.5 100 10；10 8.7 0.4 293治螟磷 sulfotep 15.82 323/171 323/171；323/143 120 10；20 5.3 0.04 294丙溴磷 profenefos 16.79 373/303 373/303；373/345 120 15：10 8.1 0.1 2954，4-二氯二苯甲酮 4，4-dichlorobenzophenone 16.54 251/111 251/111；251/139 100 35；20 11.7 1.7 296异柳磷 isofenphos 17.40 346/217 346/217：346/245 80 20；10 1.7 297氯甲酰草胺 clomeprop 9.54 324/203 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气： 相对标准 检出限 /min 电压/V 能量/V 偏差(%)( (og/kg) 307二甲嘧酚 dimethirimol 7.16 210/71 210/71；210/140 120 25：20 0.9 0.13 3082，6-二氯苯甲酰胺 2，6-dichlorobenzamide 6.22 190/173 190/173；190/145 100 20；30 1.7 0.17 309莠去通 atratone 7.80 212/170 212/170；212/100 120 15：30 0.68 0.03 310丁咪酰胺 isocarbamid 6.68 186/87 186/87；186/130 80 20；5 4.3 0.12 311氯草敏 chloridazon 6.71 222/92 222/92：222/104 120 30；25 0.9 0.3 312三环唑 tricyclazole 7.26 190/136 190/136；190/163 120 30；25 1.6 0.01 313硫环磷 phosfolan 7.19 256/140 256/140；256/228 100 10：25 1.9 0.04 314莠灭净 ametryn 8.68 228/186 228/186；228/68 120 20；35 1.7 0.14 315丁苯吗啉 tenpropimorph 11.50 304/147 304/147；304/130 120 30；30 1.3 0.03 316甲基吡噁磷 azamethiphos 7.85 325/183 325/183；325/139 80 15；25 317环草定 lenacil 8.00 235/153 235/153：235/136 80 10；15 3.2 0.14 318硫双威 thiodicarb 8.10 355/88 355/88；355/163 80 15；5 319嗪草酮 metribuzin 7.93 215/187 255/187；255/131 120 15；20 1.5 0.17 320双氟环草胺 Florasulam 10ug/ml 8.02 360/129 320/129；320/192 120 30；15 9.1 1.7 321啶斑肟 pyrifenox 11.79 295/93 295/93；295/263 120 15；15 3.1 1.5 322 DMST 8.39 215/106 215/106；215/151 80 10；5 2.2 0.05 323氧环唑 azaconazole 8.79 300/159 300/159；300/231 100 30；15 1.2 0.02 324莠去津 atrazine 8.67 216/174 216/174；216/132 120 15；20 2.1 0.16 325环丙津 cyprazine 8.68 228/186； 228/186：228/108 120 15；25 1.7 0.14 326乙硫苯威 ethiofencarb 8.64 226/107 227/107；227/164 80 5；5 0.96 0.11 327庚烯磷 heptanophos 8.94 251/127 251/127；251/109 80 10；30 328异丙净 dipropetryn 12.53 256/144 256/144；256/214 140 30；20 1.3 0.03 329吡唑草胺 3metazachlor 9.22 278/134 278/134；278/210 80 20；5 1.0 0.03 330烯酰吗啉 dimethomorphl 9.63 388/301 388/301；388/165 120 20：25 3.8 0.03 dimethomorphlI 9.89 同上 2.8 0.04 331另丁津 sebutylazine 9.60 230/174 230/174；230/104 120 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间j 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气： 相对标准 检出限 103/60 /min 100 电压/V能量/V 偏差(%)( (og/kg) 341炔苯酰草胺 3propyzamide 11.00 256/173 256/173；256/190 120 20；10 5.7 3.0 342甲基对硫磷 methyl parathion 10.88 264/232 264/232；264/125 120 15；20 1.6 0.07 343己唑醇 hexaconazole 11.96 314/70 314/70：314/159 120 20；20 3.4 0.03 344异丙甲草胺 metolachlor 12.24 284/176 284/176；284/252 120 15；10 1.6 0.03 345马拉硫磷 malathion 11.89 331/99 331/99：331/127 80 10；5 4.3 0.2 346 甲草胺 alachlor 12.26 270/162 270/162；270/238 80 20；10 3.9 0.17 347烯唑醇 diniconazole 12.60 326/70 326/70；326/159 120 25；30 2.0 0.05 348拌种胺 furmecyclox 13.01 252/170 252/170；252/110 100 10：25 9.0 1.2 349烯唑醇 nitralin 13.53 346/262 346/262；346/304 100 20；10 1.3 0.03 350驱虫特 dibutyl succinate 13.90 231/101 231/101；231/157 60 10；1 3.0 0.17 351 三正丁基磷酸盐 tri-n-butyl phosphate 14.84 267/99 267/99：267/155 80 15；5 1.2 0.2 352硫线磷 cadusafos 14.69 271/131 271/131；271/159 80 20；10 1.7 0.1 353稻丰散 phenthoate 14.58 321/163 321/163/321/247 80 10；5 7.9 1.7 354 α-六六六 alpha-HCH(MW.=290.8) 10.76 292/70 292/70；292/56.7 120 20；35 6.1 1.7 355 吡唑醚菊酯 pyraclostrobin 15.37 388/163 388/163；388/194 120 20；10 1.6 0.03 356克草敌 pebulate 15.64 204/72 204/72；204/128 100 10；10 7.3 0.7 357茉莉酮 3Prohydrojasmon(10ug/ml) 15.86 255/153 255/153：255/237 80 10；5 — 一 358环草敌 cycloate 15.73 216/83 216/83：216/154 120 15；10 1.7 0.17 359炔丙菊酯 prallethrin 16.94 301/105 301/105：301/169 80 5；20 5.3 1.6 360本虫醚 diofenolan 16.78 301/253 301/253；301/225 100 10；5 14.2 3.0 361苯硫磷 EPN 17.38 324/157 324/157；324/296 120 20；10 4.4 0.5 362苄草丹 prosulfocarb 17.61 252/9 252/91；252/128 120 10；15 2.9 0.2 363嘧啶磷 pirimiphos-ethyl 20.94 334/198 334/198；334/182 120 20；25 1.3 0.07 364三甲苯草酮 tralkoxydim 20.25 330/138 330/138：330/284 100 20；10 0.55 0.01 365稗草丹 pyributicarb 表2.403种农药及相关化学品中英文名称、保留时间、监测离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量以及以谷物基质中403种农药及相关化学品的方法检出限、相对标准偏差(续) 序号中文名称 英文名称 保留时间 定量离子 定性离子 源内碎裂碰撞气： 相对标准 检出限 /min 电压/V能量/V 偏差(%) (og/kg) 375氰霜唑 Cyazofamid 13.67 325/108 325/108；325/261 80 15；5 3.9 0.5 376四氟苯菊酯 Transfluthrin 21.99 371/163 371/163：371/190.7 80 10；5 33.7 4.0 377醚苯磺隆 Triasulfuron 8.18 402/141 402/141；402/167 120 20；15 4.2 0.17 378环酰菌胺 Fenhexamid 11.06 302/97 302/97；302/55 80 25；30 4.8 0.17 379氟蚁腙 Hydramethylnon 21.75 495/323 495/323；495/171 100 35；50 — 380氯嘧磺隆 chlorimuron ethyl 10.46 415/186 415/186；415/213 120 10；10 4.8 0.03 6-氯-4羟基 381 -3-基基哒嗪 6-chloro-4-hydroxy -3-phenyl-pyridazin 6.97 207/77 207/77；207/104 120 25；35 4.8 0.4 382灭菌磷 Ditalimfos 12.16 300/148 300/148；300/244 80 15；10 3.5 4.0 383乙氧嘧磺隆 Ethoxysulfuron 10.35 399/218 399/218；399/261 120 25；10 6.5 0.12 384噻吩磺隆 thifensulfuron-methyl 7.75 388/167 388/167；388/141 120 10；10 4.2 0.06 385咪唑喹啉酸 Imazaquin 7.71 312/199 312/199；312/267 160 25：20 5.4 0.11 386抑芽丹 maleic hydrazide 1.42 113/85 113/85：113/67 100 20；20 387三甲呋菌胺 Methfuroxam 10.22 230/137 230/137；230/111 120 20；15 1.5 0.029 388烯禾啶 Sethoxydim(10ug/ml) 19.33 328/178 328/178；328/282 100 15；10 9.2 