食品中米酵菌酸检测方案(液相色谱仪)

浙江福立分析仪器股份有限公司 食品中米酵菌酸的测定分析报告 一、参考标准： 《食品安全国家标准食品中米酵菌酸的测定》(GB 5009.189-2016) 二、方法原理 样品经过提取、净化、浓缩及过滤后，利用反相高效液相色谱分离，并根据保留时间定性，峰面积外标法定量。 三、试剂和材料 3.1试剂与溶液 3.1.1 甲醇：色谱纯； 3.1.2 冰醋酸：：分析纯； 3.1.3 甲酸：分析纯； 3.1.4 氨水：：分析纯； 3.1.5 水：纯净水； 3.1.6 米酵菌酸标准储备液：100ug/ml。 3.1.7 甲醇-氨水溶液：量取80ml甲醇，加入1.0ml氨水，加水定容至100ml，混匀。 3.1.8 甲酸-甲醇溶液：吸取2.0ml 甲酸于 100ml容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度。 3.2 材料与仪器 3.2.1 高效液相色谱仪：福立LC5090高效液相色谱仪，配备有脱气机、二.二元高压输液泵、自动进样器、柱温箱及紫外检测器； 3.2.2 天平：感量为0.0001g； 3.2.3 平行浓缩仪：：LabTech MultiVap-8； 3.2.4 固相萃取仪； 3.2.5 超声机； 3.2.6 涡旋振荡器； 3.2.7 实验室常用玻璃器皿。 四、标准溶液配制 准确移取米酵菌酸标准储备液(100ug/mL) 3、5、10、20、50、100、200、400uL，用甲醇定容至1mL，摇匀，待测。得到浓度分别为0.3、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0ug/mL 的系列标准溶液 五、试样溶液的配制 干试样经粉碎过0.425mm筛后，称取10g(精确至 0.01g)置于锥形瓶中，加入50ml甲醇-氨水溶液，混匀，室温下避光浸泡1h，置于超声机中超声约 30min，过滤，取滤液25ml 置于平行浓缩仪中以80C浓缩至约3ml，然后将试样全部转移至已活化好的固相萃取柱中，依次用5ml水和5ml甲醇淋洗，弃去流出液，抽干萃取柱，再用6ml甲酸-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于平行浓缩仪中以40℃±0.5℃吹干，然后加入1ml甲醇，涡旋溶解，摇匀，过滤后进行 HPLC 分析。 六、仪器条件 a) 色谱柱： Sunniest C18， 柱长250mm，内径4.6mm，粒径 5um b) 进样量：20uL 七、分析结果 7.1标准溶液典型谱图及结果 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高峰面积 min uAU uAU*s 1 米酵菌酸 19.719 8902.0 273260.8 系统评价表 柱长：250mm 死时间： 峰序 组分名 保留时间 半高峰宽 容量 理论 分离度 拖尾 minl min 因子 塔板 因子 1 米酵菌酸 19.719 0.47814 0.0000 9423 0.000 1.003 7.2标准溶液重复性谱图及结果 7.2.1米酵菌酸标液浓度为 0.3ug/ml的7针重复性谱图及结果 峰序组分名 保留时间保留时间 面积 面积 峰高 峰高 含量 含量 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD [min [%] uAU*s [%] luAUI [%] [mg/L] [%] 1 米酵菌酸 19.754 0.106 3783.9 2.218 121.9 1.458 0.3006 2.043 7.2.2米酵菌酸标液浓度为 10.0ug/ml的7针重复性谱图及结果 峰序组分名 保留时间 保留时间 面积 面积 峰高 峰高 含量 含量 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD [min] [%] LuAU*sJ [%] [uAU] [%] [mg/L] [%] 1 米酵菌酸 19.759 0.042 137683.4 0.233 4485.5 0.498 10.0969 0.233 7.3标准曲线 组分[米酵菌酸]：曲线方程： Wi = 4.75093E-007+1.46323E-009*Ai 校正因子： f0=4.75093E-007， fl=1.46323E-009 相关系数： r^2= 0.99999 7.4检出限 本方法的检出限如下表所示： 浓度1 浓度2 浓度3 浓度4 浓度5 浓度6 浓度7 均值 浓度检出限(ug/ml) 称样量(g) 定容体积(ml) 含量检出限(ug/g) 0.2904 0.3057 0.3049 0.3072 0.2993 0.3018 0.2949 0.3006 0.019 20 0.5 0.001 7.5-干银耳样品2针分析谱图及计算结果 由以上实验结果可知，样品中米酵菌酸含量的结果为未检出。 7.6干银耳样品加标3针分析谱图及计算结果 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 峰型 |min| uAU uAU*s [mg/L」 1 米酵菌酸 19.807 231.1 6818.3 0.5226 BB 总计： 231.1 6818.3 0.5226 896 [min] 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 峰型 minl uAU] uAU*sJ [mg/L] 1 米酵菌酸 19.631 222.8 6829.2 0.5234 0.5234 BB 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 峰型 1 min uAUl luAU*s [mg/L] 米酵菌酸 19.675 224.7 6927.0 0.5305 BB 总计： 224.7 6927.0 0.5305 样品分析结果如下表所示： 样品加标(ug/ml) 加标量ug) 定容体积(ml) 稀释倍数 样品含量(pg) 加标回收率(%) 精密度(%) 0.5226 1.0 1.0 2 0.0 104.5 1.5 0.5234 1.0 1.0 2 0.0 104.7 0.5305 1.0 1.0 2 0.0 106.1 以上数据仅供参考，如有问题，请电话联系。 米酵菌酸标准溶液典型谱图米酵菌酸标准溶液分析数据表