红花中有效成分检测方案(液相色谱仪)

天津市兰博实验仪器设备有限公司Lanbo Instrument Tianjin Co.， Ltd 高效液相色谱法测定红花中的有效成分 LabalL G 优质服务成就非凡品质 天津兰博，芷兰之室，风雨博创 红花为菊科植物Carthsmus tinctorius L. 的干燥的根，具有活血通经，散瘀止痛的功效，是传统的活血化瘀中药。现代药理学研究表明，其有效成分为查耳酮苷类化合物，羟基红花黄色素A。本文采用天津兰博实验仪器设备有限公司的高效液相色谱系统建立了羟基红花黄色素A的测定方法，结果表明该方法简便、快捷、稳定、可靠，可用来对红花中的羟基红花黄色素A进行定量分析，为药材的质量评价提供依据。 测试条件 1.1仪器 分析型高效液相色谱仪(HPLC)，由AS3000自动进样器， Lablliance Series Ⅲ高压泵、DAD检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支C18 Kromasil 色谱柱(4.6mm×2250 mm.1，5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱。 1.2试剂和样品 羟基红花黄色素A标准品(中国药品生物制品检定所)，甲醇(色谱纯)，水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂为分析纯，红花样品购自当地药店。 1.3标准溶液配制 精密称取羟基红花黄色素A标准品8.00 mg，加水定容至10 mL，最为标准品溶液，冷藏备用。 1.4供试品溶液的制备 精密称取样品粉末1000 mg， 置于100 mL磨口三角瓶中，加入50 mL水，塞紧瓶塞，称重，在90℃的水浴中提取1h，冷却至室温，沉重，用水补足减湿的重量，过滤。收集滤液，用0.455 pm的纤维驴头过滤，作为样品溶液，冷藏备用。 1.5色谱条件： 色谱柱： Kromasil((4.6 mm×2250 mm.l，51um) 流动相：54%甲醇-0.5%磷酸水溶液醋酸铵缓冲溶液(v/v=40：60) 柱 温：25℃ 流 速：1.0 mL/min 检测波长：400 nm 测试结果： 2.1系统适应性 取标准品溶液和样品溶液分别进样，按1.5的条件进行检测，所得色谱图如图1所示。 图1 标准品(A)和样品(B)的高效液相色谱图 羟基红花黄色素A 2.2线性关系、方法检出限考察 移取羟基红花黄色素A标准品贮备液适量，配制成0.40 g/L的溶液，精密吸去1、2、4、6、8、10mL置于10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，配制成质量浓度分别为0.04、0.08、0.16、0.24、0.32、0.40 g/L的溶液。取上述溶液各20uL， 按1.5所普色谱条件进样分析。以峰面积Y为纵坐标，进样量X(ug)为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程。羟基基花黄色素A的线性回归方程为Y=228562 X-16302，r=0.9997， 线性范围为0.8~8.0ug；以3倍信噪比计算该方法的最低检测限为4 ng. 2.3精密度和重现性实验 取供试品溶液重复进样6次，每次20 uL， 测定峰面积。羟基红花黄色素A峰面积测定结果的RSD为0.92%，表明方法精密度良好。 取样品，按1.4条件制备6份供试品溶液，分别进样20 uL，测定峰面积，计算羟基红花黄色素A含量。含量测定结果的 RSD为1.21%，表明方法重复性良好。 2.4稳定性实验 取样品溶液分别在0、2、4、8、12、24h按1.5的色谱条件进样， (不测时于冰箱4℃冷藏)，测定峰面积。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好，峰面积的RSD分别为2.05%。 羟基红花黄色素A在水溶液中不稳定，在24 h内测定，其峰面积及峰形较稳定，但24 h后测定就有可能出现色谱峰变宽，，出现肩峰，甚至色谱峰分裂为两个峰等情况因此其对照品溶液和样品溶液配制后不宜放置过久。 2.5加标回收率实验 精密称取已知羟基红花黄色素A含量的红花样品，分别加入不同含量的羟基红花黄色素A标准品，按1.4项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。结果如表1。 表1加标回收试验结果 已知含量/mg 添加量/mg 测得值/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/% 7.89 5.30 13.12 98.7 7.85 5.21 13.01 99.0 98.2 1.09 8.01 5.34 13.19 97.0 7.86 8.01 15.83 99.5 7.92 7.98 15.67 97.1 98.77 1.46 7.85 8.13 15.96 99.7 7.95 12.01 19.73 98.1 8.01 11.95 19.86 99.2 98.80 0.62 7.96 11.89 19.74 99.1 结论 采用高效液相色谱法测定红花中羟基红花黄色素A的含量，经过精密度、回收率等实验考查，均符合要求。该方法灵敏，快速，准确，可用于对红花药材的质量进行评价。 电话：Q：网： www.tianjinlanbo.com 邮箱： tianjinlanbo@vip.com 红花为菊科植物Carthsmus tinctorius L. 的干燥的根，具有活血通经，散瘀止痛的功效，是传统的活血化瘀中药。现代药理学研究表明，其有效成分为查耳酮苷类化合物，羟基红花黄色素A。本文采用天津兰博实验仪器设备有限公司的高效液相色谱系统建立了羟基红花黄色素A的测定方法，结果表明该方法简便、快捷、稳定、可靠，可用来对红花中的羟基红花黄色素A进行定量分析，为药材的质量评价提供依据。