1.7 389涕灭威砜 aldicarb sulfone 5.81 223/76 223/76：223/148 80 5；5 12.0 0.24 390棉隆 Dazomet 9.06 163/77 163/77；163/120 80 35；10 5.6 1.7 391杀鼠醚 coumatetralyl 10.98 293/175 293/175；293/107 140 25；35 2.5 0.06 392丙硫克百威 Benfuracarb 9.18 411/195 411/195；411/252 100 20；10 393吡氟禾草灵 438. fluazifop butyl 20.71 384/282 384/282；384/328 120 15；20 1.9 0.06 394氟奔绝胺 439.Flubenzimine 20.78 417/167 417/167；417/397 100 25；10 二 395吡嘧磺隆 440. pyrazosulfuron-ethyl 9.99 415/182 415/182；415/369 120 15：10 4.1 0.012 396醚磺隆 441.Cinosulfuron 7.99 414/183 414/183；414/157 120 10；20 4.7 0.011 397二氧威 442. Dioxacarb 8.23 224/167 224/167；224/123 80 5；15 8.4 0.14 398菌嗪 443. Triazoxide 8.37 248/68 248/68；248/95 100 35：25 5.0 0.17 399草毒死 444. Allidochlor 7.76 174/81 174/819174/8 100 15；10 400 蜂蜜基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中的总离子流图，见图1 图1.蜂蜜基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中的总离子流图 肉类基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中的总离子流图，见图2 图2.肉类基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中分别的总离子流图 谷物基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中的总离子流图，见图3 图3.谷物基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中的总离子流图 苹果基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中的总离子流图，见图4图4.苹果基质中403种农药及相关化学品在空白、A、B、C、D和E组中的总离子流图 Agilent 6410 串联四极杆质谱分析罗非鱼中的硝基呋喃代谢物 本文使用 Agilent 6410 串联四极杆质谱对肉类和肉制品中的禁用物质硝基呋喃类抗生素进行LC/MS/MS分析，所建立的方法对选用的四个化合物具有很高的灵敏度。最低检测限达到0.01 ppb(10 ppt)。研究按照欧盟的分析方法指标认证标准，建立了0.05 ppb~10 ppb 浓度范围的标准定量曲线。以罗非鱼提取物为研究对象，考察 LC/MS/MS技术用于水产品中分析硝基呋喃的性能。 引言 硝基呋喃类药物是一种革兰氏阳性和阴性菌的抗生素，价格低廉，用于治疗牲畜和鱼类的肠道和皮肤感染。此类药物因其母体及其代谢物都有致癌作用，因此在全世界范围内被禁止使用。但是，2005年食品与饲料快速警报系统的年报[1]显示，在很多的食物样品中仍检测到了这类物质的存在。它们所带来的食品安全问题依旧是需要关注的。呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥英和呋喃西林的代谢迅速，且代谢物都与肌肉组织结合紧密，因此，需要在动物源的样品中检测这些药物的代谢产物。 欧盟(EU)制订的动物及动物制品中的兽药检测和认证标准[2]已被世界上的大部分国家和地区所接受。该标准要求分离技术和光谱测定技术进行联用。对于禁用物质如硝基呋喃类化合物，该标准不设定残留量上限(MRL)，每个代谢物的最低性能极限要求(MRPL)设为1 og/kg [3]。能够满足这一标准的只有 LC/MS 技术，并且也有多篇相关的文献报道[4-6]。但是，目前此类研究应用最多的是三重串 联四极杆质谱技术。本文将首次采用新型Agilent串联四极杆LC/MS系统进行这些代谢物的分析。 实验部分 化学品 硝基呋喃代谢物的衍生物对照品以及样品制备中使用的化学药品均来自-一家食品生产公司。乙腈(HPLC级)和甲酸(Reagent级)均来自Merck 公司(Darmstadt，德国)。 样品制备 将2g罗非鱼置入 15 mL 0.125M 的盐酸中，混匀。加加50cL的50mM硝基苯乙醛(2-NBA)的DMSO 溶液，震荡后将溶液在37℃条件下加热16小时。然后以NaOH和K，HPO4中和至pH~7。中和后的衍生化样品以乙酸乙酯提取，浓缩至干，再以100 cL 的起始液相色谱流动相溶解。将四种代谢物加入 0.125M的盐酸中，以上述方法进行衍生化和提取，得标准样品用于定量曲线的测定。 LC/MS/MS 方法 LC条件 仪器： Agilent 1100 LC 色谱柱： C18， 2.1mmx 150 mm， 3 cm 柱温： 40℃ 流动相： A=0.1%甲酸水溶液 B=乙腈 洗脱梯度： 起始22%B， 6 min 99%B， 9 min 99%B 流速： 0.3 mL/min 进样量： 50oL MS 条件 仪器： Agilent 6410 型 LC/MS三重串联四极杆系统离子化方式： ESI正离子模式干燥气流速： 10 L/min雾化器： 35 psig干燥气温度： 350℃ Vcap： 4000V 结果与讨论 考虑到四个代谢物， Aminohydantoin (AH)、3-amino-5-morpolinomethyl-2-oxazolidinone(AMOZ)， 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ) 的衍生化和提取都必须满足 1 ppb 的检测限，仪器的灵敏度是该方法中重要的性能参数。本文分析了0.01 ppb的各代谢物的2-NBA衍生物，见图1。图中列出了 各代谢物的衍生物的结构，每个信噪比都大于3。 本分析方法的另一个重要指标是线性。图2是每个代谢物的 50 ppt 到 10 ppb 浓度范围的标准曲线。 含硝基呋喃类药物的鱼的处理一直是食品安全和欧盟成员国进口的难题。为了测试 Agilent 三重串联四极杆 LC/MS 在该检测中的应用，本文将四种代谢物注入罗非鱼中，经水解，衍生化和提取后进行分析。图3是 500 ppt 罗非鱼提取物的图谱。由图可见，所得信号远远低于 MRPL。除了满足灵敏度要求外，本研究还必须达到认证标准，要求保留时间与对照品一致，并且定性离子的相对强度比在规定的偏差范围内。偏差范围的设定通过分析对照品，根据其强度比的增减获得。范围从20%到50%，前者对应于相对强度比大于0.5%的离子，相对强度比低于 0.1%的离子则适用于后者。 串联质谱的参数多反应监测模式参数 图1.含量分别 10 ppt MRM提取离子流图A)2-NBA AMOZ，D) 2-NBA-A0Z 图2.硝基呋喃类代谢物的定量标准曲线，线性范围 50 ppt-10 ppb 图3.加标罗非鱼样品提取物，每种代谢物0.5 ppb 更多信息 结论 本研究表明，Agilent 6410串联四极杆质谱可以快速高灵敏度地分析鱼肉中的硝基呋喃代谢物，其系统性能完全满足欧盟委员会的要求。同时，该系统配置了先进的定量计算软件，能够按照欧盟委员会的规定，计算验证指标并提供相关报告。 如需了解本公司产品和服务的更多信息，请访问本公司网站www.agilent.com/chem/cn。 Agilent 6410 串联四极质谱检测食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿 利用安捷伦高效液相色谱6410/串联质谱(LC/MS/MS)方法快速、准确地测定孔雀石绿(MG)和隐性孔雀石绿(LMG)的残留量。串联质谱在电喷雾(ESI+)，多反应监测(MRM)模式下，进行质谱定性和定量分析，无需采用传统的 PbO，氧化柱，比液相检测方法灵敏、快速。该方法的定量限(LOQ)为0.01 og/kg，完全可以达到出口欧盟和日本残留限量的要求。 1概述 孔雀石绿(C23H2sClN，)为金属光泽的结晶体，极易溶于水，水溶液呈蓝绿色。它可用作杀菌、驱虫剂，是药用染料中抗菌郊力较强的一类，属于三苯甲烷类染料。一般用于鱼类防治水霉病、烂鳃病以及寄生虫病等。 孔雀石绿具有潜在的致癌性，美国、日本以及英国等许多国家已禁止用于水产养殖业。中华人民共和国农业行业标准无公害食品渔用药物使用准则(NY5071-2002)中已将孔雀石绿列为禁用药物。由于孔雀石绿在水产养殖业中抗菌效果较好、价格低廉，宣传力度不够等原因，使得不少用户还在小范围使用，因此对于孔雀石绿的监控就显得格外重要。近 几年我国因药物残留出口的动物性食品屡遭禁运。欧盟派到中国的专家组，曾多次强烈要求中国政府对孔雀石绿残留进行监控。本文在已有的方法基础上改进了仪器方法I1，2，3]，利用Agilent 6410串联质谱同时测定孔雀石绿和隐性孔雀石绿。实验证明该方法快速、简单，灵敏度高，完全达到了出口欧盟和日本的检测要求。 2试剂 2.1式剂 孔雀石绿标准品购买于 Sigma-Aldrich 公司(CAS 569-64-2， USA)， 隐性孔雀石绿购买于 Dr.Ehreastorfer 实验室(纯度99%，D-86199 Augsburg，Germany)，化合物的结构见Fig 1。乙腈购买于Burdick & Jackson 公司 (CAS 75-05-8， Muskegon，USA)，乙酸购买于 Merck 公司 (Germany)， 乙酸铵购买于 Acros Organics 公司(CAS 631-61-8， NewJersey， USA)。水为 Milli Q。 准确称取适量的孔雀石绿和隐色孔雀石绿，用乙腈分别配制成100 og/mL的标准贮备液，-18℃避光保存。使用前，用乙乙/水=50：50的溶液稀释至所需要的浓度。 图1. 孔雀石绿和隐性孔雀石绿的结构 实际样品的前处理参见国标 GB/T 19857-2005。 2.2液相条件 采用 Agilent 1100 系列的液相色谱仪，配置有G1379A 脱气机， G1311A 四元泵， G1367A 自动进样器， G1314 紫外检测器。色谱柱： Inertsil ODS-3，2.1×150 mm，5om。流动相组成A 为10mmol/L乙酸铵水溶液(用乙酸调节pH值4.5)，B为乙腈溶剂。流速 0.3mL/min，柱温40℃。梯度条件牛： 2.3质谱条件 Agilent 6410 串联四极杆质谱仪，配置了 ESI 离子源。在(+)ESI模式下，采集数据，设定质谱参数如下：Capillary 4000 V， Drying Gas 11 L/min，Neb Press 35 psi， Gas Temp 350 ℃， Fragmentor90， Skimmer 15， OctDc1 (Skim2) 45 V， Oct RF500 V，碰撞气为高纯氮气，Q1和Q3的分辨率均为单位质量分辨。MRM 模式下的参数如下： 表1.