苹果汁中展青霉素的含量测定检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-158Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-470 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045 测定苹果汁中展青霉素含量 LCMSMS-470 摘要：本文使用岛津 LCMS-8045 三重四极杆液质联用仪建立了一种LC-MS/MS 测定苹果汁中展青霉素残留量的方法。样品前处理方法参照《GB 5009.185-2016食品中展青霉素的测定》中的方法进行，果汁样品经过提取和净化之后进行液质联用分析。展青霉素在5-250 ng/mL 范围内线性良好，线性相关系数>0.999，检出限在 0.72 ng/mL， 选 10、100、200 ng/mL三个浓度水平标准工作液，连续6次进样保留时间和峰面积的相对标准偏差在0.056~0.124%和 0.822~1.277%之间，系统精密度良好。同时还考察了空白苹果汁基质加标，回收率在91.9-97.4%之间。 关键词：三重四极杆串联质谱展青霉素 苹果汁 展青霉素又叫棒曲霉素(patulin)，是由青霉属、曲霉属和根霉属等10多种真菌代谢产生的真菌毒素，常见于水果及其制品中，尤其在以苹果为原料的制品中污染风险最高，是影响水果及果汁饮料质量的主要因素之一。展青霉素会对人类的中枢神经系统、消化系统以及肾脏造成不同程度的危害，具有致畸、致癌的作用。因此，建立一种快速简单、准确、灵敏的检测食品中展青霉素的方法意义重大。 苹果酸甜可口是一种常见的水果，富含糖类、蛋白质、维生素等多种营养成分，还含有丰富的锌元素， 能促进身体生长发育，其果汁饮品也深受大家喜爱。目前，世界上多数国家都制定了苹果产品中展青霉素的含量指标。我国《GB 5009.185-2016食品中展青霉素的测定》中也规定了展青霉素的测定方法，该标准中规定了两种检测方法，分别是同位素稀释-液相色谱串联质谱法和高效液相色谱法。 本文使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 和三重四极杆质谱 LCMS-8045 联用系统，参照《GB 5009.185-2016食品中展青霉素的测定》中规定的检测方法，建立了一种可以快速准确测定苹果汁中展青霉素的方法。 实验部分 1.1仪器 岛津 LCMS-8045超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用系统，具体配置：LC-30AD×2输液泵， DGU-20A5R在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-20A 柱温箱， CBM-20A系统控制器， LCMS-8045三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver. 5.96 工作站软件。 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱： Shim-pack Velox SP-C18 (100 mmx2.1 mml.D.， 1.8 um， Shimadzu SGLC P/N：227-32001-03) 流动相：A相-纯水B相-乙腈 流速：0.3mL/min 进样体积：5uL 柱温：30℃ 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为3%，时间程序见表1。 表1 时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 3 4.00 Pumps Pump B Conc. 80 4.50 Pumps Pump B Conc. 80 4.51 Pumps Pump B Conc. 3 6.50 Controller Stop 质谱条件 离子源： ESI (-) 脱溶剂管温度：250℃ 离子源接口电压：-3kV雾化气：氮气3.0 L/min干燥气：氮气10 L/min 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 扫描模式：MRM 加热气：空气10 L/min 驻留时间：100ms 碰撞气：氩气 MRM 参数：见表2 表2 MRM优化参数 中文名 监测离子对 Q1 Pre (V) CE Q3 Pre (V) 展青霉素 153.10>109.00* 30 13 20 153.10>80.90 30 14 28 13C--展青霉素 160.10>115.05* 32 11 40 160.10>86.05 30 15 30 注：*表示定量离子 1.3标准品与试剂 标准品：购于上海安谱，，于-20℃冰箱保存，备用。 试剂： SHIMSEN 228 展青霉素净化柱 (SHIMADZU SGLC P/N：380-00902)，室温保存。 乙酸溶液：取1mL乙酸加入25mL水，混匀。 1.4标准系列工作液： 用乙酸溶液分别配制 1 ug/mL的展青霉素和13C，展青霉素的标准工作液，准确移取展青霉素和13C-展青霉素标准工作液适量，再加乙酸溶液稀释成展青霉素浓度为 5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、250 ng/mL 的系列标准溶液，其中lC，展青霉素同位素内标浓度为 50 ng/mL。 1.5样品前处理 按照《GB5009.185-2016食品中展青霉素的测定》中规定的提取和净化步骤进行，净化方法选择净化柱法。 结果与讨论 2.1标准样品的 MRM 色谱图 Ｑ153.10>109.00 (-) 4.95e3 ISTD 160.10>115.05(-) 图1 展青霉素标准品(5ng/mL) 和同位素内标(50ng/mL) 的 MRM色谱图 2.2线性范围和灵敏度 按照1.2中的分析条件对上述标准系列工作液进行测定，采用内标法定量。。以浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制校准曲线，结果如图2所示。展青霉素在5-250 ng/mL 范围内线性关系良好，相关系数r=0.9999。为了考察仪器灵敏度，选择5 ng/mL 浓度混合标准溶液，按照上述分析条件上机进行测定，以ASTM 作为噪音计算方法，根据 S/N=3 为检出限计算的原则，计算检出限为0.72 ng/mL。 图2 展青霉素校准曲线 2.3精密度实验 不同浓度的混合标准工作液连续进样6次，用于考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表 3所示。结果显示，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.056~0.124%和0.822~1.277%之间，仪器精密度良好。 表3 保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 名称 RSD%(10ng/mL) RSD%(100ng/mL) RSD%(200ng/mL) R.T. Area R.T. Area R.T. Area 展青霉素 0.124 1.277 0.069 0.959 0.056 0.822 2.4回收率实验 以空白苹果汁样品进行加标回收实验，准确称取4g样品，分别添加低、中、高三个浓度水平的展青霉素标准品，按照《GB 5009.185-2016食品中展青霉素的测定》中规定的前处理方法处理样品，计算平均回收率。空白样品色谱图见图3，空白基质中不含展青霉素。加标回收色谱图见图4，各添加水平的平均回收率在91.9-97.4%之间，详见表 4。 Q153.10>109.00(-) 5.28e4 图3 空白基质色谱图 图4 基质加标回收色谱图(50 ug/kg) 表4 展青霉素回收率(n=3) 名称 加标水平(ug/kg) 回收率% 91.9 展青霉素 94.5 200 97.4 结论 本文使用岛津 LCMS-8045 三重四极杆液质联用仪建立了一种 LC-MS/MS 测定苹果汁中展青霉素残留量的方法。样品前处理方法参照 《GB 5009.185-2016食品中展青霉素的测定》中的方法进行，该方法快速简单、灵敏度高，可供相关行业参考。 岛津应用云 展青霉素在5-250 ng/mL范围内线性良好，线性相关系数＞0.999，检出限在0.72 ng/mL，选10、100、200 ng/mL三个浓度水平标准工作液，连续6次进样保留时间和峰面积的相对标准偏差在0.056~0.124%和0.822~1.277%之间，系统精密度良好。同时还考察了空白苹果汁基质加标，回收率在91.9-97.4%之间