血清中五氟利多检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-263Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-493 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8050检测血清中氟氟利多含量 LCMSMS-493 摘要：本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用检测血清中五氟利多的分析方法。本方法参考公共安全行业标准 GA/T 1624-2019《法庭科学生物检材中五氟利多检验液相色谱-质谱法》，采用乙酸乙酯液液萃取，氮吹后定容上机分析。该方法特异性好，采用外标法定量，在1-200ng/mL范围内，相关系数为 0.9987。指控样品的峰面积的相对标准偏差小于2%，平行样品的相对相差小于10%，以上均优于标准要求。 关键词：超高效液相色谱 三重四极杆质谱 五氟利多 血清 五氟利多为二苯丁哌啶类衍生物，是口服长效抗精神病药。抗精神病作用与其阻断脑内多巴胺受体有关，还可阻断神经系统-肾上腺素受体，抗精神病作用强而持久，口服一次可维持数天至一周。口服吸收缓慢，24h~72h血药浓度达峰值，7天后仍可自血液中检出。 本文参考公共安全行业标准 GA/T1624-2019《法庭科学生物检材中五氟利多检验液相色谱-质谱法》，建立了建立了采用岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8050定量检测血液中五氟利多的分析方法，供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A与三重四极杆质谱仪 LCMS-8050联用系统。具体配制为： 系统控制器：CBM-20A脱气机： DGU-20 A5输液泵：LC-30AD×2柱温箱：CTO-30A自动进样器： SIL-30AC色谱工作站： LabSolutions Ver 5.97 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱： Shimadzu Shim-pack GIST-HP C18-AQ 100 mm x 2.1 mm l.D.， 1.9 um；；FP/N：227-30807-02；岛津(上海)实验器材有限公司 流动相：A-0.1%甲酸水溶液；B-乙腈 洗针模式：进样前后洗针， External only (进样针外壁清洗)， Rinse Port 流速：0.35mL/min 柱温：40℃进样体积：2uL 洗针液：甲醇/水=1/1(v/v) 样品盘温度：25℃ 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为30%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 5.00 泵 B.Conc 100 6.00 泵 B.Conc 100 6.10 泵 B.Conc 30 8.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式： ESI，正离子模式 加热气流速：10L/min 雾化气流速：3L/min 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ DL温度：250℃ 干燥气流速：10 L/min接口电压：4KV扫描模式：多反应监测(MRM)驻留时间：50ms 碰撞气：氩气270 kPa MRM 参数：见表2 表2 MRM参数 No. 中文名称 英文名称 CAS# 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) 109.15* -24.0 -40.0 -11.0 1 五氟利多 Penfluridol 2 26864-56-2 524.35 149.15 -24.0 -36.0 -23.0 *代表定量离子对。 1.3样品前处理 准确移取1mL血清样品于具盖离心管中，加入1mL水，再加入乙酸乙酯 4.0 mL， 振荡 5min， 8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，用无水硫酸钠脱水后，45℃氮气吹干，残留物用1mL甲醇溶解，过 0.22um 的有机系微孔滤膜后，上机分析。 1.4质控样品制备 1.4.1标准曲线制备 准确移取6份1mL空白血清样品于具盖离心管中，分别向空白样品中添加10 uL 100 ng/mL、300 ng/mL、1 ug/mL、3 ug/mL、10 ug/mL、20 ug/mL 五氟利多标准物质，即样品中五氟利多的浓度为1ng/mL， 3 ng/mL、10 ng/mL、30 ng/mL、100ng/mL、200 ng/mL，按照1.3步骤制备样品，供仪器分析。 1.4.2质控样品制备 准确移取3份1mL空白血清样品于具盖离心管中，一份作为空白样品，另外两份样品分别添加添10uL500 ng/mL 五氟利多标准物质，即样品中五氟利多的浓度为 5 ng/mL， 按照1.3步制制备样品，供仪器分析。 结果与讨论 2.1色谱图 空白血清加标1ng/mL的色谱图，见图1。 图1空白血清加标1 ng/mL的色谱图 2.2特异性 空白血清按照1.3步骤前处理，得到基质空白样品，上机分析， MRM 色谱图见图2。 1 ng/mL 加标样品 空白基质 图2 加标样品(1ng/mL) 和空白样品色谱图 由上图可知，基质空白无干扰峰，，不影响五氟利多的定性定量检测。 2.3线性关系和灵敏度 按照1.4.1制备校准曲线溶液，按照1.2中的分析条件进行测定。以峰面积为纵坐标，血清样品中五氟利多的加标浓度为横坐标，外标法绘制标准曲线。五氟利多的标准曲线图3，线性方程、相关系数表3。 图3 五氟利多标准曲线 表3 线性关系 名称 定量方法 校准曲线 线性范围 准确度 相关系数 (ng/mL) (%) r 五氟利多 外标法 Y=47003.86X+19036.39 1-200 93.09-108.49 0.9987 信噪比计算方式为ASTM，选择目标峰两边0.5min内色谱图计算噪音，校准曲线浓度最低点(1ng/mL加标)的信噪比为170.78，优于标准要求的2 ng/mL 的检出限。 2.4精密度实验 质控样品按照1.4.2步骤前处理，加标浓度为5 ng/mL， 连续6次进样，考察仪器的精密度，保留时间、峰面积和离子丰度比的精密度结果如表4所示。峰面积的相对标准偏差小于2%，优于标准要求。 表4 精密度结果(n=6) 名称 RSD% (QC1) RSD% (QC2) R.T. Area Ratio R.T. Area Ratio 五氟利多 0.096 1.28 2.36 0.10 1.80 3.52 2.5定量计算 质控样品平行处理，每份样品平行进样3次，平均值即为样品的检测结果。两份样品的检测结果计算相对相差(RD)，结果见表5。指控样品 RD为9.26%，满足标准要求的≤20%，表明定量结果准确。 表5样品定量测试结果 名称 平行1 平行2 RD% 五氟利多 4.63ng/mL 4.22 ng/mL 9.26 结论 本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 联用定量测定门血清中五氟利多的分析方法。本文参考公共安全行业标准GA/T 1624-2019《法庭科学生物检材中五氟利多检验液相色谱-质谱法》，本方法线性范围为1-200ng/mL，灵敏度和重复性均满沐标准要求，指控样品相对相差小于20%，满足标准定性定量需求。 岛津应用云 本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用检测血清中五氟利多的分析方法。本方法参考公共安全行业标准GA/T 1624-2019《法庭科学 生物检材中五氟利多检验 液相色谱-质谱法》，采用乙酸乙酯液液萃取，氮吹后定容上机分析。该方法特异性好，采用外标法定量，在1-200 ng/mL范围内，相关系数为0.9987。指控样品的峰面积的相对标准偏差小于2%，平行样品的相对相差小于10%，以上均优于标准要求。