液相色谱梯度条件 Time A相 B相 0 70 30 1 50 50 2 5 95 8 5 95 8.01 70 30 13 70 30 表2. MRM模式下的质谱参数 Time Compound Precursor Product Dwell (ms) Fragmentor Collision Engergy (V) (V) 孔雀石绿 329.3 313.3 40 100 40 329.3 208.2 40 100 40 7 隐性孔雀石绿 331.3 316.3 40 100 30 331.3 239.2 40 100 30 3结果和讨论 3.1化合物的质谱参数优化 孔雀石绿在保留时间5.5分钟左右，隐形孔雀石绿在保留时间8.3分钟左右。 不同碰撞能量条件下，孔雀石绿和隐性孔雀石绿的 MS/MS 谱。孔雀石绿和隐性孔雀石绿由于结构上的差异，各自产生碎片离子所需要的碰撞能量都不相同。对于孔雀石绿而言，碰撞能量为40V时，发生裂解反应，得到最大离子强度的碎片离子。孔雀石绿丢失一个甲基离子得到了 m/z 313离子，或者丢失一个 N，N-2甲基苯胺得到了 m/z 208 离子。对于隐性孔雀石绿，碰撞能量为30V时，发生裂解反应，得到最大离子强度的碎片离子。隐性孔雀石绿丢失一个甲基离子得到 m/z 316离子，然后继续丢失一个苯离子生成 m/z 239 离子。 3.2标准曲线和线性范围 用乙腈/乙酸铵缓冲液=50：50的溶液配制成 相当于浓度为10，50，100，500，1000，5000，10000fg/oL的孔雀石绿和隐性孔雀石绿混合样品的系列标准溶液。按照前面的方法进行 LC/MS/MS分析，建立标准曲线。以待测物质浓度(C)为横坐标，待测物的质谱峰面积(Y)为纵坐标，忽略原点且无权重因子进行回归计算，求得的直线回归方程即为标准曲线。孔雀石绿的直线回归方程为 Y=23363.3374X-1766.9951，相关系数 R2 为 0.999461，线性范围为100~100000 fg， 最低定量浓度为 10 fg/ocL，色谱图见Fig 3-a.隐性孔雀石绿的直线回归方程为Y=93199.4712X-7543.3588，相关系数R2 为0.999426，线性范围为100~100000 fg，最低定量浓度为 10 fg/L， 色谱图见 Fig 3-b。 图3.孔雀石绿以及隐性孔雀石绿的校准曲线 3.3方法的精密度和准确度 用乙腈/乙酸铵缓冲液=50：50的溶液配制成相当于浓度为100 fg/oL 的孔雀石绿和隐性孔雀石绿混合物待测样品，进行 LC/MS/MS分析，每一浓度进行8样本分析，所得的 RSD 孔雀石绿是3.52%(S/N>20)，隐性孔雀石绿是 2.25% (S/N>40)。 3.4实际应用 根据中华人民共和国国家标准 GB/T19857-2005中有关水产品的前处理方法，实际添加了100 ppt的孔雀石绿和隐性孔雀石绿样品，经萃取、净化等步骤，最后测得的质谱图见 Fig 4。 Fig 4. 添加了 100 ppt 的孔雀石绿和隐性孔雀石绿样品测得的质谱图 利用安捷伦6410串联质谱(LC/MS/MS)方法可以快速、准确地测定孔雀石绿和隐性孔雀石绿的残留量，完全可以达到出口欧盟和日本残留限量的要求。有文献报道利用 APCI 进行该类化合物的测定[4]，可-以在今后的实验中进行比较。 5致谢 感谢北京市海淀区质量监督检验所刘艳琴博士提供了隐性孔雀石绿的标准品以及完成了实际样品前处理。 ( 1.中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局国家 标准化管理委员会，水产品中孔雀石绿和结晶紫 残留量的测定， GB/T19857-2005，2005； ) ( 2. K. Halme， E. Lindofors， K. Peltonen. FoodAdditives and Contaminants.21(7)，641； ) ( 3. Aldert A. Bergwerff. Peter Scherpenisse. J. Chromatogr B. 788(2003)，351； ) ( 4. Luis Valle， Cecilia Diaz， Antonio L Zanocco etc. J. Chromatogr. A. 1067(2005)，101 ) 乳制品中双氯青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素G、青霉素V残留量检测方法 -LC-MS/MS 法 牛奶中的抗生素残留会使人被动地接受，并积累抗生素，对抗生素产生耐药性，患者用抗生素治疗时，效果下降。有些“过敏”体质的人，长期饮用甚至会造成“休克”。经常饮用抗生素残留超标的牛乳会破坏人体的肠道菌群平衡。牛乳中残留抗生素还会对人体产生直接或间接毒性。 因为抗生素的影响，酸奶、奶酪等一些高质量牛奶产品无法加工生产，造成很多原料奶的浪费，致使企业经济受到很大损失。 根据国家有相关规定和卫生规范，1990年在乳与乳制品管理办法第四条明确规定乳牛在应用抗生素期间和停药后5天内的牛乳不得食用。近期，又多次规定在婴儿配方奶粉、学生奶及绿色食品中不得含有抗生素。2001年9月农业部发布的《无公害食品生鲜牛乳》行业标准中明确规定“抗生素不得检出”。 2试剂与材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 2.1甲醇，色谱纯 2.2乙腈，色谱纯 2.3磷酸二氢钠(NaH，PO) 2.4氢氧化钠 2.5磷酸盐缓冲液：称取 20g NaH，PO 溶于 1L水中，用10mol/L NaOH 调节pH=8.5±0.12.6固相萃取柱： Waters OasisTM HLB (300 mg/6mL) 3.1液相色谱-质谱/质谱联用仪，配有电喷雾(ESI) 源 3.2 匀浆机 3.3高速冷冻离心机 3.4氮吹仪 3.5固相萃取器 4测定步骤 4.1提取 称取试样10 g(±0.01g)于50 mL 聚四氟乙烯离心管中，加入20 mL 乙腈均质 2 min， 10000 rpm离心10 min，上清液转移至100 mL 梨形瓶中；再向残渣中加入20 mL乙腈重复操作一次，合并两次上清液于100 mL 梨形瓶中。提取液在40℃水浴中减压浓缩除去乙腈有机相。 4.2净化 向上述浓缩液中加加5mL的磷酸缓冲液(1.5)稀释溶解，全部转移到HLB 柱上(HLB预先依次用5mL甲醇，5 mL 水， 5 mL 磷酸缓冲液活化)。上样液全部通过后，用2mL水淋洗抽干，最后用5mL乙腈洗脱并接收至 10 mL 离心管中，40℃条件下氮气吹干溶剂，用1mL乙腈/0.1%甲酸水溶液(2/8)溶解定容，上清液液0.45 om 微孔滤膜过滤，HPLC-MS/MS 测定。 4.3仪器测定 液相色谱：Agilent 1200 LC色谱柱：Agilent SB-C18，2.1×150，3.5 om进样体积：10ot流量：0.3 mL/min柱温：30℃流动相：A-0.3%Acetic Acid；B-100%ACN+0.3% Acetic Acid 表1.梯度洗脱时间表 时间 A B 流量 (ml/min) 0 90 10 0.3 2 90 10 0.3 2.01 35 65 0.3 8.0 35 65 0.3 8.01 5 95 0.3 表2.质谱多反应检测表 时间 化合物 母离子 子离子 Dwell (ms) ) Fragmentor(V) 碰撞能(V) 0 amoxicillin 366 114 100 110 15 208 100 110 5 ampicillin 350 160 100 100 5 192 100 110 10 6. dicloxacillin 470 311 70 110 10 160 70 110 10 Yiyannai penicillin 415 256 70 110 15 199 70 110 10 oxacillin 402 243 70 110 10 160 70 110 10 Penicillin V 351 192 70 100 5 160 70 100 10 Penicillin G 335 176 70 100 10 160 70 100 5 5结果和讨论 5.2线性范围及回收率 5.1方法优化 经过对不同 Fragmentor电压、不同碰撞能量MRM的比较，我们选定了以上条件(见表2)。 10 ppb 和50 ppb 的回收率表如下： 化合物 回收率(%)(10ppb) 回收率(%)(50ppb) amoxicillin 96.8 110 ampicillin 58 70.6 Penicillin G 75.2 86 Penicillin V 125.4 122.8 Oxacillin 140 137 Yiyannai Penicillin 105 91.3 dicloxacillin 141 141.6 5.3灵敏度 在0.1ppb时，提取离子色谱图及信噪比： 2 Counts (%) vs. Acquisition Time (min) 化合物 信噪比 amoxicillin 366-114 224 ampicillin 350-160 61.6 dicloxacillin 470-160 48.5 Yiyannai penicillin 415-199 52.6 oxacillin 402-160 70.9 Penicillin V 351-160 225.9 Penicillin G 335-160 33.2 串联质谱仪具有的高灵敏度检测性能使得对于小分子的丙烯酰胺具有快速、准确地测定。分析定量限设定为10 ng/mL，检测限可以达到1ng/mL， 完全满足实际食品的测定。对于实际不同的中国食品进行测定中发现了不同茶叶由于品种、工艺的不同，其可能表现出丙烯酰胺含量的不同。 1概述 丙烯酰胺是一种具有神经毒性的小分子化合物，它主要由游离的天门冬酰胺在食品加工过程中通过美拉德反应形成。天门冬酰胺和碳水化合物是形成丙烯酰胺必需的物质基础，高温(高于120℃)则是丙烯酰胺形成的关键条件，加工方式、水活度、pH 值等因素也影响其形成。目前食品中丙烯酰胺的分析主要采用气相色谱质谱法(GC-MS)与液相色谱-串联质谱联用技术(LC-MS/MS)。[2，3，4] 2实验 2.1试剂 丙烯酰胺标准品购买于 Sigma-Aldrich 公司(USA)，乙腈购买于 Burdick & Jackson公司(CAS75-05-8， Muskegon， USA)， 甲酸购买于迪马公司，水为 Milli Q. 精确角量 10 mg的丙烯酰胺，用水溶解于10 mL的容量瓶中，配制成 1 mg/mL 浓度的标准品，放置于冰箱中保存。用水逐步稀释，配制成10，20， 50，100，200，500 ng/mL 的标准溶液进行测定。 2.2样品前处理 1.手工碾碎样品放在烧杯中。 2.称1克碾碎的样品放到 15 ml 带盖的聚丙烯锥形管中。 3.将10mL水加到样品中。 4.在搅拌器中混合40分钟。 5. 在9000转/分离心管30分钟，迅速取出上清液过滤。 6. 将2 mL 样品放置大旋转过滤管中，0.45omPVDF，9000转/分离心30分钟。 7.用2mL甲醇，随后通过2mL 水调制 SPE柱。使用 SPE 柱排除甲醛和水。 8.用2mL试验提取物加入 SPE 柱，让提取物完全通过吸附物质，然后用2mL水冲洗。 9.用2mL提取液从 SPE 柱提取丙烯酰胺(10%甲醇：90%水：0.1%蚁酸)。 2.3液相色谱条件 Agilent 1100 系列液相色谱仪，配置有 G1311A四元泵， G1379A 脱气机， G1367A 自动进样器。色谱柱： Eclipse Plus C18， 2.1x 150mm， 3.5 om。流动相为乙乙：0.2%甲酸水溶液=5：95，流速=0.3 mL/min。设定泵的停止时间为3分钟。 2.4质谱条件 Agilent 6410 串联四极杆质谱仪，配置了 ESI 离子源。在(+)ESI模式下，采集数据，经实验优化设定质谱参数如下： Capillary 4000V， Drying Gas11 L/min， Neb Press 35 psi， Gas Temp 350℃，Fragmentor 100， Skimmer 15， OctDc1 (Skim2)45 V， Oct RF 500V， 碰撞气为高纯氮气，Q1和Q3的分辨率均为单位质量分辨。MRM模式下的参数如下： transition 为72->55，碰撞能量10V。 3结果和讨论 3.1标准曲线和线性范围 将用户配制的系列浓度丙烯酰胺溶液，按照前面的方法进行 LC/MS/MS分析，建立标准曲线。以待测物质浓度(C)为横坐标，待测物的质谱峰面积(Y)为纵坐标，忽略原点且设定权重因子为 1/C 进行回归计算，求得的直线回归方程即为标准曲线，见图1。丙烯酰胺的直线回归方程为￥=43.8290X+137.6837，相关系数R2 为 0.9977，线性性围为10~500 ppb，最低定量浓度为 10 ng/mL。 3.2方法的精密度和准确度 对于10，50，100， 500 ng/mL 浓度的丙烯酰胺溶液进行LC/MS/MS分析，每一浓度进行5样本分析，所得的 RSD 见表1。实验结果由 Agilent 的Mass Hunter 软件进行计算。从结果可以看出，标准品的日内偏差均小于10%。 3.3 实际应用 对于不同品种的6个实际样品进行了测试分析，结果见表1. 图1.丙烯酰胺的校正曲线 图2为腐乳中丙烯酰胺的测定结果。丙烯酰胺的保留时间在上述液相色谱条件下为1.5分钟左右。从实际样品看，在保留时间1.3分钟处有一个明显的色谱峰，怀疑为丙烯酰胺。添加5 ppb 水平的丙烯酰胺，可以看见在保留时间1.55分钟出现了一个色谱峰，该色谱峰为丙烯酰胺，从而判断保留时间1.3分钟的色谱峰为腐乳中的一个干扰峰。 图3为红茶4中丙烯酰胺的测定结果。在保留时间1.55分钟左右为丙烯酰胺，为了进一步确证，添加5 ppb 水平的丙烯酰胺。从添加丙烯酰胺强后的结果可以看出，未添加前，色谱峰的离子强度为14counts，添加后变为 45counts，信号强度明显增强，说明该色谱峰确实为丙烯酰胺。由测定的含量计算可知，其低于10 ppb 水平，对于人体的危害很小。 图2.腐乳中丙烯酰胺的MRM图：上为实际样品的测定结果；下图为添加5 ppb丙烯酰胺水平后测定的 MRM图 6结论 利用安捷伦6410串联质谱(LC-MS/MS) 方法可以快速、准确地测定食品中的丙烯酰胺的含量。 7致谢 感谢中国农业大学食品与工程学院赵广华教授和陈芳副教授完成了实际样品的前处理工作。 ( 参考文献 ) ( 5. Yu Zhang，Genyi Zhang， Ying Zhang.J. Chromatogr. A. 1075(2005)?：1 ) ( 6. H.Ono，Y.Chuda，M.Ohnishi-Kameyama etc. Food Additives and Contaminants， 2003，20(3)：215 ) ( 7 . Thierry Delatour， Adrienne Perisset， Till Goldmann etc.J. Agric. Food Chem.， 2004， 52(15)：4625 ) ( 8. Denis Andrzejewski， John A. G. Roach， MarthaL. Gay etc. J. Agric. Food Chem.， 2004，52(7)： 1996 ) Agilent 6410 串联四极杆质谱检测食品中的β-受体激动剂 利用安捷伦6410高效液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)方法快速、准确地测定多种β-受体激动剂的残留量。串联质谱在电喷雾(ESI+)，多反应监测(MRM)模式下，进行质谱定性和定量分析，比液相检测方法灵敏、快速。该方法的定量限(LOQ)大多在 0.5 ug/kg以下，完全可以达到出口欧盟和日本残留限量的要求。 1概述 β2-受体激动剂是指含氮激素中的苯乙胺类药物(phenethylamines， PEAs) 苯乙胺类药物具有苯乙醇胺结构母核，苯环上连接有碱性的β-羟胺侧链。 盐酸克伦特罗属于运动员药物管制的β2-受体激动剂， ，E目前，β2-受体激动剂已有30多种，我国禁止所有βe-受体激动剂用于养殖业。农业部 235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》规定在所 有食用动物的所有可食组织中不得检出此类药物。近年来，非法使用盐酸克伦特罗(非法用于养殖时俗称“瘦肉精”)饲养生猪事件屡禁不绝，严重危害食品安全和人民群众身体健康。一些不法养殖户转向购买人用盐酸克伦特罗或其他β2-受体激动剂直接饲喂生猪。本文在已有的方法基础上改进了仪器方法，利用 Agilent 6410 串联质谱同时测定九种β2-受体激动剂。实验证明该方法快速、简单，灵敏度高，完全达到了出口欧盟和日本的检测要求。 2试剂 2.1试剂 标准品化合物的结构见 Fig 1。乙腈购买于Burdick & Jackson公司(CAS 75-05-8，Muskegon，USA)， 甲酸购买于 Merck公司(Germany)，甲酸铵购买于 Acros Organics 公司。水为 Milli Q。 Fig 1. 几种βz-受体激动剂的结构 准确称取适量的标样，用乙腈分别配制成标准贮备液，-18℃避光保存。使用前，用起始流动相的溶液稀释至所需要的浓度。 实际样品的前处理参见国标。 2.2 液相条件 采用Agilent 1200 RRLC 液相色谱仪，配置有G1379B 脱气机， G1312B二元泵， G1367A 自动进样器。色谱柱： Agilent SB-C18， 2.1 mm x 100 mm，1.8 um。流动相组成A 为A-10mM AmmoniumFormate+0.1% Formic Acid 水溶液(用乙酸调节pH值4.5)，B为乙腈溶剂。流速0.3mL/min，柱温40℃。梯度条件为表1： 2.3 质谱条件 Agilent6410 串联四极杆质谱仪，配置了 ESI 表1.液相色谱梯度条件 Time A B Flow-Rate(mL/min) 0 99 1 0.3 5 10 90 0.3 8 10 90 0.3 8.1 99 1 0.5 14 99 1 0.5 14.1 99 1 0.3 离子源。在ESI 正离子化模式下，采集数据，设定质谱参数如下： Capillary 4000 V， Drying Gas 11L/min， Neb Press 35 psi， Gas Temp 350℃， 碰撞气为高纯氮气，Q1和Q3的分辨率均为单位质量分辨。MRM模式下的参数如下表2： 表2.MRM模式下的质谱参数 Time Compound Precursor Product Dwell Fragmentor Collision (ms) (V) Energy (V) 4.95 Terbutaline 226 152 10 100 15 170 10 100 30 4.98 Zilpaterol 262 244 10 100 10 185 10 100 25 4.98 Salbutemol 240 222 10 100 5 148 10 100 15 5.04 Cimaterol 220 202 10 80 5 160 10 80 15 5.80 Ractopamine 302 284 10 100 10 164 10 100 15 6.15 Tulobuterol 228 119 10 100 30 172 10 100 10 6.18 Clenbuterol 277 203 10 100 10 259 10 100 5 6.37 Bromobuterol 367 349 10 100 10 293 10 100 15 6.49 Clenpenterol 291 203 10 100 15 273 10 100 5 6.52 Mabuterol 311 237 10 100 15 293 10 100 10 6.83 Mapenterol 325 237 10 100 15 217 10 100 25 3.1化合物的质谱参数优化 标样在不同Fragmentor 下的 EIC比较其响应值，确定优化的 Fragmentor值。 标样在不同碰撞能量条件下，做MS/MS谱。由于结构上的差异，各自产生碎片离子所需要的碰撞能量都不相同。 3.2标准曲线和线性范围 用配制成相当于浓度为0.1，0.5，1，5，10，的混合样品的系列标准溶液。按照前面的方法进行LC/MS/MS分析，建立标准曲线。以待测物质浓度(C) Terbutaline 为横坐标，待测物的质谱峰面积(Y)为纵坐标，忽略原点，以1/y权重进行回归计算，求得的直线回归方程即为标准曲线。相应的的线性回归方程见下图。 Zipaterol Ractopamine Tulobuterol 01.clenb.. 01.clenbuterol Results Clenpenterol Type： Lin -Origin： Ien Weight： 1kx- 06.bromobuterol-5 Levels，5 Levels Used，5 Points， 5 Points Us8×105y=10954.7042*x +311.9727R^2=0.98220384 ：ds1.2-ay 1.1-1-0.9-0.8-07-0.6-0.5-0.4-0.3- 0.2- 0.1- 0- -0.1- 012345678910 Acquisition Time [min] Concentration ng/ml) Mabuterol Sample 11. mapen.. 11.mapenterol Results 3.3 方法的精密度和准确度 Name 1ype Level Exp. Conc. RT Resp. Calc. Conc. Accuracy 用起始流动相溶液配制成相当于浓度为 4ng/mL的混合物待测样品，进行 LC/MS/MS分析，每一农度进行6次分析，所得的 RSD 均小于5%。 Fig 3.校准曲线 Compound RSD，% Terbutaline 1.44 Zilpaterol 1.99 Sabutemol 2.50 Cimaterol 2.03 Ractopamine 2.18 Tulobuterol 3.44 Clenbuterol 1.90 Bromobuterol 1.75 Clenpenterol 2.22 Mabuterol 2.55 Mapenterol 1.42 3.4实际应用 根据中华人民共和国国家标准中有关的前处理方法，实际添加了4ppb的样品，经萃取、净化等步骤，最后测得的回收率见下表。 Compound Recovery (%) Terbutaline 78.8 Zilpaterol 87.4 Sabutemol 110.2 Cimaterol 96.4 Ractopamine 92.7 Tulobuterol 88.8 Clenbuterol 101.7 Bromobuterol 93.0 Clenpenterol 90.7 Mabuterol 100.0 Mapenterol 99.6 Fig 4. 0.5ppb的βz受体激动剂测得的谱图 Compound S/N (p-p) Terbutaline 374.6 Zilpaterol 39.0 Sabutemol 1759.8 Cimaterol 48.8 Ractopamine 1539.0 Tulobuterol 7.1 Clenbuterol 30.2 Bromobuterol 53.8 Clenpenterol 43.0 Mabuterol 15.8 Mapenterol 58.5 0.5ppb的βz-受体激动剂的信噪比 3结论 利用安捷伦6410高效液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)方法可以快速、准确地测定β-受体激动剂的残留量，完全可以达到出口欧盟和日本残留限量的要求。 ( 参考文献 ) Agilent 6410 LC/MS串联四极质谱分析蜂蜜中的氯霉素 由于农、兽药的残留可引起人类的癌症、畸形、抗药性及某些中毒现象，所以国家对食品安全极为重视。美国 FDA 公布的禁止在进口动物源性食品中使用的11种药物名单，具体包括磺胺类药物，1999年10月开始，欧盟对不少磺胺类抗球虫药也颁布了禁令。氯霉素(CAP)是一种高效广谱抗生素，在美国、加拿大和欧盟，氯霉素严禁用于产肉动物，蜂蜜和动物饲料中。其浓度应在 0.3 ppb以下。 在目前所有的检测氯霉素残留的方法中，LC/MS/MS 以其无须衍生化，样品的制备简便，灵敏度高等特点而成为氯霉素残留的主要测试方法。为了满足越来越高的检测要求，需要开发出与之相应的检测方法， LC/MS/MS 成为其最有效的方法之一。 而采用电喷雾负离子模式，以五氘代氯霉素作为内标，可以校准由于样品提取过程以及基质带来的误差。应用内标法，可以可确的定量检测 50 ppt的浓度。样品经过固相萃取，流动相只用甲醇水以减少质谱的维护频率。 实验 试剂 ( Agilent AccuBond SPE ENV PS DVB 萃取柱 (P/N 188-3060) ) ( 乙酸乙酯(Burdick and Jackson， Morristown，NJ) ) ( 甲醇HPLC 级(Burdick and Jackson) ) ( 水(18MW) Milli-Q级 ) ( 氯霉素(C A P)(Aldrich Chemical C o. Milwaulkee， WI) ) ( 氛代氯霉素(d5) CAP 内标(Cambridge Isotope ) ( Laboratories CIL，Andover， MA， U.S.)针头式过滤器 (0.2cm， PTFE) (Agilent P/N ) ( 方法概述 ) ( 内标配制 ) ( 1. A 100-g/mL (100 ppm) CAP-d5标准甲醇溶 液购自 Ca m bridge Isotope Laboratories， Inc.(Lot SCCE-005) ) 2.以甲醇 1：100 稀释得到1 g/mL (1 ppm)或1000 ng/mL CAP-d5 的内标溶液 ( 3.再以甲醇1：100 稀释得到(用于加入样品中) 10 ppb CAP-d5的内标溶液 ) 4.每一克样品加入25 oL CAP-d5 内标溶液，使得内标最终浓度为 0.25 ppb 标样制备 1.称重，以甲醇溶解制备 100-og/mL标准 CAP溶液， 5.0 mg CAP 加入 50 mL甲醇 2.以甲醇1：100稀释得到1 g/mL (1 ppm)CAP 3. 加入25 L CAP-d5 稀释液 4.配制：1 ppb，0.2 ppb， 0.1 ppb， 0.02 ppb，和0.01 ppb，内标浓度为 0.25 ppb 样品制备 所有 SPE 小柱用2mL活化 1.蜂蜜，1g样品用5mL水稀释并加入25L10 ppb 内标液。此溶液转入 SPE 小柱放置 5 min 后以 10 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液。40℃氮吹挥干溶剂，残渣以1mL甲醇超声 1 min 溶解。以针头式过滤器过滤，进样分析。 2.虾，1g虾样解冻混混，加入3 mL水和 25L10 ppb 内标液，离心5 min (8，000 rpm)。上清液上柱静置5min， 以5 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液。40℃氮吹挥干溶剂，残渣以1mL甲醇超声1 min溶解。以针头式过滤器过滤，进样分析。 LC/MS条件 液相色谱为 Agilent 1200-SL 二元泵带自动进样器。质谱为 Agilent 6410 LC/MS 三重串连四极杆质谱。参数如下： 表1. LC/MS 条件 HPLC 色谱柱 ZORBAX SB-C18， 2.1x50 mm， 1.8 ocm(p/n827700-902) 流量0.4 mL/min流动相A： 水B：甲醇 梯度 0-5 min， 30~70%B 5-6 min，70~100% B 8 min， 100% B 后运行时间 4 min柱温 45℃进样体积 5 odLMS源设置离子源 ESI 极性 负极性 干燥器温度 350℃ 干燥器流量 10 L/min 雾化器压力 45 psi 毛细管电压 3500V Fragmentor 100V 碰撞能 m/z 257(定性离子)10V m/z 152(定量离子) 15V 表2.结构及碎裂离子 CAP and CAP-d5 (*CAP-d5 内标氛代位置) 结果及讨论 谱图质量及标样灵敏度 表2列出了鉴定计分系统中所用氯霉素的结构和用于定量和确认的碎片离子[6] 为得到最高灵敏度，只需优化仪器的两到三个参数，即 fragmentor 电压，以获得母离子最高的传输效率；碰撞能，以使得定量、定性离子信号最强，以及 Veap毛细电电压，保证产生最大的离子数目。 质谱条件优化 图1结果随 Vcap 的变化，此参数的影响很小，只在 3，500V时有少许增加，最后采用此值。 fragmentor 变化范围为90 V-160 V， 120V以上，可观察到碎片离子并且母离子信号明显降低。160V时，没有 m/z 321 离子观察。结果表明，fragmentor 100Ⅴ时，母离子信号最强。最终，用子离子扫描测母离子 m/z 321随不同碰撞能(CE)的变化，碰撞能自2V，5V，8V， 10 V， 15 V， 18V直到40V。 比较提取离子色谱图，表明定量离子 m/z 257在碰撞能10V，定性离子m/z 152 在碰撞能15V响应最大。在这两个能量时子离子质谱图见图二和图三。如表三所示代内标用相同的碰撞能。 图2. product ion spectrum of m/z 321 10 V collision energy. Compound Transition Dwell time Fragmentor Collision MS2 (ms) Voltage(V) Energy(V) resolution CAP 321-257 200 100 10 Unit 321-152 200 100 15 Unit CAP-d5 326-262 200 100 10 Unit 326 一一节157 200 100 15 Unit 重现性 用蜂蜜基质加标0.1 ppb 为例，进样提取物15次。表四为样品及内标的定性、定量离子的峰面积。每个离子的平均峰面积波动为8%，离子比率变化 为5%，远低于离子比率50%可波动20%的要求。Masshunter 定量软件可列表这些结果并给出图示如图四。 Table 4. Integrated Areas of the Quantitation Ion and Qualifier lon and Their Associated Internal Standard Ion Chloramphenicol d5-chloramphenicol Quantitative Qualifier Ratio Quantitaive Qualifier Ratio ion(321-152) ion(321-257) ion(326-157) ion(326-262) 350 165 47.1 262 121 50.4 2 346 157 45.2 258 114 55.3 3 346 158 44.6 259 118 49.4 4 313 164 52.3 267 127 47.6 5 301 154 49.5 261 121 46.4 6 313 168 53.6 253 124 49.0 7 320 160 50.1 228 111 48.6 8 326 145 44.5 225 113 50.4 9 317 141 44.5 241 117 48.6 10 290 135 46.6 226 107 47.1 11 300 138 46.2 253 90 45.7 12 281 136 48.4 240 90 47.6 13 303 143 47.3 220 101 45.9 14 290 140 48.3 214 107 49.8 15 261 131 50.3 217 101 46.6 RSD 8.11% 8.30% 5.91% 7.67% 9.99% 4.83% 图4. Panels A and B show the CAP and IS peak for the quantitation transition. Panels C and D are the graphic representationof quantitation ion and qualifier ion ratio as shown by MassHunter software. 线性 该方法测定了溶剂标样和基质标样线性，自10 ppt 至1 ppb，包括了低于要求最低性能限 (MRPL) 和更高浓度。图5至图8为线性图示， r2 均大于 0.999。 图5. Linearity of CAP in solvent from 10 ppt to 1 ppb. 图6. Linearity of CAP in honey from 10 ppt to 1 ppb. Relative Responses 图 7. Linearity of CAP in shrimp from 10 ppt to 1ppb. 图8.Linearity of CAP in chicken from 10 ppt to 1 ppb. 灵敏度 回收率 10 ppt溶剂标样，进样量5L，可得到很好的灵敏度。 MRM 色谱图见图9.尽管这已展现了仪器的灵敏度，但测定真实样品基质中的灵敏度仍很重要。图10为加样 10 ppt， 进样5的色谱图。不仅可测到分析物，而且离子比率仍在允许范围之内。 回收率的测定，是将氯霉素加入到三种样品基质中，之后用指定的 SPE 柱萃取分析。表5是萃取和分析的重现性以及平均回收率。提取前加入内标，会自动校准回收率。因此，方法的定量准确度非常好。回收率的结果表明方法总体有效。 Abundancevs. Acquisition Time (min) 图9. MRM chromatogram of 10 ppt CAP in solvent with injection volume of 5 o. Table 5. Recovery of CAP at 0.1 ppb Where Three Sample Aliquots of Each Matrix Were Spiked and Determined Honey Shrimp Chicken (n=3) (n=3) (n=3) RSD (%) 6.29 3.93 3.29 Recovery(%) 89.5 85.4 86.4 本方法所述的在三种基质中的氯霉素的分析表明，方法有效，可满足低于0.3 ppb MRPL 下的定量和确认。方法优化简便，仅需调整质谱仪的几个参数，另外可满足认证方法的要求，包括灵敏度，重现性和回收率。安捷伦6410 LC-MS/MS串联四极杆完全适合分析氯霉素。 References ( 1. Chemical Safety Information from Intergovern mental Organisations (IPCS-INCHEM)， Web page http：//www.inchem.org/documents/jecfa/ jecmono/v33je03.htm ) ( 2. S . Turnipseed， et al. (2002) Confirmation of Multiple Phenicol Residues in Honey byElectrospray LC/MS， Laboratory Information Bulletin (4281) U.S . Food and Drug Administration. ) 3. A. Pfenning， et al. (2002) Confirmation ofMultiple Phenicol Residues in Shrimp byElectrospray LC/MS， Laboratory InformationBulletin (4284) Food and Drug Administration. 4.上..B.K. Neuhaus， et al. (2002) LC/MS/MS Analysisof Chloramphenicol in Shrimp， LaboratoryInformation Bulletin (4290) Food & DrugAdministration 5.P. Mottier， V. Parisod， E. Gremaud， P. A. Guy，and R. H. Stadler. Determination of theantibiotic chloramphenicol in meat andseafood products by liquid chromatography-lectrospray ionization tandem massspectrometry. Journal of Chromatography A2003， 994，(1-2)， 75-84. 6. Commission， E.，2002/657/EC： Commission Decision of 12 August 2002 implementing CouncilDirective 96/23/EC concerning the performanceof analytical methods and the interpretation ofresults (Text with EEA relevance)(notified under document number C(2002) (3044) 2002. 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极质谱联用测定饲料中苏丹红 (Sudan Red)含量 b)柱温：25℃； 1范围 本方法介绍了饲料中4种苏丹红的液相色谱-三重串联四极质谱的测定。 2试剂 2.1所有试剂均为色谱纯 2.2标准溶液 2.2.1标准储备溶液 分别称取适量(精确至0.1mg)每种苏丹红(I、II、III和IV)标准品至 10 mL容量瓶中，根据标准品的溶解度选甲醇、乙腈等溶剂溶解并定溶至刻度。 3仪器 Agilent 1200 RRLC (Rapid resolution liquidchromatography，快速高分离度液相色谱)； Agilent 6410 QQQ(三重串联四极杆质谱)。 4测定步骤 4.1测定 4.1.1色谱条件 a)色谱柱： Agilent SB-C18，2.1mmx50mm，1.8ocm： c)进样量：2oL； d)流动相及流速见表1： e)后运行时间：6 min； 4.2.2质谱条件 a)电离源模式：电喷雾离子化( ESI)； b)电离源极性：正模式； c)雾化气：氮气； d)雾化气压力：50 psi； e)离子喷雾电压：4000V； f) 干燥气温度：350℃； g)干燥气流速：10L/min； h)分辨率：Q1(unit) Q3 (unit)； 4.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种药品及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的两对离子及丰度比也一致，则可判定样品中存在这种苏丹红残留。 4.2.4定量测定 本方法中LC/MS/MS采用外标校准曲线法进行定量测定，并且所测样品中苏丹红残留的响应值均在线性范围内。 表1.流动相及流速选择 步骤 总时间/min A： 水(0.1%甲酸)/(%) B：乙腈(0.1%甲酸)/(%) 流速/(mL/min) 1 0 40 60 0.4 2 5 0 100 0.4 3 9 0 100 0.4 4 9.1 40 60 0.4 5结果计算 LC-QQQ测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由 Mass Hunter 定量软件QuantitativeAnalysis 计算生成。苏丹红线性浓度范围分别为I： 0.1-100 ng/mL，R²=0.996； II： 0.1-100 ng/mL， R2=0.993； III： 0.5-100 ng/mL， R2=0.993和ⅣV： 0.5-100 ng/mL， R=0.994。所有线性权重皆为1/y2。 4种苏丹红保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量见表2. 表2.4种苏丹红保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量 序号 英文名称 保留时间/min 定量离子 定性离子 源内碎裂电压/V 碰撞气能量/V 检出限(cg/kg) 1 苏丹红1 5.08 249/93 249/93：249/156 120 25：15 0.02 2 苏丹红Ⅱ 6.61 277/121 277/121；277/156 100 20；15 0.02 3 苏丹红Ⅲ 7.43 353/77 353/77；353/156 140 25；20 0.1 4 苏丹红 IV 8.57 381/91 381/91：381/224 100 30：20 0.3 4种苏丹红标准品 0.5 ng/mL的总离子流图与 MRM 定量离子流图，见图1： 图1.4种苏丹红标准品0.5 ng/mL的总离子流图与 MRM定量离子流图 图2.谷物基质中4种苏丹红的总离子流图与MRM定量离子流图 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极质谱仪测定二甘醇(Diethylene Glycol， DEG) 含量 1范围 本方法介绍了二甘醇的液相色谱-三重串联四级杆质谱的测定。 2试剂 2.1所有试剂均为色谱纯。 2.2标准溶液 2.2.1标准储备溶液 分别称取适量(精确至0.1 mg)二甘醇标准品至10 mL容量瓶中，根据标准品的溶解度选甲醇溶解并定溶至刻度。 3仪器 Agilent 1200 RRLC (Rapid resolution liquidchromatography，快速高分离度液相色谱)； Agilent 6410 QQQ(三重串联四极杆质谱). 4测定步骤 4.1测定 4.1.1色谱条件 a) 色谱柱： Agilent SB-Aq-C18， 2.1 mm×150 mm，3.5om： c)进样量： 50 L； d) 流动相及流速见表1： e)后运行时间：6min； 4.2.2质谱条件 a)电离源模式：电喷雾离子化(ESI) b)电离源极性：正模式； c)雾化气：氮气； d) 雾化气压力：40 psi； e)离子喷雾电压：4000V； f)干燥气温度：350℃； g)干燥气流速： 8L/min； h)分辨率： Q1 (unit) Q3 (unit) 4.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种药品及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的两对离子及丰度比也一致，则可判定样品中存在二甘醇残留。 4.2.4定量测定 本方法中 LC/MS/MS 采用外标校准曲线法进行定量测定. 表1.流动相及流速选择 步骤 总时间/min A：水 (0.1%甲酸+5mM乙酸铵)/(%) B：甲醇 (0.1%甲酸)/(%) 流速/(mL/min) 1 0 95 5 0.4 2 0.5 95 5 0.4 3 3.0 70 30 0.4 4 4.0 70 30 0.4 5 4.1 95 5 0.4 5 结果计算 LC-QQQ测定用用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由 Mass Hunter 定量软件 Quantitative Analysis 计算生成。二甘醇线性浓度范围 5.0-200ng/mL，R2=0.996。线性权重为1/y。二甘醇保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量见表2. 表2.二甘醇保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量 序号 英文名称 保留时间/min 定量离子 定性离子 源内碎裂电压/V 碰撞气能量/V 检出限(cg/kg) 1 二甘醇 2.53 107/45 107/45107/89 70 8；3 0.7 二甘醇标准品的线性结果，见图1 图1.二甘醇标准品的线性结果 二甘醇标准品 10.0 ng/mL的总离子流图与 MRM 离子流图，见图2 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极质谱仪测定邻苯二甲酸酯(Phathalate， DIDP 和 DINP)含量 本方法介绍了 DIDP 和 DINP 的液相色谱-三重串联四极杆质谱的测定。 2试剂 2.1所有试剂均为色谱纯。 2.2标准溶液 2.2.1标准储备溶液 分别别取适量(精确至0.1mg) DIDP 和 DINP标准品于10 mL容量瓶中，根据标准品的溶解度选甲醇溶解并定溶至刻度。 3仪器 Agilent 1200 RRLC (Rapid resolution liquidchromatography，快速高分离度液相色谱)； Agilent 6410 QQQ(三重串联四极杆质谱)。 4测定步骤 4.1测定 4.1.1色谱条件 a) 色谱柱： Agilent SB -C18， 2.1 mmx100 mm，1.8 ocm： c)进样量：20； d) 流动相及流速见表1： e) 后运行时间：3.0min； 4.2.2质谱条件 a)电离源模式：电喷雾离子化； b)电离源极性：正模式； c)雾化气：氮气； d)雾化气压力：40 psi； e)离子喷雾电压：4000V； f) 干燥气温度：350℃； g)干燥气流速：：110L/min； h)分辨率： Q1 (unit) Q3 (unit) 4.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种药品及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的两对离子及丰度比也一致，则可判定样品中存在 DIDP 和 DINP 残留。 4.2.4定量测定 本方法中LC-MS/MS采用外标校准曲线法进行定量测定。 表1.流动相及流速选择 步骤 总时间/min A：水(0.5%甲酸+10mM乙酸铵)/(%) B：乙青(0.5%甲酸)/(%) 流速/(mL/min) 1 0 70 30 0.5 2 5.0 50 50 0.5 3 5.1 15 85 0.5 4 7.0 15 85 0.5 5 7.1 70 30 0.5 5结果计算 LC-QQQ测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由 Mass Hunter 定量软件 Quantitative Analysis 计算生成。DIDP 和 DINP线性浓度范围1.0-10 ng/mL，R2=0.999。线性权重为1/y。 DIDP 和 DINP 保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量见表2. 表2. DIDP 和DINP保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量 序号 英文名称 保留时间/min 定量离子 定性离子 源内碎裂电压/V 碰撞气能量/V 检出限(cg/kg) 1 DINP 5.34 419/149 419/149；419/71 120 15；20 0.17 2 DIDP 5.64 447/85 447/85；447/149 100 35；20 0.07 DIDP 和 DINP标准品 1.0 ng/mL的总离子流图与 MRM 离子流图，见图1 图1. DIDP和DINP标准品 1.0 ng/mL的总离子流图与 MRM定量离子流图 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极杆质谱仪测定湖水中的微囊藻素(Microcystein，RR、YR和LR) 本方法介绍了湖水中微囊藻素(RR、YR 和LR)的液相色谱-三重串联四极杆质谱的测定。 2试剂 2.1所有试剂均为色谱纯。 2.2标准溶液 2.2.1标准储备溶液 分别称取适量(精确至0.1 mg) DIDP和 DINP标准品至10mL容量瓶中，根据标准品的溶解度选甲醇溶解并定溶至刻度。 3仪器 Agilent 1200 RRLC (Rapid resolution liquidchromatography，快速高分离度液相色谱)； Agilent 6410 QQQ(三重串联四极杆质谱)。 4测定步骤 4.1测定 4.1.1色谱条件 a) 色谱柱： Agilent SB -C18，2.1 mm ×100 mm，1.8 ocm： c)进样量：100； d)流动相及流速见表1： e)后运行时间：3.0min； 4.2.2质谱条件 a)电离源模式：电喷雾离子化(ESI) b)电离源极性：1正模式； c)雾化气：氮气； d)雾化气压力：45 psi； e)离子喷雾电压：4000V； f)干燥气温度：350℃； g)干燥气流速：：110L/min； h)分辨率： Q1(unit) Q3 (unit) 4.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种药品及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的两对离子及丰度比也一致，则可判定样品中存在RR、YR和LR残留。 4.2.4定量测定 本方法中 LC/MS/MS采用外标校准曲线法进行定量测定，并且所测样品中微囊藻素残留的响应值均在线性范围内。 表1.流动相及流速选择 步骤 总时间/min A：水(0.5%甲酸+10mM乙酸铵)/(%) B：乙青(0.5%甲酸)/(%) 流速/(mL/min) 1 0 70 30 0.5 2 5.0 50 50 0.5 3 5.1 15 85 0.5 4 7.0 15 85 0.5 5 7.1 70 30 0.5 5结果计算 LC-QQQ测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由 Mass Hunter定量软件QuantitativeAnalysis 计算生成。RR、YR和LR线性浓度范围分 别为 RR： 0.1-10 ng/mL， R2=0.99、YR：0.06-30 ng/mLR2=0.99和LR： 0.1-50 ng/mL， R2=0.99。RR、YR和LR保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量见表2。 表 2. RR、YR和 LR保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量 序号 英文名称 保留时间/min 定量离子 定性离子 源内碎裂电压/V 碰撞气能量/V 检出限(og/kg) 1 RR 1.54 520/135 520/135；520/103 80 35；55 0.033 2 YR 2.77 523.5/135 523.5/135；523.5/507 220 15：10 0.033 3 LR 3.62 498/135 498/135 498/861 100 15；15 0.033 RR、YR和LR 标准品的线性曲线，见图1 图1. RR、YR和LR标准品的线性曲线 RR、YR和LR标准品 1.0 ng/mL 的总离子流图。 RR、YR和LR标准品的总离子流图 RR、YR 和LR标准品的 Qualifier Ion ratio， 见图2 图2. RR、YR和LR标准品的 Qualifier Ion ratio 湖水基质中3种微囊藻素的总离子流图与 MRM定量离子流图，见图3 图3.胡水基质中3种微囊藻素的总离子流图与MRM定量离子流图 湖水基质中RR、YR和 LR 的 Qualifier Ion ratio，见图4 图4. RR、 YR和LR 在湖水基质中的Qualifier Ion ratio 安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四级杆质谱仪测定三聚氰胺 (Melamine)i和氰尿酸 (Cyanuric Acid)) 含量 1范围 本方法介绍了三聚氰胺和氰尿酸的液相色谱-三重串联四级杆质谱的测定。 2试剂 2.1所有试剂均为色谱纯。 2.2标准溶液 2.2.1标准储备溶液 分别称取适量(精确至0.1mg)三聚氰胺和氰尿酸标准品至10mL容量瓶中，根据标准品的溶解度选甲醇溶解并定溶至刻度。 3仪器 Agilent 1200 RRLC (Rapid resolution liquidchromatography，快速高分离度液相色谱)； Agilent 6410 QQQ(三重串联四极杆质谱)。 4 测定步骤 4.1测定 4.1.1色谱条件 a)色谱柱： Agilent ZX -NH2， 4.6 mm×150 mm，5.0ocm： b)柱温：25℃； d) 流动相及流速见表1： 4.2.2质谱条件 a) 电离源模式：电喷雾离子化(ESI) b)电离源极性：E：正模式； c)雾化气：氮气； d)雾化气压力：50 psi； e)离子喷雾电压：3500V； f)干燥气温度：350℃； g)干燥气流速：：10L/min； h) Segament： Segament 1/ 0-7min positive forMelamine Segament 2/ 7-10min negative for Cyanuricacid i)分辨率： Q1(unit) Q3 (unit) 4.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种药品及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的两对离子及丰度比也一致，则可判定样品中存在三聚氰胺和氰尿酸残留。 4.2.4定量测定 本方法中LC/MS/MS 采用外标校准曲线法进行定量测定，并且所测样品中三聚氰胺和氰尿酸残留的响应值均在线性范围内。 表1.流动相及流速选择 步骤 总时间/min A： 水 (10mM乙酸铵)/(%) B：乙腈(10mM乙酸铵)/(%) 流速/(mL/min) 1 0 40 60 0.4 2 10.0 40 60 0.4 5结果计算 LC/MS/MS测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由 Mass Hunter 定量软件 Quantita-tive Analysis 计算生成。三聚氰胺和氰尿酸线性浓 度范围分别为 MA： 1.0-100 ng/mL， R2=0.99 和CA：0.5-100 ng/mL，R2=0.99。线性权重为1/y。 三聚氰胺和氰尿酸保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量见表2. 表2.三聚氰胺和氰尿酸保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量 序号 英文名称 保留时间/min 定量离子 定性离子 源内碎裂电压/V 碰撞气能量/V 检出限(cg/kg) 1 三聚氰胺 5.90 127/85 127/85；127/68 100 20；35 0.5 2 氰尿酸 7.96 128/42 128/42：128/85 80 30；5 0.13 三聚氰胺和氰尿酸标准品的线性结果，见图1 图1.三聚氰胺和氰尿酸较正曲线 三聚氰胺和氰尿酸标准品 1.0 ng/mL 的总离子流图与 MRM 离子流图，见图2 液相色谱/串联质谱法 (LC/MS/MS))分分析宠物食品中三聚氰胺 三聚氰胺(Melamine)为白色或无色结晶，通常用于塑料制品中合成树脂的生产中，高温和酸性条件下能引起三聚氰胺转移到食品中。三嗪类农药环丙氨嗪 (Cyromazine)在极端的pH 条件下或者光降解的条件下也能生成三聚氰胺。 近来，不法厂商将三聚氰胺违法添加到宠物食品中引起宠物死亡，引起广泛的关注。因此，如何快速准确的分析食品中的三聚氰胺成为食品企业，食品监管机构和广大民众密切关注的问题。 本文建立了液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)用于宠物食品中三聚氰胺检测的方法，并将其与美国食品药品监督管理局(US FDA)公布的气相色谱质谱(GC/MS)和液相色谱(LC)方法进行了对比，结果发现LC/MS/MS的方法，前处理过程简单，是一种高灵敏度、高选择性的分析方法。 1实验部分 1.1试剂 所有试剂均为色谱纯。。三聚氰胺标准品购买自美国 Sigma-Aldrich 公司(纯度≥99%)， TDFHA(tridecafluoroheptanoic acid，美国 Sigma-Aldrich公司)，三聚氰胺纯品和实际样品由江苏出入境检验检疫局提供。 1.2仪器与操作条件 分析系统由美国 Agilent 公司的1200 SL 型快速高分离液相色谱和6410三重四极杆串联质谱组成；安捷伦 MassHunter 工作站 B.01.00。 1.2.1色谱条件 见结果与讨论部分2.2和2.3. 1.2.2质谱条件 离子源为电喷雾电离(ESI)源，采用正离子检测模式，干燥气温度为350℃，干燥气流速为 10 L/min， 雾化气压力为45 psi， 毛细管电压为4000V，源内裂解电压120V，采用多反应离子监测模式(MRM)，定量离子对为 127/85，碰撞池电压为20V，定性离子对为127/68，碰撞池电压为35V。 1.2样品的制备 称取1g样品，用去离子水定容到100mL，超声提取30 mins，用0.20 cm滤膜过滤，将滤液用去离子水稀释到合适的浓度。 2纪果与讨论 2.1质谱条件的优化 串联四极杆串联质谱能够进行多反应离子监测，最大程度上减小基质的干扰，为目标化合物的分析提供高选择性和高灵敏度。 在本项目中，我们首先研究了三聚氰胺的一级质谱，选择其[M+H]+离子127为母离子，优化的源内裂解电压为120V，然后在碰撞池施加20V的电压，进行产物离子扫描，其产物离子质谱图见图1。经过选择的 MRM 离子对为127/85和127/68，在分别对其碰撞电压进行优化，其中离子对 127/85 的碰撞池电压为20V，离子对 127/68的碰撞池电压为35V. 图1.色谱条件的优化图1M/z127离子的产物离子扫描质谱图(碰並电压：20V) 三聚氰胺为小分子极性化合物，在反相C18色谱柱上基本没有保留，单纯使用反相色谱的方法时，三聚氰胺会和基质共流出，无法进行分析，我们利用三重四极杆质谱的特点，直接进行三聚氰胺标准品和实际样品的分析，得到很好的结果。色谱条件为：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 RRHT柱2.1mm×50mm， 1.8om，柱温40℃，流动相为10%甲醇和90%水(含有20mM的乙酸胺， pH值为5.1)，流速为 0.2mL/min。分析时间为3 min。进样体积为5 cL。图2为50 pg/mL 三聚氰胺标准样品的MRM图。图3为三聚氰胺纯品和实际样品的 MRM图。 2.3反相离子对色谱 本实验还研究了反相离子对色谱-液相色谱串联质谱的方法，通过添加全氟代羧酸 TDFHA， 使得三聚氰胺在反相 C18 色谱柱上得到很好的保留，其保留时间为9.0 min。其色谱条件为： AgilentZorbax Eclipse XDB C18 RRHT柱2.1mmx50mm，1.8om，柱温40℃，流动相为水(A)和甲醇(B)，均含有0.5 mM 的 TDFHA，洗脱梯度为 0 min， 5%B；3 min，5%B；6min，50%B； 7min， 50%B；8 min，95%B；12 min，5%B， 流速为0.3mL/min。分析时间为12min。进样体积为5L。 图2. 50 pg/mL三聚氰胺标准样羊的 MRM 图 图3.三聚氰胺纯品(A)和实际样品(B)的MRM图 对于标准样品没有发现明显的离子抑制效应。对于实际样品，为了减少样品基体的干扰，在稀释后的溶液中添加了 TDFHA，添加比率为 50 L 250 mMTDFHA到1ml样品中。 3结论 本文建立了两种液相色谱串联质谱分析宠物食品中三聚氰胺的方法，由于三重四极杆的特性，在基本没有保留情况下，没有发现基质对于三聚氰胺的干扰，其灵敏度到达了 50 pg/mL。当使用 TDFHA作为反相离子对试剂时，三聚氰胺的保留时间为9.0 min. 使用本方法，不需要进行衍生化，简化了样品处理的步骤，与气相色谱质谱联用和液相色谱相比，本方法具有高灵敏度和高选择性的特点，适合于宠物食品中三聚氰胺的快速筛查和定量分析。 ( 参考文献： ) ( [1] J.V. Sancho*， M. Iba’nez， S. Grimalt， O’.J. Pozo，F. Herna'ndez. Analytica Chimica Acta 530 (2005)237-243 ) 在食品分析中无论您寻求什么解决方案，安捷伦均可帮助您找到 残留 水果和蔬菜中的农药 肉和鱼中的兽药 植物和肉类食品中的激素 动物饲料中的残留 污染物 真菌毒素 重金属 食品过敏原 丙烯酰胺 多环芳烃(PAHs) 全氟辛酸(PFOA)和全氟辛烷磺酸(PFOS)多氯联苯(PCB) 添加剂和天然产物 香料 维生素和矿物质 糖 脂肪和反式脂肪 保健食品 其它测试 真实性，来源和参杂营养标签准确性功能食品的生物活性食品和饲料QA/QC 您可以从下面的网站下载这些和其它食品安全应用方面的信息： www.agilent.com/chem/FoodSafety 食品安全相关法规资料及网址 欧盟将强化黄曲霉毒素监控(http：//www.food.gov.uk/) 2006年9月14日，英国食品标准局报道，欧盟将加强黄曲霉毒素(Aflatoxin)监控，新决议2006/504/Ec 从10月1日起执行。近年来，欧盟采取了一系列严格措施控制进口食品中的黄曲霉毒素。主要针对来自中国和埃及的花生及其制品，伊朗的开心果 (pistachio) 及其制品，土耳其的干无花果、榛果和开心果及其制品，巴西的去壳巴西坚果等。 美国制定杀虫剂茵多杀限量最终法规(http：//www.epa.gov) 2006年8月28日美环保署(EPA)宣布制定杀虫剂茵多杀限量最终法规。本法规对鱼内/表茵多杀 (Endothall)及其甲基酯(monomethylester) 的混合残留制定了 0.1ppm 的限量。修订了茵多杀 (Endothall)的残留，以茵多杀(Endothall) 及其甲基酯计。本法规已于2006年8月16日生效。 日本肯定列表制度(参见 http：//www.cac.org.cn) 日本政府根据修订后的《食品卫生法》，计划于2006年5月29日起正式施行《食品残留农业化学品肯定列表制度》，对食品、农产品中所有农业化学品残留物都作了明确规定。“肯定列表”制度规定的农业化学品涉及我国对日出口的绝大部分食品、农产品，共799种， 其中，512种农药、182种兽药、34种兼做农药和兽药、16种兼做兽药和饲料添加剂、1种兼做农药和饲料添加剂、64种饲料添加剂。其中15种农药、兽药禁止使用；797种农药、兽药及饲料添加剂设定了53862个限量标准(包括“现行标准”和“暂定标准")；对没有设定限量标准的，执行“一律标准”，即含量不得超过 0.01 ppm。其中不得检出物质为15种。只有68种天然和化学合成物质(主要是营养剂)做为豁免物质不设限量。从2006年5月29日起，只有符合“肯定列表制度"要求的食品、农产品才能进入日本市场，对我国对日出口食品、农产品是一个新的壁垒，对我国的分析检测技术也是一个新的考验。我国目前仅制订了137种农药的477项残留限量标准，98种兽药658项残留限量标准，还有391种农药、155种兽药没有残留检测方法标准，与日本"肯定列表”的差距极大。 相关网站 国家食品食品安全信息中心 http：//www.fsi.gov.cn 食品安全网 http：//www.foodsafe.net 中国食品药品监督管理局 http：//www.sfda.gov.cn 中国食品安全资源网 hppt：//www.fsr.org.cn/index.asp 中国食品工业信息网 http：//www.sinofood.com.cn/ 英国食品标准局 http：//www.food.gov.uk 美国食品与药品监督管理局http：//www.fda.gov 日本厚生劳动省 http：//mhlw.go.jp 欧盟食品安全局 http：//www.efsa.europa.eu 欧盟在线 http：euripa.eu 欧盟法律 http：//eu-lx.europa.eu/en/index.htm 欧盟食品和饲料安全 http：//ec.europa.eu/food/index_en.htm 农药分析质量判据 http：//ec.europa.eu/food/plant/protection/resources/qualcontrol_en.pdf 中国有关食品安全的部分国家标准 GBT 19649-2005 粮谷中405种农药多残留测定方法气相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱法((2006-10-14实施))； GBT 19648-2005 水果和蔬菜中446种农药多残留测定方法气相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱法(2006-10-14实施)； GBT19650-2005 动物组织中437种农药多残留测定方法气相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱法(2006-10-14实施)； GB/T 18932.23-2003 蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法(2005-10-10实施)； GB/T18932.17-2003 蜂蜜中16种磺胺残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法(2005-10-10实施))； GB/T 19426-2003 蜂蜜、果汁和果酒中304种农药多残留测定方法气相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱法(2005-10-7实施)； GB/T19427-2003 蜂胶中芦丁、杨梅酮、檞皮素、菲醇、芹菜素、松属素、苛因、高良姜素含量的测定方法液相色谱-串联质谱检测法和液相色谱-紫外检测法(2005-9-27实施)； GB/T 18932.24-2005 蜂蜜中中呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法(2005-11-30实施)； GB/T18932.25-2005 蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧萘青霉素、苯唑青霉素、邻氯青霉素、双氰青霉素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法(2005-11-30实施)。 更多信息 有关产品和服务的更多信息，请登录我们的网站： www.agilent.com/chem/cn 在线购买：www.agilent.com/chem/store 查找您所在国家的安捷伦用户中心： www.agilent.com/chem/contactus 中国 仅用于研究。本文中涉及的信息、描述和规格，如有变更，恕不另行通告。 800-820-3278 400-820-3278(手机用户) 安捷伦对本资料中出现的错误，以及由于提供或使用本资料所造成的相关损失不承担责任。 亚太区adinquiry_aplsca@agilent.com ◎安捷伦科技公司2008年3月20日中国印刷 Agilent Technologies 食品安全领域面临的严峻挑战国以民为本，民以食为天，食以安为先。食物是人类赖以生存和发展的物质基础。随着世界贸易、国际旅游的不断增长，食品、人口在各国之间的流动不断增加，使得食品安全性问题越来越全球性。往往在世界一端发生的某类因食品安全问题而爆发的疾病，会很快蔓延到世界的另一端。食品安全已经成为全球关注的重要问题之一，食品安全问题不仅影响人民的生命安全和健康，还涉及到经济的发展、社会的稳定以及国际间的纠纷问题。随着国内市场连续出现的“红心鸭蛋和鸡蛋中苏丹红事件”、“猪肉和多宝鱼中硝基呋喃抗生素超标事件”、“桂花鱼含孔雀石绿事件”、“酱油风波”、“月饼风波”、“瘦肉精事件”、“奶粉事件”， 对食品生产厂商和食品的安全性信心不足。近几年，我国出口日本的鳗鲡鱼及制品已经多次因抗生素超标而被日方退货或销毁；出口欧盟的冻虾仁产品中检出氯霉素而被拒收；出口到美国、日本和欧盟等国有的茶叶、蘑菇、肉类等农产品和食品因出现食品卫生问题；纷纷被进口国退货；我国的冻鸡长期因兽药残留出口欧盟受阻；酱油也由于氯丙醇污染问题影响了向欧盟和其他国家的出口。这一形势依然严峻，货物被扣或被退货不仅使我国蒙受了巨大的经济损失，而且也使得我国食品丧失了良好的信誉。据据道，我国 2003 年我国因食品安全问题受贸易技术壁垒影响的出口额达 95 亿美元。随着日本新的肯定列表制和欧盟新的农副产品进口标准的出台，此类数据近年来还有增加。目前，针对日益严重的食品安全问题，发达国家一般都制定有比较完善的农药残留限量标准和检验方法标准。如食品卫生组织（FAO）、/世界卫生组织（WHO）已经正式颁布了 200 多种农药的 3000 多项 MRL（最大残留水平）值标准；欧盟已制定了 17000 多项农产品的 MRL 值标准；美国共制定了 9000 多项 MRL 值标准；德国已经制定了200 种农药活性成分的 3400 项 MRL 值标准；日本也制定 200 多种农药的近 10000 项 MRL 值标准。德国科研联合会（DFG）制定的多种残留检测方法可检测 325 种农药；美国食品与药品安全管理局（FDA）的多种残留检测方法可检测360种农药；加拿大多种残留分析方法可检测 251 种农药。与发达国家相比，我国农、兽药残留限量标准的制定工作相对滞后。目前，液相色谱三重串联四极杆质谱联用（LC-MS/MS ）技术将高效分离和高灵敏的检测合二为一，成为业界公认的对复杂基质中痕量目标化合物的定量分析的首选仪器。该技术在全球食品分析领域，已被广泛地接受和运用。安捷伦科技一直致力于分析技术及应用的开发，并始终坚持不懈地为用户提供分析解决方案。本应用文集，涵盖了安捷伦1200LC/6410 QQQ MS在涉及食品安全分析领域内的最新方法和数据，并籍此希望能为广大用户在食品分析方面提供参考和帮助。